一株几丁质分解菌及其应用制造技术

一株几丁质分解菌及其应用，本发明专利技术涉及一株几丁质分解菌及其应用。本发明专利技术的目的是要解决现有在尖孢镰刀菌病防治上存在着农残隐患的问题，本发明专利技术的一株几丁质分解菌为圈卷产色链霉菌(Streptomyces ansochromogenes.)F7，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年2月02日，保藏编号为CGMCC No.15333。本发明专利技术一株几丁质分解菌的应用是指在植物病害防治上的应用。菌株F7对尖孢镰刀菌病有很好的拮抗作用，F7发酵液对尖孢镰刀菌病的抑制效果达到78％。本发明专利技术应用于环境微生物技术领域。

A Chitin-decomposing Bacteria and Its Application

A chitin decomposing bacteria and its application, the present invention relates to a chitin decomposing bacteria and its application. The aim of the present invention is to solve the problem of potential agricultural residues in the prevention and control of Fusarium oxysporum. A chitin-decomposing bacterium of the invention is Streptomyces ansochromogenes F7, which is stored in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation and Management Committee. The storage address is No. 1 Hospital, Beichenxi Road, Chaoyang District, Beijing, and the storage date is 2018. On February 02, 2000, the storage number is CGMCC No. 15333. The application of a chitin decomposing bacteria of the invention refers to the application in the prevention and control of plant diseases. The strain F7 had a good antagonistic effect on Fusarium oxysporum. The inhibitory effect of F7 fermentation broth on Fusarium oxysporum was 78%. The invention is applied to the technical field of environmental microorganisms.

