本发明专利技术涉及一种微小核苷酸has‑miR‑516a‑5p(miR‑516a)抑制子的应用，即，本发明专利技术公开了miR‑516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用，抑制膀胱癌增殖和转移。具体而言：抑制miR‑516a，能在体外抑制膀胱癌细胞锚定非依赖性生长、并在体内抑制裸鼠皮下肿瘤的形成。抑制miR516a，能在体外抑制膀胱癌细胞迁移浸润能力。
Application of microRNA-516a as a target in the treatment of bladder cancer
The invention relates to the application of a micro-nucleotide has microRNA 516A 5p (microRNA 516a) inhibitor, that is, the invention discloses the application of microRNA 516A as a target for treating bladder cancer, and inhibits the proliferation and metastasis of bladder cancer. Specifically, inhibiting microRNA 516A can inhibit the anchorage-independent growth of bladder cancer cells in vitro and the formation of subcutaneous tumors in nude mice in vivo. Inhibition of microRNA516a can inhibit the migration and infiltration of bladder cancer cells in vitro.
【技术实现步骤摘要】
miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用
本专利技术涉及一种微小核苷酸has-miR-516a-5p(miR-516a)抑制子的应用，具体是指抑制miR-516a作为治疗膀胱癌新型靶标分子的应用。
技术介绍
癌症目前仍是威胁全球人类生命健康的一个非常重要的难题，在我国，每年由于癌症死亡的人数占疾病死亡总人数的25％。其中膀胱癌是最常见的恶性肿瘤之一，居我国泌尿系统恶性肿瘤首位，且临床调查分析发现过去几十年，我国膀胱癌的发病率、复发率呈现稳定上升趋势。根据病理分型可将膀胱癌分为两类：非肌肉浸润性和肌肉浸润性。非肌肉浸润性复发的膀胱癌15％-20％会发展成肌肉浸润性膀胱癌。并且膀胱癌患者术后生存率低，伴有区域或远处转移的患者，其5年生存率仅为45％。目前临床针对膀胱癌治疗缺乏有效手段，膀胱根治性切除或电切术后膀胱灌注给患者带来了巨大痛苦，同时术后巨额医药费用给家庭带来沉重负担。新靶向药物的研发及新预防措施的应用是公认遏制这一态势的主要途径，这使得相应新分子靶标鉴定成为膀胱癌防治研究中的热点。因此，筛选出治疗膀胱癌的新靶标分子已经对于膀胱癌的治疗至关重要。微小RNA(microRNA)是一类内源基因编码高度保守大小约19～25个核苷酸的非编码小分子单链RNA，其普遍存在于各种生物的细胞中，位于编码蛋白基因(70％)的内含子或外显子中或基因间隔区(30％)。大多数内含子和外显子microRNA来源于他们的宿主基因，暗示他们同宿主转录子共同转录，其他作为独立转录单元在基因间隔区域转录。microRNA与靶mRNA的3'UTR结合，可导致microRNA抑制靶基因的蛋白质翻译或促进靶基因mRNA的降解。microRNA的调控作用构成了复杂的调控网络，既可以通过一个microRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个microRNA的组合来精细调控某个基因的表达。从而参与多种生命过程，包括细胞生长，增殖，转移和凋亡等。因此，可以认为microRNA与肿瘤的发生发展密切相关。研究发现microRNA在人体组织中的表达具有特异性，为microRNA作为不同实体瘤特异性标志分子提供依据。近年来研究报道多种microRNA在膀胱癌中异常表达，然而部分microRNA仍未在膀胱癌中报道，因此探索该部分microRNA同时找到调控膀胱癌发展进程中新的标记物并对其功能开展研究对该疾病的临床防治具有重要意义。膀胱癌是一种发生在膀胱上皮的泌尿系统恶性肿瘤，多由吸烟及环境致癌物引起，目前尚未发现有效的治疗靶点，而microRNA具有成为潜在的膀胱癌治疗靶点的价值。目前肿瘤领域研究发现miR-516a在卵巢癌中表达显著下调，发挥抑制卵巢癌细胞增殖的功能。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供miR-516a可作为治疗膀胱癌新靶标的应用，miR-516a在抑制膀胱癌细胞增殖转移方面的应用，为临床上膀胱癌的早期诊断、靶向microRNA治疗膀胱癌药物的研发提供理论依据。为了解决上述技术问题，本专利技术提供miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用。