The invention relates to a method for preparing octreotide acetate. Specifically, the present invention relates to a method for preparing octreotide acetate, including the following steps: using chloromethyl resin as starting material, preparing Cesium salt from Boc Thr(tBu)OH, connecting amino acids with protective groups in turn according to solid-phase synthesis method, obtaining protective octapeptide resin, in turn removing Boc protective groups with HCl/isopropanol, and conjugating peptides with condensation agent. Reaction; Reduced octreotide was obtained by palladium-carbon/hydrogen reduction, and the peptide chain was cut off at the same time; Reduced octreotide reacted with oxidants and auxiliaries under acidic conditions to form crude octreotide with disulfide bond into rings; The crude octreotide was separated and purified by C18 column, and the excellent octreotide acetate was obtained. The pharmaceutical compositions of octreotide acetate injection and their quality detection methods are also involved. The method of the invention has excellent technical effect, such as high production efficiency, high yield and less impurities compared with the existing method.
【技术实现步骤摘要】
制备醋酸奥曲肽的方法
本专利技术属于医药
,更具体地,本专利技术公开了一种醋酸奥曲肽的制备方法,本专利技术还公开了醋酸奥曲肽的注射液药物组合物。本专利技术制备的醋酸奥曲肽和醋酸奥曲肽注射液药物组合物具有优异的性质,例如本专利技术制备醋酸奥曲肽的方法能够使得其产物中的氧化降解杂质的含量更低,并且方法的制备效率显著更好。
技术介绍
醋酸奥曲肽(OctreotideAcetate)是由八个氨基酸组成的合成多肽,其化学名为:D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-N-[(1R,2R)-2-羟基-1-(羟甲基)丙基]-L-半胱氨酰胺环(2→7)-二硫键醋酸盐,其英文化学名为:L-Cysteinamide,D-phenylalanyl-L-cysteinyl-L-phenylalanyl-D-tryptophyl-L-lysyl-L-threonyl-N-[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)propyl]-,cyclic(2→7)-disulfide;[R-(R*,R*)]acetatesalt,CAS:83150-76-9,其化学结构式和分子式、分子量分别为:或者,其化学结构式为:自1973年Brazeau等从羊下丘脑中分离出生长抑素(Somatostatin,ST)以来,研究者对ST的产生、分布及生物活性作了大量研究,并测定了它的一级结构。随着放射免疫检测和免疫细胞化学的进展,发现ST族激素在体内广泛分布。如中枢神经系统、下丘脑、周围神经系统、胰岛D细胞、胃肠道上皮腺上皮和轴突细胞等。在垂体前叶,ST ...
【技术保护点】
1.测定醋酸奥曲肽例如说明书第一方面所述醋酸奥曲肽或其组合物中的杂质例如氧化降解杂质的方法,该方法包括如下操作:取醋酸奥曲肽或其组合物适量,加水溶解和/或稀释制成每1ml中约含醋酸奥曲肽0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液;照髙效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512的规范进行)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以四甲基氢氧化铵溶液(取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml、三乙氨1ml,加水880ml,用10%磷酸溶液调pH值至5.4)‑乙腈(900:100)作为流动相A,以四甲基氢氧化铵溶液(取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml、三乙氨1ml,加水380ml,用10%磷酸溶液调pH值至5.4)‑乙腈(400:600)作为流动相B;流速为每分钟1ml;检测波长为210nm;按以下方式进行梯度洗脱:0分钟时至30分钟时由流动相A76%‑流动相B24%梯度转变至流动相A63%‑流动相B37%,30分钟时至40分钟时由流动相A63%‑流动相B37%梯度转变至流动相A40%‑流动相B60%,40分钟时至41分 ...
