醋酸奥曲肽注射液药物组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及醋酸奥曲肽注射液药物组合物及其用途。具体的，本发明专利技术涉及的醋酸奥曲肽注射液药物组合物其包含：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇40~50g、乳酸3~4g、碳酸氢钠适量调pH至3.7~4.7、注射用水适量加至1000ml等。本发明专利技术还涉及醋酸奥曲肽产品及其制备方法。本发明专利技术还涉及测定醋酸奥曲肽或其组合物中的杂质例如氧化降解杂质的方法。本发明专利技术呈现如说明书所述优异技术效果，例如，本发明专利技术原料药在制备过程中生产效率显著的比现有方法更高，注射液的制备过程中药物损失量显著更少，并且在长期稳定性留样中杂质增长速度显著的比现有技术方法更低。

Pharmaceutical Composition of Octreotide Acetate Injection and Its Application

The present invention relates to octreotide acetate injection pharmaceutical composition and its use. Specifically, the octreotide acetate injection pharmaceutical composition of the present invention includes octreotide acetate 0.1g in octreotide, mannitol 40-50g, lactic acid 3-4g, sodium bicarbonate moderately adjusted pH to 3.7-4.7, injection water moderately added to 1000ml, etc. The invention also relates to octreotide acetate product and a preparation method thereof. The invention also relates to a method for determining impurities such as oxidative degradation impurities in octreotide acetate or its compositions. The invention has excellent technical effects as described in the specification. For example, the production efficiency of the raw material medicine of the invention is significantly higher than that of the existing method in the preparation process, the drug loss is significantly less in the preparation process of the injection, and the growth rate of impurities in the long-term stability sample is significantly lower than that of the existing technical method.

【技术实现步骤摘要】
醋酸奥曲肽注射液药物组合物及其用途
本专利技术属于医药
，更具体地，本专利技术公开了一种醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽，以及该醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制法，本专利技术还涉及所述醋酸奥曲肽注射液的制药用途。本专利技术制备的醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽具有优异的性质。
技术介绍
醋酸奥曲肽(OctreotideAcetate)是由八个氨基酸组成的合成多肽，其化学名为：D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-N-[(1R,2R)-2-羟基-1-(羟甲基)丙基]-L-半胱氨酰胺环(2→7)-二硫键醋酸盐，其英文化学名为：L-Cysteinamide,D-phenylalanyl-L-cysteinyl-L-phenylalanyl-D-tryptophyl-L-lysyl-L-threonyl-N-[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)propyl]-，cyclic(2→7)-disulfide；[R-(R*，R*)]acetatesalt，CAS：83150-76-9。自1973年Brazeau等从羊下丘脑中分离出生长抑素(Somatostatin，ST)以来，研究者对ST的产生、分布及生物活性作了大量研究，并测定了它的一级结构。随着放射免疫检测和免疫细胞化学的进展，发现ST族激素在体内广泛分布。如中枢神经系统、下丘脑、周围神经系统、胰岛D细胞、胃肠道上皮腺上皮和轴突细胞等。在垂体前叶，ST抑制生长激素和促甲状腺激素的释放。在胰腺，ST抑制胰岛和胰高血糖素的分泌。ST对胃肠道系统影响广泛，抑制激素，如胃泌素、胰泌素、血管活性肠肽和其它激素的释放，抑制胃酸、胃蛋白酶的分泌，降低内脏血流量和肠活动，降低碳水化合物吸收，增加大肠对水和电解质的吸收。ST还具有细胞保护作用等。因而被认为能够用于治疗某些胃肠道及外科疾病。