一株犬源乳酸片球菌及其应用制造技术

本公开涉及一株犬源乳酸片球菌及其应用，该菌株的分类命名为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)，编号为JLAPCC‑P76，已于2018年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC M 2018500。本公开以幼犬新鲜粪便为样品，从中筛选出特性优良的乳酸菌菌株，通过给断奶幼犬连续饲喂8周后，对其肠道形态结构、菌群和血液指标进行测定，评价其对幼犬消化吸收、肠道菌群和抗氧化性等方面的影响，同时，为评价所筛选乳酸菌对宠物幼犬应激症状的治疗效果，本公开给予长途运输后出现食欲不振、腹泻的应激幼犬灌服乳酸菌，观察其腹泻恢复和饮食恢复情况，以缓解宠物犬交易过程中常见的运输应激症状。

【技术实现步骤摘要】
一株犬源乳酸片球菌及其应用
本公开属于微生物
，具体涉及一株犬源乳酸片球菌及其应用。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。益生菌是当机体摄入适当的数量时，可以对宿主健康产生益生效果的一类活性微生物，菌株主要为乳杆菌属、芽孢杆菌属、双歧杆菌属、肠球菌属和片球菌属，常被制作成微生态制剂产品，用于解决动物饲养中遇到的部分难题。目前我国在册犬饲养数量已达7000万，对犬健康养殖提出了更高的需求，研究表明当犬使用益生菌时，益生菌可以提高犬机体免疫力，减轻应激反应，阻止肠道病原体引起的感染，促进生长发育，控制过敏性疾病等，为犬绿色、健康、生态养殖提供了新的思路。优良菌株是犬用微生态制剂研发的基础，来源于宿主自身的益生菌被证明更加安全有效，但是目前用于犬用微生态制剂研发的益生菌菌株种类少且多数来自于人源益生菌，因此亟需筛选出具有益生功能且安全的犬源益生菌。乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)是链球菌科片球菌属的一种革兰氏阳性球菌，镜下形态学观察为双球菌或四球菌，但不成链状排列，乳酸片球菌可以产生抑菌活性物质—乳酸片球菌素，乳酸片球菌素是一种耐高温(121℃仍具有活性)的蛋白质，可以抑制部分食源性致病菌，特别是对单核细胞增多症李氏杆菌抑制效果明显，因此乳酸片球菌及其发酵产物已被作为微生物防腐剂用作肉品、饲料和发酵食品的保存。近期有研究者利用肠道微生物高通量测序技术对22种犬与5种灵长类动物对比发现，犬肠道中乳酸片球菌所占肠道益生菌比例(约0.8％)远高于灵长类动物且差异极显著，由此推测乳酸片球菌可能是人与犬益生菌构成的差异菌株，为丰富犬用微生态制剂菌种提供了新选择。
技术实现思路
针对上述
技术介绍
，本公开以幼犬新鲜粪便为样品，从中筛选出综合性能优良的乳酸菌菌株，通过小鼠急性毒性试验，评价其安全性，在此基础之上，通过给断奶幼犬连续饲喂8周后，对其肠道形态结构、菌群和血液指标进行测定，评价其对幼犬消化吸收、肠道菌群和抗氧化性等方面的影响，同时，为评价所筛选乳酸菌对宠物幼犬应激症状的治疗效果，本公开给予长途运输后出现食欲不振、腹泻的应激幼犬灌服乳酸菌，观察其腹泻恢复和饮食恢复情况，以缓解宠物犬交易过程中常见的运输应激症状。本公开采用如下技术方案：在本公开的第一个方面，提供一株犬源乳酸片球菌，该菌株的分类命名为乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)，编号为JLAPCC-P76，已于2018年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCCM2018500。在本公开的第二个方面，提供一种微生物混合物，其特点是至少包含本公开的菌株，所述微生物混合物还包含其他对犬具有益生功能的并与本公开菌株共生的微生物。在本公开的第三个方面，提供了一种包含本公开菌株或本公开微生物混合物的产品，该产品可以是菌剂的形式，所述菌剂的活性成分为本公开菌株，该活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。在本公开的一个或一些实施方式中，该菌剂包括活性成分和载体，所述载体可以为固体载体或液体载体。所述固体载体或液体载体均为常规的载体材料，其中，固体载体可以选自粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳的一种或多种；液体载体可以为植物油、矿物油或水。在本公开的一个或一些实施方式中，所述产品为溶液形式、粉末形式、悬浮剂形式、颗粒形式或片剂形式。在本公开的第四个方面，提供一种本公开的菌株、本公开的微生物混合物或者本公开的包含本公开菌株或本公开微生物混合物的产品在制备对幼犬具有益生功能和/或治疗幼犬运输应激症状的微生态制剂中的应用。