一株高产的氧化微杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供一株高产的氧化微杆菌及其应用，涉及生物防治植物病害领域。所述菌株为氧化微杆菌(microbacterium oxydans)菌株AL10206，保藏编号为CGMCC No.14678。发明专利技术还提供了一种含有所述氧化微杆菌菌株AL10206的生物防治制剂及其制备方法。本发明专利技术的氧化微杆菌菌株具有生长速度快、作用谱广、产生率大，抗逆性强，在小麦叶片、穗能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该氧化微杆菌菌株AL10206制备的生物防治制剂，可以作为防治小麦赤霉病的生物农药。

【技术实现步骤摘要】
一株高产的氧化微杆菌及其应用
本专利技术涉及生物防治植物病害领域，具体涉及一株高产的氧化微杆菌及其应用。
技术介绍
近年来小麦赤霉病一直都呈现大爆发趋势，国内小麦主产区大致分作冬麦区和春麦区。数据显示，2016年秋冬河南、山东、安徽、河北、江苏五大小麦主产区播种面积约2.48亿亩。据悉，冬小麦面积约占国内小麦总面积的85％，五大主产区面积占比达68％左右、产量占比超过75％。五大小麦主产区赤霉病防控非常关键。小麦赤霉病被称为小麦“癌症”，主要发生在长江中下游冬麦区、东北春麦区东部及华南冬麦区，近年来随着气候和耕作制度的变化，流行区域不断扩大。数据显示，国内小麦赤霉病2005～2010年年均发生面积6000万亩左右，2011～2016年均发生面积上升到8000万。
技术实现思路
针对现有技术不足，本专利技术提供一株高产的氧化微杆菌及其应用，所述的氧化微杆菌菌株不仅生长速度快、作用谱广，储存时间长，且具有在小麦叶片能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。为实现以上目的，本专利技术的技术方案通过以下技术方案予以实现：本专利技术氧化微杆菌菌株AL10206的培养方法或繁殖方法包括：(1)普通培养保存采用NA培养基，配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂12g，蒸馏水1000mL；(2)实验室液体培养采用NB培养基，配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL；(3)固体培养基配方：固料和无机盐溶液，所述固料和无机盐溶液的质量比为1∶1.8；所述固料由质量比为60∶10∶30的木粉、玉米粉和麸皮组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液的组分及含量为：3.5％磷酸二氢钾，0.05％硫酸镁，0.5％硫酸钙，4％硫酸铵，0.05％氯霉素，1.3％轻质碳酸钙，剩余为水；(4)大量发酵培养基配方：同(3)中固体培养基配方。本专利技术所述生物防治制剂的制备方法包括以下步骤：(1)将氧化微杆菌移植到LB液体培养基中，28-30℃摇床振荡培养3-5d得到种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，28-30℃下恒温振荡培养3-5d；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液按体积比1∶6的比例接种至大量发酵培养基，室温28-32℃、相对湿度80％以上的发酵室中发酵培养8-9d。优选的，本专利技术所提供的菌株为氧化微杆菌(microbacteriumoxydans)菌株AL10206，是从潍坊北部渤海滩涂潮间带的土壤上分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.14678。其具有以下生物学特性：黄色菌落，表面光滑半透明，边缘整齐，对光看有光泽，革兰氏阳性杆状菌，且不能在厌氧条件下生长。优选的，本专利技术所述的氧化微杆菌菌株AL10206分离方法为：(1)氧化微杆菌株的分离：取潮间土壤，先用75％的酒精局部处理1min，再在超净工作台上用紫外灯处理20min后，用灭菌刀片切开处理部位，用接种针挑取少量土壤刮取物，在NA平板上划线，定时观察菌落生长情况。然后采用平板划线法，纯化氧化微杆菌株，转至NA试管斜面保存备用；(2)小麦赤霉病高效拮抗氧化微杆菌株的筛选：①初筛：采用对峙培养法，制NA平板，用打孔器在氧化微杆菌、小麦赤霉病菌边缘打取直径为5mm的菌饼，分别移植在平板相对的两侧中央，26℃恒温培养，逐日观察氧化微杆菌对病原菌的抑制作用。②复筛：将筛选到的具有高效拮抗活性的氧化微杆菌株进行复筛，主要是经过耐温性、耐酸碱性、耐药性试验，筛选到耐性较好的氧化微杆菌株，进行盆栽防治试验和田间试验，选取一株高产的氧化微杆菌。优选的，所述对小麦赤霉病的生物防治方法包括向发病的小麦施用上述氧化微杆菌菌株AL10206或者上述生物防治粉剂或液体制剂。