【技术实现步骤摘要】
一株几丁质分解菌及其应用
本专利技术涉及一株几丁质分解菌及其应用。
技术介绍
镰刀菌属(Fusarium)是农作物最重要的病原真菌之一，是一种最为常见的寄生病原菌，严重影响谷类植物的生长及粮食生产。其中以尖孢镰刀菌(F.oxysporum)为典型，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。研发新型、高效、保障食品安全及环境安全的生防菌剂具有重要意义。现有植物尖孢镰刀菌病害主要防治方法仍是以化学农药为主存在着农残隐患。
技术实现思路
本专利技术的目的是要解决现有植物尖孢镰刀菌病害主要防治方法存在着农残隐患的问题，提供了一株几丁质分解菌及其应用。本专利技术一株几丁质分解菌为圈卷产色链霉菌(Streptomycesansochromogenes.)F7，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年2月02日，保藏编号为CGMCCNo.15333。本专利技术的一株几丁质分解菌的应用是指在植物病害防治上的应用。本专利技术采用野生稻根际土壤中进行几丁质分解菌菌株的分离纯化：初筛：采用平板稀释涂布法，称取来源于江西东乡野生稻的根际土样5g于45ml无菌水中，120rpm，20min后静置，取上清进行10倍浓度梯度稀释。分别取10-1、10-2、10-3浓度的稀释液各80μL，每个梯度涂布3个几丁质培养基平板上，用无菌水代替稀释液做空白对照。倒置于25℃培养箱中培养2-3天，观察菌落的生长及透明圈产生情况。(几丁质培养基：K2HPO41g，MgSO4·7H2O0.5g，NaCl0.5g，NH4Cl1g，琼脂15g加蒸馏水定容至1000ml，其中每80ml几丁质培养基中加入20ml1％胶体几丁质。)复筛：在几丁质培养基上，将60多株透明圈较大但形态、颜色等不同形状的菌落分别挑选出来，进行平板划线，直至菌落单一，筛选出产几丁质酶的圈卷产色链霉菌(Streptomycesansochromogenes.)F7，参照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰系统鉴定手册》中推荐的部分培养基和方法，鉴定F7菌株的生理生化特征发现，F7菌株的接触酶阳性，甲基红反应为阴性，V-P反应阴性，淀粉水解阳性，明胶液化，不产生硫化氢，吲哚阴性，对NaCl的耐受性为10％。利用基因组提取试剂盒(FastDNASpinKitforSoil)提取菌株的基因组，进行16SrDNA的扩增。PCR扩增后，产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检验，结果在1500bp处有明显的特征条带。既而将扩增产物送到生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，所得序列上传到Genbank。通过Blast分析与基因库中序列进行同源性比对，并用MEGA5.1软件中Neihbor-Joinhing构建系统发育进化树。F7菌株与圈卷产色链霉菌属的同源性最高，达99％，最终命名为圈卷产色链霉菌(Streptomycesansochromogenes.)F7。本专利技术提供了在野生稻根际土壤中筛选得到具有几丁质酶活且对尖孢镰刀菌病有抑制作用的圈卷产色链霉菌F7菌株，保藏编号为CGMCCNO.15333，它是在江西东乡的野生稻根际土壤中，经初选得到具有分解几丁质能力较强的菌株后，再反复筛选与尖孢镰刀菌病拮抗效果好的菌株，大量实验证明，菌株F7不仅可以分解尖孢镰刀菌病细胞壁的重要成分几丁质，且菌株F7的发酵液对尖孢镰刀菌病的抑制效果能达到78％，从而说明菌株F7对尖孢镰刀菌病有很好的拮抗作用。本专利技术利用生物防治的手段，即利用生物或其代谢产物对植物病害进行有效防治，相比其他传统的的化学防治更加环保，无农药残留，不产生抗药性，为生防微生物资源的开发和有效利用提供了理论依据。从而为绿色有机农业奠定长远发展。附图说明图1为F7菌株在PDA平板上的形态图；图2为F7菌株分子鉴定聚类图谱；图3为F7菌株与尖孢镰刀菌病的拮抗效果图；图4为F7发酵液和苯醚甲环唑对尖孢镰刀菌病抑制效果图；图5为F7发酵液和苯醚甲环唑对尖孢镰刀菌病抑制效果的对比图；其中a为F7发酵液，b为苯醚甲环唑。具体实施方式具体实施方式一：本实施方式一株几丁质分解菌为圈卷产色链霉菌(Streptomycesansochromogenes.)F7，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年2月02日，保藏编号为CGMCCNo.15333。本实施方式采用野生稻根际土壤中进行几丁质分解菌菌株的分离纯化：初筛：采用平板稀释涂布法，称取来源于江西东乡野生稻的根际土样5g于45ml无菌水中，120rpm，20min后静置，取上清进行10倍浓度梯度稀释。分别取10-1、10-2、10-3浓度的稀释液各80μL，每个梯度涂布3个几丁质培养基平板上，用无菌水代替稀释液做空白对照。倒置于25℃培养箱中培养2-3天，观察菌落的生长及透明圈产生情况。(几丁质培养基：K2HPO41g，MgSO4·7H2O0.5g，NaCl0.5g，NH4Cl1g，琼脂15g加蒸馏水定容至1000ml，其中每80ml几丁质培养基中加入20ml1％胶体几丁质。)复筛：在几丁质培养基上，将60多株透明圈较大但形态、颜色等不同形状的菌落分别挑选出来，进行平板划线，直至菌落单一，筛选出产几丁质酶的圈卷产色链霉菌(Streptomycesansochromogenes.)F7，参照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰系统鉴定手册》中推荐的部分培养基和方法，鉴定F7菌株的生理生化特征发现，F7菌株的接触酶阳性，甲基红反应为阴性，V-P反应阴性，淀粉水解阳性，明胶液化，不产生硫化氢，吲哚阴性，对NaCl的耐受性为10％。利用基因组提取试剂盒(FastDNASpinKitforSoil)提取菌株的基因组，进行16SrDNA的扩增。PCR扩增后，产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检验，结果在1500bp处有明显的特征条带。既而将扩增产物送到生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，所得序列上传到Genbank。通过Blast分析与基因库中序列进行同源性比对，并用MEGA5.1软件中Neihbor-Joinhing构建系统发育进化树。F7菌株与圈卷产色链霉菌属的同源性最高，达99％，最终命名为圈卷产色链霉菌(Streptomycesansochromogenes.)F7。本实施方式利用生物防治的手段，即利用生物或其代谢产物对植物病害进行有效防治，相比其他传统的的化学防治更加环保，无农药残留，不产生抗药性，为生防微生物资源的开发和有效利用提供了理论依据。从而为绿色有机农业奠定长远发展。具体实施方式二：本实施方式一株几丁质分解菌的应用是指在植物病害防治上的应用。本实施方式提供了在野生稻根际土壤中筛选得到具有几丁质酶活且对尖孢镰刀菌病有抑制作用的圈卷产色链霉菌F7菌株，保藏编号为CGMCCNO.15333，它是在江西东乡不同地点的野生稻根际土壤中，经初选得到具有分解几丁质能力较强的菌株后，再反复筛选与尖孢镰刀菌病拮抗效果好的菌株，大量实验证明，菌株F7不仅可以分解尖孢镰刀菌病细胞壁的重要成分几丁质，且菌株F7的发酵液对尖孢镰刀菌病的抑制效果能达到78％，从而说明菌株F7对尖孢镰刀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株几丁质分解菌，其特征在于它为圈卷产色链霉菌(Streptomyces ansochromogenes.)F7，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年2月02日，保藏编号为CGMCC No.15333。

【技术特征摘要】
1.一株几丁质分解菌，其特征在于它为圈卷产色链霉菌(Streptomycesansochromogenes.)F7，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年2月...

【专利技术属性】
技术研发人员：田春杰，吉丽，田磊，张建峰，谢金宏，陈德国，马丽娜，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：吉林,22