但ST的体内半衰期非常短，仅有2-3min，需连续静注，并且ST无器官特异性，停药后易引起生长激素等过度分泌，长期应用ST可导致肠道吸收不良和葡萄糖耐受性降低。因此ST的临床应用一直受到限制。在1982年，瑞士Sandoz药厂(现为NovartisCo.)合成了新一代长效型生长抑素类似物醋酸奥曲肽(Octreotide，Sandostatin，SMS201-995，以下简称奥曲肽)。它是一个与ST相似，并除去了ST中的6个氨基酸的肽链。它可与广泛存在于中枢神经系统、垂体和胰腺β细胞等处的ST受体结合产生生物学效应，而且抑制生长激素(GH)、胰岛素、胰高血糖素、胃酸分泌的能力均比ST强，特异性也较高。同时，由于1,4位L-氨基酸分别被相应D-氨基酸取代，8位为氨基L醇，故奥曲肽不易被蛋白酶迅速水解，并延长了体内半衰期，t1/2为80-160min，使用时不需连续静注。因此，奥曲肽除具有ST类似物的抑制功能外，还具有下列特点：(1)对内分泌的抑制作用更强，对生长激素，胰离糖素和胰岛素的抑制作用分别是ST的45倍、11倍和1.3倍。(2)半衰期长：皮下注射半衰期为2h。(3)停药后不发生反跳性高分泌。所以奥曲肽近年来被用于多种疾病的治疗，且副作用相对减少，已广泛应用于消化道肿瘤、上消化道出血、急性胰腺炎、转移性类癌、肢端肥大症等病的治疗。奥曲肽于1988年在新西兰首先上市，上市剂型为注射剂，1989年美国FDA批准在美国上市。醋酸奥曲肽注射液，临床使用可静脉注射、皮下注射、静脉滴注(滴注给药时间可达12小时以上)，其储存方式为2～8℃，避光保存，在室温中(20～30℃)可保存14天，由此可见醋酸奥曲肽溶液稳定性是其产品质量优劣的重要衡量标准。有一些文献公开了醋酸奥曲肽的制备方法。例如，CN103965291A(专利申请号201410228795.1)公开了奥曲肽、奥曲肽醋酸盐的制备方法。该奥曲肽的制备方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将奥曲肽粗品溶液依次进行反相纯化、反相脱盐，即可；高效液相反相色谱法的填料为苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)共聚物。本专利技术将反相纯化和反相脱盐联用，设计出聚合物填料苯乙烯-二乙烯基苯的最新应用，可以大批量制备奥曲肽和奥曲肽醋酸盐。CN103965291A(专利申请号201010165270.X)公开了一种采用固相合成法制备奥曲肽的方法，包括如下步骤：(1)、将N-芴甲氧羰基-O-叔丁基苏氨醇连接到作为载体的树脂上获得N-芴甲氧羰基-O-叔丁基苏氨醇树脂；(2)、按照Fmoc/tBu固相多肽合成的方法，根据奥曲肽的序列，将保护氨基酸按C端至N端的顺序逐个偶联到步骤(1)所得树脂上获得奥曲肽八肽树脂；(3)、使用裂解剂将八肽从所述奥曲肽八肽树脂上切下，得到线性粗肽；(4)、步骤(3)所得线性粗肽经氧化反应形成二硫键，经制备高效液相色谱纯化即得所述奥曲肽，其特征在于：步骤(4)中，所述氧化反应在pH=7.0～7.5以及氧化剂H2O2的存在下进行，其中H2O2与线性粗肽的投料摩尔比为7～9∶1。据信该专利技术采用双氧水来氧化线性粗肽获得奥曲肽，仅需1～3小时氧化反应即完全，与传统的空气氧化法相比，反应时间大大缩短，且奥曲肽产品收率大幅提高，适于大规模生产奥曲肽及其盐。CN103102390A(专利申请号201110352635.4)公开了一种奥曲肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：获得氨基酸序列为D-Phe-Cys的二肽；以树脂为载体，按照固相法合成六肽树脂；所述六肽树脂中氨基酸残基序列为Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol；在碱性条件下，取所述二肽与所述六肽树脂发生缩合反应，切肽制得线性八肽；所述线性八肽的氨基酸残基序列为D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol；步骤2：取所述线性八肽溶于过量的N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中，调整pH值为6.8～8.0，加入过量的氧化剂，在18～30℃环化2～3h，调整pH值为3.5～5.0，纯化后，制得结构如式Ⅰ所示的奥曲肽；其中，Thr-ol是苏氨醇，Cys是半胱氨酸，Thr是苏氨酸，Lys是赖氨酸，D-Trp是D型色氨酸，Phe是苯丙氨酸，D-Phe是D型苯丙氨酸。据信该专利技术提高了奥曲肽的收率及纯度。CN1355173A(专利申请号00134258.4)公开了制备醋酸奥曲肽的方法，其包括：a).将下式三肽R1-D-Phe-Cys(R2)-Phe-OH与下式五肽R3-D-Trp-Lys(R4)-Thr(R5)-Cys(R2)-NH-CH(CH2-OR6)-CH(OR5)-CH3反应生成下式八肽R1-D-Phe-Cys(R2)-Phe-D-Trp-Lys(R4)-Thr(R5)-Cys(R2)-NH-CH(CH2-OR6)-CH(OR5)-CH3在上述三肽、五肽及八肽中，R1＝BOC；R2＝Bzl、4-Me-Bzl或4-MeO-Bzl；R3＝Fmoc；R4＝Z或2-Cl-Z；R5＝Bzl；R6＝CH3-、CH3CH2-、CH3CH2CH2-或CH3CH2CH2CH2-。b).用无水氟化氢脱除a)中所得八肽上所有侧链保护基，得到下式还原型奥曲肽，D-Phe-Cys-Phe-D-Try-Lys-T本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.