本专利技术提供一株高产的氧化微杆菌及其应用，与现有技术相比优点在于：(1)本专利技术所述的氧化微杆菌菌株AL10206，能够产生抗逆性很高的厚垣孢子，对小麦赤霉病具有很高防治效果。(2)本专利技术的氧化微杆菌菌株具有生长速度快、作用谱广、抗逆性强，在小麦叶片能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。(3)由该氧化微杆菌菌株AL10206制备的生物防治制剂，可以作为防治小麦病害的生物农药，并且在防治小麦赤霉病的同时，对作物无不良影响，安全环保。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合本专利技术实施例对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：对本专利技术氧化微杆菌菌株进行鉴定，其鉴定结果如下所示：(1)微生物学特性：黄色菌落，表面光滑半透明，边缘整齐，对光看有光泽，革兰氏阳性杆状菌；媒介酶试验阳性，氧化酶试验阴性；淀粉水解试验阴性，V-P试验阴性，明胶液化试验阴性，硝酸盐还原试验阳性；糖醇类发酵试验：D-葡萄糖阴性、D-甘露醇阴性、甘露糖阳性、乳糖阴性、蔗糖阳性、阿拉伯糖阴性、山梨醇阴性、鼠李糖阴性；赖氨酸脱羧酶试验阴性，脲酶试验阴性。(2)分子生物学特性该菌株的rRNA基因序列测定结果如下：GCTCCTAAGGGTTAGGTACCGGCTTCGGGGGTTACCGACTTTCAGGAGTTGACGGGGGGT60GTGTACAAGACCCGGGAACGTATTCACCGCACCGGTGCTGATCTGCGATTACTAGCGACT120CCCACTTCATGAGGTCGAGTTGCAGACCTCAATCCAAAGTGGGACCGGCTTTTTGGGATT180CGCTCCACCTCGGGGTATTGCACCCCTTTGTACCGGCCATTGTAGCATGCGTGAAGCCCA240AGACATAGGGGGCATGATGATTTGACGTCCTCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCT300GTATCCCAAGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCAACATAAAAGGAGGGTTGCGCTCGTTG360CGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACAACAACCATGCACCACCTGTTTAC420GAGTGTCCGAAGAGTTGACCATTTCTGGCCCGTTCACGTAGATATCAAGCCTTGGTGAGG480TTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCGCATGCTCCGCCGCTGGTGCGGGTCCCCGTCAAT540TCCTTTGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGAACTTAATGCGTTAGCTG600CGTCACGGAATCCGTGGAATGGACCCCACAACTAGTTCCCAACGTTTACTGGGGTGGACT660ACCAGGGTATCTAAGCCTGTTTGCTCCCCACCCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACGGCC720CAGAGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株高产的氧化微杆菌，其特征在于，所述高产的氧化微杆菌菌株AL10206，菌株的保藏编号为CGMCC No.14678。

【技术特征摘要】
1.一株高产的氧化微杆菌，其特征在于，所述高产的氧化微杆菌菌株AL10206，菌株的保藏编号为CGMCCNo.14678。2.根据权利要求2所述的一株高产的氧化微杆菌，其特征在于：所述氧化微杆菌为革兰氏阳性杆状菌，其菌落为黄色，表面光滑半透明，边缘整齐，对光看有光泽，且厌氧条件下不生长。3.一株高产的氧化微杆菌的应用，其特征在于：所述高产的氧化微杆菌主要用于小麦赤霉病的防治。4.根据权利要求3所述的一株高产的氧化微杆菌的应用，其特征在于：所述氧化微杆菌可将其制备成生物防治制剂作用于小麦。5.根据权利要求3所述的一株高产的氧化微杆菌的应用，其特征在于：所述生物防治方法包括向发病的小麦施用上述氧化微杆菌菌株AL10206或者上述生物防治粉剂或液体制剂。6.根据权利要求3所述的一株高产的氧化微杆菌的应用，其特征在于，所述生物防治制剂的制备方法包括以下步骤：(1)将氧化微杆菌移植到LB液...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛兆颖，牛赡光，张俊生，张淑静，
申请(专利权)人：宁国市百立德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34