观察木质部薄壁组织的切片混合染色液和切片的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种观察木质部薄壁组织的切片混合染色液和切片的制备方法。该切片混合染色液包括：番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液；其中，番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是30～40:60～70。其中，所述番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的浓度均是0.008～0.012g/ml。该切片混合染色液中番红染色纤维组织，阿尔辛蓝染色薄壁组织，可以同时清晰地观察到染色后的切片的薄壁组织、纤维组织和导管(或管胞)，能够明显区分木质部纤维组织和薄壁组织，相比其他番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液体积比的染色液的染色效果更好，且切片制备时间短，适用于所有木本植物，克服了传统切片方法中染色剂难以通过颜色区分这两种组织的缺点。

Observing the preparation of mixed staining solution and section of xylem parenchyma

The invention discloses a preparation method of slice mixed dye solution and slice for observing xylem parenchyma tissue. The mixed dyeing solution of the section includes saffron ethanol solution and alsine Blue Aqueous solution, in which the volume ratio of saffron ethanol solution to alsine blue aqueous solution is 30-40:60-70. The concentration of saffron ethanol solution and alsine blue solution are 0.008-0.012g/ml. Safranine stained fibrous tissue and Alcin blue stained parenchyma in the mixed staining solution of the section can clearly observe the parenchyma, fibrous tissue and ducts (or tracheids) of the stained section at the same time. It can clearly distinguish the lignocellular fibrous tissue and parenchyma tissue. Compared with other safranine ethanol solution and Alcin Blue Aqueous solution, the staining effect is better. It is suitable for all woody plants because of its short preparation time. It overcomes the disadvantage of traditional slicing method that dyes are difficult to distinguish the two tissues by color.