制备醋酸奥曲肽的方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc‑Thr(tBu)‑OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc‑Cys(Trt)‑OH、Boc‑Thr(tBu)‑OH、Boc‑Lys(Fmoc)‑OH、Boc‑D‑Trp‑OH、Boc‑Phe‑OH、Boc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑D‑Phe‑OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc‑保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应；用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽；将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8‑9，室温通空气24‑36小时使二硫键成环，加冰醋酸，加活性碳，过滤，得奥曲肽粗品；奥曲肽粗品经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。

【技术特征摘要】
1.制备醋酸奥曲肽的方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应；用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽；将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9，室温通空气24-36小时使二硫键成环，加冰醋酸，加活性碳，过滤，得奥曲肽粗品；奥曲肽粗品经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。2.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)中，二硫键成环的操作步骤为：将还原型奥曲肽用3~6倍的50%冰醋酸溶解，然后用纯化水稀释至含冰醋酸25%，搅拌均匀后过滤，得滤液；在搅拌下向该滤液中滴加饱和I2(碘，其量为还原型奥曲肽的1.5~2.0摩尔倍)/冰醋酸溶液，至溶液呈红棕色，继续搅拌30min，再加入用焦亚硫酸钠和碳酸氢钠两者共同饱和的水溶液(其中焦亚硫酸钠的量为还原型奥曲肽的0.02~0.03摩尔倍)至红棕色消失；减压浓缩得到经二硫键形成环的奥曲肽。3.根据权利要求1的方法，其中，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制备使Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物为Boc-Thr(tBu)-OCs；[在本步骤的一个实施方案中，碳酸铯的摩尔数为Boc-Thr(tBu)-OH的1~5倍](2)Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs和DMF使进行反应；过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂[在本步骤的一个实施方案中，Boc-Thr(tBu)-OCs的摩尔数为树脂的1~3倍；在一个实施方案中，氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时]；(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：在步骤(2)的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液(体积比)反应，抽干，DCM洗涤；加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的2~8倍，例如2.5~5.5倍]；(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(3)的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的2~8倍，例如2.5~5.5倍]；(5)Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(4)的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的2~8倍，例如2.5~5.5倍]；(6)Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(5)的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-D-Trp-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的2~8倍，例如2.5~5.5倍]；(7)Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(6)的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的2~8倍，例如2.5~5.5倍]；(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(7)的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的2~8倍，例如2.5~5.5倍]；(9)Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、D...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴国庆，张莲莲，刘灵，刘巧梅，吴敏，冯敏，赵东明，
申请(专利权)人：成都天台山制药有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51