【技术特征摘要】
1.测定醋酸奥曲肽例如说明书第一方面所述醋酸奥曲肽或其组合物中的杂质例如氧化降解杂质的方法,该方法包括如下操作:取醋酸奥曲肽或其组合物适量,加水溶解和/或稀释制成每1ml中约含醋酸奥曲肽0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液;照髙效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512的规范进行)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以四甲基氢氧化铵溶液(取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml、三乙氨1ml,加水880ml,用10%磷酸溶液调pH值至5.4)-乙腈(900:100)作为流动相A,以四甲基氢氧化铵溶液(取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml、三乙氨1ml,加水380ml,用10%磷酸溶液调pH值至5.4)-乙腈(400:600)作为流动相B;流速为每分钟1ml;检测波长为210nm;按以下方式进行梯度洗脱:0分钟时至30分钟时由流动相A76%-流动相B24%梯度转变至流动相A63%-流动相B37%,30分钟时至40分钟时由流动相A63%-流动相B37%梯度转变至流动相A40%-流动相B60%,40分钟时至41分钟时由流动相A40%-流动相B60%梯度转变至流动相A76%-流动相B24%,41分钟时至55分钟时维持在等度流动相A76%-流动相B24%;取醋酸奥曲肽对照品约10mg,置10ml量瓶中,加30%过氧化氢溶液1ml,放置1小时,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液20μl,注入液相色谱仪,理论板数按奥曲肽峰(保留时间约18分钟)计算不低于3000,奥曲肽峰与其相对保留时间约为1.45的氧化降解物峰的分离度应不小于3.0;精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录供试品溶液的色谱图,读取各色谱峰的峰面积,与对照溶液主峰面积比较计算各杂质的含量,如果存在RRT1.45杂质则同样计算其含量。2.制备醋酸奥曲肽的方法,包括如下步骤:以氯甲基树脂为起始原料,将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐,按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸,依次为:Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH,获得保护八肽树脂,其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团,用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应;用钯碳/氢气还原,同时将肽链切落,获得还原型奥曲肽;在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环,获得奥曲肽粗品;奥曲肽粗品经C18柱分离纯化,制得醋酸奥曲肽精品。3.根据权利要求1方法,其中二硫键成环的操作步骤为:将还原型奥曲肽粗品溶于水,在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9,室温通空气24-36小时使二硫键成环,加冰醋酸,加活性碳,过滤,得奥曲肽粗品;例如,在进行二硫键成环的过程中,所用的空气预先依次通过饱和氢氧化钙溶液和2M硫酸溶液处理;或者,其中二硫键成环的操作步骤为:将还原型奥曲肽用4~6倍的50%冰醋酸溶解,然后用纯化水稀释至含冰醋酸25%,搅拌均匀后过滤,得滤液;在搅拌下向该滤液中滴加饱和I2(碘,其量为还原型奥曲肽的1.5~2.0摩尔倍)/冰醋酸溶液,至溶液呈红棕色,继续搅拌30min,再加入用焦亚硫酸钠和碳酸氢钠两者共同饱和的水溶液(其中焦亚硫酸钠的量为还原型奥曲肽的0.02~0.03摩尔倍)至红棕色消失;减压浓缩得到经二硫键形成环的奥曲肽。4.根据权利要求1方法,其中,依次连接具有保护基团的氨基酸,获得保护八肽树脂,其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤:(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制备使Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中,另取碳酸铯加水溶解至澄清,搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液,溶液pH7.5,减压浓缩至干,得糖浆状残留物为Boc-Thr(tBu)-OCs;(2)Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备取氯甲基树脂,用DMF浸泡使树脂溶胀,加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs和DMF使进行反应;过滤,树脂用DMF洗涤二次,纯化水洗涤,无水乙醇洗涤,减压干燥,得Boc-Thr(tBu)-O-树脂;(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备:在步骤(2)的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中,加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM,反应,抽干,分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次,抽干,再加10%三乙胺的DCM溶液(体积比)反应,抽干,DCM洗涤;加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF,将混合物反应,抽干,分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤,抽干,即得;(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(3)的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中,加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM,反应,抽干,分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次,抽干,加10%三乙胺的DCM溶液反应,抽干,DCM洗涤;加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBT、DMF,将混合物反应,抽干,分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次,抽干,即得;(5)Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(4)的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中,加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与...
【专利技术属性】
技术研发人员:王敬,江威,姚波,张莲莲,余茹,吕吉,赵东明,
申请(专利权)人:成都天台山制药有限公司,
类型:发明
国别省市:四川,51
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