【技术实现步骤摘要】
观察木质部薄壁组织的切片混合染色液和切片的制备方法
本专利技术是关于一种生物切片制备的
，特别是涉及一种观察木质部薄壁组织的切片混合染色液和切片的制备方法。
技术介绍
制作木质部切片是植物解剖学研究的常用手段。木本植物的木质部主要由导管(或管胞)、纤维组织和薄壁组织组成。薄壁组织是木质部中的活细胞，具有存储、传递水和营养物质的功能，为了加强对植物种间功能、策略差异的研究，现在迫切需要对木本植物薄壁组织的性状进行研究。但是目前常用的制作木质部切片的染色剂对薄壁组织和纤维组织的着色都是纯色，或者二者的颜色区分不明显，所以难以通过颜色区分薄壁组织和纤维组织。比如常用的染色剂有间苯三酚(phloroglucinol)、龙胆紫(gentianviolet)、甲苯胺蓝(toluidineblue)及包含番红(safranin)和快绿(fastgreen)的混合液都无法非常显著、直观地区分开纤维组织和薄壁组织。制备石蜡切片、树脂切片的方法都需要加入包埋剂，加入包埋剂的切片方法往往需要透明、包埋、切片、脱蜡(脱包埋剂)、染色、封片等流程，制备过程较为复杂，往往一批样品做下来需要花费几天的时间，耗时很长。此外，包埋剂浸入植物组织也会破坏薄壁组织这种活细胞的活性，进一步难以区分薄壁组织和纤维组织。番红，也称作番红O、基本红2或藏红T，是用在组织学和细胞学的生物染色剂。阿尔辛蓝，英文名称：AlcianBlue，CAS：12040-44-7：分子式：C56H68Cl4CuN16S4，中文别名：阿尔新兰、阿尔新蓝，具有如下结构式：
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种观察木质部薄壁组织的切片混合染色液，其能够解决现有木质部切片制作方法复杂、耗时时间长且薄壁组织和纤维组织不易区分的问题。为实现上述目的，本专利技术提供了一种观察木质部薄壁组织的切片混合染色液，包括：番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液；其中，番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是30～40:60～70。在一优选的实施方式中，所述番红乙醇溶液的浓度是0.008～0.012g/ml，阿尔辛蓝水溶液的浓度是0.008～0.012g/ml；优选的，所述番红乙醇溶液的浓度是0.009～0.011g/ml，阿尔辛蓝水溶液的浓度是0.009～0.011g/ml；最优选的，所述番红乙醇溶液的浓度是0.010g/ml，阿尔辛蓝水溶液的浓度是0.010g/ml。在一优选的实施方式中，所述番红乙醇溶液的溶剂是体积百分比浓度为40％～60％的乙醇溶液；优选的，所述乙醇溶液的体积百分比浓度为50％。采用该浓度乙醇溶液可使番红溶解效果好，溶解速度快，溶解彻底且无残渣。在一优选的实施方式中，所述阿尔辛蓝水溶液的溶剂选自纯净水、去离子水或蒸馏水中任意一种。在一优选的实施方式中，所述番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是32～37:62～67；优选的，所述番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是35:65。本专利技术的另一目的在于提供一种切片混合染色液的制备方法，所述切片混合染色液为上述任意一种切片混合染色液，制备步骤包括：采用乙醇溶解番红，配制成浓度为0.008～0.012g/ml的番红乙醇溶液；采用纯净水溶解阿尔辛蓝，配制成浓度为0.008～0.012g/ml的阿尔辛蓝水溶液；将所述番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液按体积比30～40:60～70的比例进行混合，配制成所述切片混合染色液。本专利技术的另一目的在于提供一种切片的制备方法，所述切片为木质部切片，包括以下步骤：(1)将新鲜的木质部样品在水中浸泡吸水，得到吸水后的木质部样品；(2)将步骤(1)浸泡后的木质部样品切出横截面切片；以及(3)将所得切片浸入上述任意一种切片混合染色液中进行染色，染色时间为3～5min，然后用梯度乙醇溶液进行脱水，得到脱水染色后的木质部切片。在一优选的实施方式中，上述步骤(1)中，木质部样品在水中浸泡的时间是3min～6h。在一优选的实施方式中，上述步骤(2)中，所述横截面切片的厚度是18～20μm。在一优选的实施方式中，上述步骤(3)中，所述梯度乙醇溶液的体积百分比浓度是1～100％。在一优选的实施方式中，上述步骤(3)中，染色后的切片先用纯净水进行清洗，然后在吸水纸上蘸干水分，再分别用50％的乙醇、75％的乙醇、95％的乙醇进行脱水，取出脱水后的切片在吸水纸上蘸干水分和乙醇；优选的，每个梯度乙醇的脱水时间是3～5s。在一优选的实施方式中，进一步将上述步骤(3)所得脱水染色后的木质部切片放置于载玻片上，滴加加拿大树胶，盖上盖玻片，压平，制成永久切片。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术切片混合染色液中番红染色纤维组织，阿尔辛蓝染色薄壁组织，该混合染色液染色后的木质部切片中可以同时清晰地观察到木质部横截面的薄壁组织、纤维组织和导管(或管胞)，能够明显地区分木质部的纤维组织和薄壁组织，克服了传统切片方法中染色剂难以通过颜色区分这两种组织的缺点。(2)本专利技术采用体积比是30～40:60～70的番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的混合染色液对木质部切片进行染色，切片成像效果远远好于未经染色液染色和仅通过单一染色液染色的效果，未经染色液染色的木质部切片的薄壁组织和纤维组织无颜色区别，仅通过单一染色液染色的木质部切片的薄壁组织和纤维组织为一种颜色，二者均无法通过区分薄壁组织和纤维组织；另外，采用该体积比的番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的混合染色液相对其他番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液体积比的混合染色液的染色效果更好，采用其他体积比的番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的混合染色液所得染色木质部切片的薄壁组织和纤维组织的颜色区别不明显，不能清晰区分木质部的纤维组织和薄壁组织，而采用体积比是30～40:60～70的番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的混合染色液所得切片的薄壁组织和纤维组织的颜色区别非常明显。(3)相比现在常用的其他切片制备方法，本方法不需包埋材料，可直接快速制作成永久切片用于后续观察，整个制备时间不超过10分钟，整个切片制备时间短，适用于所有木本植物，可应用于木本植物的解剖学研究中。附图说明图1是经本专利技术实施例1混合染色液染色后显微镜下观察得到的白蜡树种木质部横截面切片的效果显示图，其中薄壁组织呈蓝色、纤维组织呈红色；图2是经本专利技术实施例1混合染色液染色后显微镜下观察得到的海州常山树种木质部横截面切片的效果显示图，其中薄壁组织呈蓝色、纤维组织呈红色；图3是经本专利技术实施例1混合染色液染色后显微镜下观察得到的柿树树种木质部横截面切片的效果显示图，其中薄壁组织呈蓝色、纤维组织呈红色；图4是经本专利技术实施例1混合染色液染色后显微镜下观察得到的皂荚树种木质部横截面切片的效果显示图，其中薄壁组织呈蓝色、纤维组织呈红色；图5是经对比例1不经染色后显微镜下观察得到的白蜡树种木质部横截面切片的效果显示图；图6是经对比例2甲苯胺蓝染色液染色后显微镜下观察得到的白蜡树种木质部横截面切片的效果显示图；图7是经对比例3混合染色液A染色后显微镜下观察得到的白蜡树种木质部横截面切片的效果显示图；图8是经对比例4混合染色液B染色后显微镜下观察得到的白蜡树种木质部横截面切片的效果显示图。主要附图标记说明：1-薄壁组织，2-纤维组织，3-导管。具体实施方式下面结合附图，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种观察木质部薄壁组织的切片混合染色液，其特征在于：所述切片混合染色液包括：番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液；其中，番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是30～40:60～70。

【技术特征摘要】
1.一种观察木质部薄壁组织的切片混合染色液，其特征在于：所述切片混合染色液包括：番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液；其中，番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是30～40:60～70。2.根据权利要求1所述的切片混合染色液，其特征在于：所述番红乙醇溶液的浓度是0.008～0.012g/ml，阿尔辛蓝水溶液的浓度是0.008～0.012g/ml；优选的，所述番红乙醇溶液的浓度是0.009～0.011g/ml，阿尔辛蓝水溶液的浓度是0.009～0.011g/ml；最优选的，所述番红乙醇溶液的浓度是0.010g/ml，阿尔辛蓝水溶液的浓度是0.010g/ml。3.根据权利要求1所述的切片混合染色液，其特征在于：所述番红乙醇溶液的溶剂是体积百分比浓度为40％～60％的乙醇溶液；优选的，所述乙醇溶液的体积百分比浓度为50％。4.根据权利要求1所述的切片混合染色液，其特征在于：所述阿尔辛蓝水溶液的溶剂选自纯净水、去离子水或蒸馏水中任意一种。5.根据权利要求1所述的切片混合染色液，其特征在于：所述番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是32～37:62～67；优选的，所述番红乙醇溶液和阿尔辛蓝水溶液的体积比是35:65。6.一种切片混合染色液的制备方法，所述切片混合染色液为权利要求1～5任一项所述的切片混合染色液，制备步骤包括：采用乙醇溶解番红，配制成浓度为0.008～0.012g/ml的番红乙醇溶液；采用纯...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志成，李姗，万贤崇，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业新技术研究所，中国林业科学研究院木材工业研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11