作为本专利技术的miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用的改进：抑制膀胱癌增殖，抑制膀胱癌增殖或转移。作为本专利技术的miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用的进一步改进：抑制miR-516a，能在体外抑制(显著抑制)膀胱癌细胞锚定非依赖性生长、并在体内抑制(显著抑制)裸鼠皮下肿瘤的形成。作为本专利技术的miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用的进一步改进：抑制miR-516a，能在体外抑制(显著抑制)膀胱癌细胞迁移浸润能力。本专利技术通过筛查到miR-516a在配对病人中表达上调，进一步采用实时荧光定量PCR技术在人膀胱癌组织与癌旁组织中检测到miR-516a表达上调。进一步抑制miR-516a在体外显著抑制膀胱癌细胞锚定非依赖性生长能力及迁移能力，在体内显著抑制裸鼠皮下异位移植瘤形成。裸鼠异位移植瘤模型构建应用的膀胱癌细胞为UMUC3,J82细胞。为了探究膀胱癌治疗的新靶标，本专利技术首次发现miR-516a在膀胱癌中高表达，并且抑制其表达明显抑制膀胱癌细胞的增殖及侵袭能力。鉴于miR-516a在膀胱癌增殖转移中的重要调控功能，本专利技术对于膀胱癌的治疗具有重大意义。肿瘤领域研究发现miR-516a在卵巢癌中表达显著下调，发挥抑制卵巢癌细胞增殖的功能，这与本专利技术在膀胱癌中发现的作用恰恰相反，表明了抑制miR-516a的表达对于膀胱癌特异性的治疗作用。本专利技术利用实时荧光定量PCR技术等技术检测miR-516a表达在膀胱癌中呈显著高表达趋势；进一步应用膀胱癌UMUC3,J82细胞构建裸鼠皮下异位移植瘤模型，抑制miR-516a可在体内外抑制膀胱癌细胞增殖能力。本专利技术为膀胱癌的治疗提供了新的靶标分子，也有助于推动抗膀胱癌新药研发等方面的应用基础研究。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1为miR-516a在临床膀胱癌组织样本中miR-516a表达显著上调的实时荧光定量PCR验证图。图2A为miR-516a在人膀胱癌细胞中表达显著上调的荧光定量PCR图，图2B-2D分别为miR-516ai稳定抑制UMUC3,J82,T24T细胞miR-516a表达的柱状图，p<0.05。图3A为采用软琼脂集落形成实验，将UMUC3(miR-516ai)、J82(miR-516ai)以及对照细胞种于软琼脂中，细胞生长两到三周后的代表性图像，图3B为显微镜下计数软琼脂集落形成实验中超过32个细胞的克隆数统计图。该数据证实抑制miR-516a的表达可抑制膀胱癌细胞锚定非依赖性生长，p<0.05。图4A-B分别为抑制miR-516a表达抑制膀胱癌细胞UMUC3、J82增殖能力的示意图。利用ATP生物荧光检测法证实抑制miR-516a表达后膀胱癌细胞的增殖能力明显低于对照组细胞，p<0.05。图5A、D为稳定抑制miR-516a的表达显著抑制裸鼠皮下异位移植瘤形成的图片。将稳定转染细胞UMUC3(miR-516ai)、J82(miR-516ai)以及对照细胞各2.5×106细胞悬浮于100μLPBS中，皮下注射于4周龄无胸腺裸鼠的右上背腹区域，共四组，每组六只。具体而言，图5A为UMUC3(miR-516ai)以及对照细胞各2.5×106个细胞皮下注射细胞四周后裸鼠活体图片；图5D为J82(miR-516ai)以及对照细胞各2.5×106个细胞皮下注射细胞四周后裸鼠活体图片。图5B、E在细胞注射四周后处死裸鼠，取出肿瘤拍照并称重。具体而言，图5B为UMUC3(miR-516ai)以及对照组在细胞注射四周后处死裸鼠，取其右背部肿瘤所拍照片；图5E为J82(miR-516ai)以及对照组在细胞注射四周后处死裸鼠，取其右背部肿瘤所拍照片。柱形图表示每组6只裸鼠肿瘤重量的平均值±标准差(图5C、F)，p<0.05。具体而言，图5C为UMUC3(miR-516ai)以及对照组每组6只裸鼠肿瘤重量统计图；图5F为J82(miR-516ai)以及对照组每组6只裸鼠肿瘤重量统计图。图6A-D为Transwell小室实验验证miR-516a对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响。经本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.miR‑516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用。
【技术特征摘要】
1.miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用。2.根据权利要求1所述的miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用，其特征是：抑制膀胱癌增殖和转移。3.根据权利要求1或2所述的miR-516a作为治疗膀胱癌的靶标的应用，其特征是：...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄海山，金红蕾，马久高，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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