在本公开的一个或一些实施方式中，所述益生功能是指降低幼犬料重比，提高消化率和/或增加十二指肠隐窝深度和绒毛长度，增加空肠隐窝深和/或提高十二指肠和空肠中乳酸菌含量，降低空肠中大肠杆菌含量和/或提高血清、十二指肠和空肠中淀粉酶含量和/或提升血清总抗氧化能力。在本公开的一个或一些实施方式中，幼犬运输应激症状包括长途运输后出现食欲不振和/或腹泻。在本公开的第五个方面，提供了一种对幼犬具有益生功能和/或治疗幼犬运输应激症状的微生态制剂，其特点是：该微生态制剂包括所述的乳酸片球菌或所述的微生物混合物或所述的产品。在本公开的一个或一些实施方式中，所述微生态制剂为颗粒形式、粉末形式、溶液形式、悬浮剂形式或片剂形式。与本专利技术人知晓的相关技术相比，本公开中的一个技术方案具有如下有益效果：(1)本公开乳酸片球菌R76消化道环境和高温环境存活率高、细胞黏附力强和在幼犬肠道内定植性能好，小鼠毒性试验检测为安全无毒无副作用，可以作为犬用微生态制剂候选菌株。本试验结果表明乳酸片球菌R76生长条件为兼性厌氧，有氧条件和无氧条件生长速度差别不大，降低生产成本，更加有利于益生菌产业化发展，既可以适应肠道微氧环境生长繁殖，又可以工业生产中有氧条件下发酵降低生产成本。(2)本公开乳酸片球菌R76具备以下益生功能：可以降低幼犬料重比，提高消化率；增加十二指肠隐窝深度和绒毛长度，增加空肠隐窝深度；提高十二指肠和空肠中乳酸菌含量，降低空肠中大肠杆菌含量；提高血清、十二指肠和空肠中淀粉酶含量；提升血清总抗氧化能力。(3)通过宠物店临床应用观察，乳酸片球菌R76灌喂运输应激幼犬可以提前2天恢复正常采食量，提前24小时停止腹泻。附图说明构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。图1：R76号菌株革兰氏染色(100×)。图2：16sPCR扩增结果，M:DL2000marker；1:16srRNA图3：R76号菌株生长曲线图4：幼犬十二指肠和空肠石蜡切片HE染色40×。图5：乳酸片球菌对运输应激幼犬采食量恢复影响。图6：乳酸片球菌对运输应激幼犬腹泻的影响。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本公开的技术方案。实施例1乳酸片球菌R76的分离鉴定及安全性评价1.材料与方法1.1材料1.1.1样品来源与培养基的配制(1)样品来源：采样于长春市南关区某健康未断奶边境牧羊犬幼犬粪便。(2)MRS液体培养基的配制将试剂与1L蒸馏水混合，pH值调至6.8，115℃高压灭菌15min。(3)MRS固体培养基：每100mLMRS液体培养基中加入1.5g琼脂粉，115℃高压灭菌15min。1.1.2试验动物SPF级BALB/c小鼠30只，18g-22g，购自于北京华阜康公司(合格证No.11401300071553)。1.1.3试验主要试剂1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株犬源乳酸片球菌，其特征是：该菌株的分类命名为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)，编号为JLAPCC‑P76，已于2018年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC M 2018500。

【技术特征摘要】
1.一株犬源乳酸片球菌，其特征是：该菌株的分类命名为乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)，编号为JLAPCC-P76，已于2018年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCCM2018500。2.一种微生物混合物，其特征是：至少包含权利要求1所述的乳酸片球菌。3.包含权利要求1所述的乳酸片球菌或权利要求2所述的微生物混合物的产品。4.如权利要求3所述的产品，其特征是：所述产品为溶液形式、粉末形式、悬浮剂形式、颗粒形式或片剂形式。5.如权利要求3所述的产品，其特征是：产品为菌剂的形式，该菌剂包括活性成分和载体，所述载体为固体载体或液体载体；所述固体载体或液体载体均为常规的载体材料，其中，固体载体选自粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳的一种或多种；液体载体为植物油、矿物油或水。6.权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王春凤，王建忠，杨桂连，石春卫，李宁，单宝龙，谷魏，王红，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22