一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量检测方法，具体方法为:精密移取各系列标准溶液1.0mL，空白管精密移取水1.0mL，向标准管中加入0.01ml盐酸利多卡因(同样品标示浓度),样品管称取样品0.01g置带塞试管中，在上述各管中试剂E1.0mL后，经旋涡混合器上混合，室温放置10min。再加入3.0mL试剂F，经旋涡混合器混匀后，在50℃水浴放置10min，于750nm处测定吸光度，记录各管吸收值。利用本发明专利技术的方法检测医用交联透明质酸钠凝胶(含盐酸利多卡因)蛋白质的含量，此检验方法操作性方便，反应完全，结果准确、可靠、稳定性及重复性良好，排除了盐酸利多卡因在此反应中对吸光度的影响。

A method for determination of protein content in medical crosslinked sodium hyaluronate gel containing lidocaine hydrochloride

The invention relates to a method for detecting the protein content of medical crosslinked sodium hyaluronate gel containing lidocaine hydrochloride. The specific method is as follows: the series of standard solution 1.0mL is precisely moved, the blank tube is moved to 1.0mL accurately, 0.01ml hydrochloric acid lidocaine is added to the standard tube (the same concentration is marked), and the sample tube is called the 0.01g sample belt plug. In the test tube, reagent E1.0 mL was mixed on the scroll mixer and placed at room temperature for 10 minutes. Adding reagent F of 3.0mL, mixing in a whirlpool mixer, and putting it in a water bath at 50 C for 10 minutes, the absorbance was measured at 750nm, and the absorption values of each tube were recorded. The method of the invention is used to detect the content of protein cross-linked sodium hyaluronate gel (lidocaine hydrochloride), which is easy to operate and has complete reaction. The result is accurate, reliable, stable and reproducible, eliminating the influence of lidocaine hydrochloride on the absorbance in this reaction.

【技术实现步骤摘要】
一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量的检测方法
本专利技术涉及药品检测
，特别涉及一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量的检测方法。
技术介绍
现有的医用交联透明质酸钠产品都需检测其蛋白质含量，产品中的蛋白质含量是产品质量的重要考察指标，蛋白质含量高低直接影响了产品质量，为了更好的控制产品，故应严格控制产品的蛋白质含量。目前行业内所采用的检测方法：YY/T0606.9‐2007组织工程医疗产品第9部分：透明质酸钠，附录B：透明质酸钠蛋白质含量测定步骤存在盐酸利多卡因对吸光度的影响，直接影响检测结果的准确性和重复性。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于针对现有YY/T0606.9-2007组织工程医疗产品第9部分：透明质酸钠，附录B：透明质酸钠蛋白质含量所存在的不足而提供一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量的检测方法，对比现有的检测方法，该专利技术所涉及的检测方法盐酸利多卡因在此反应中对吸光度的影响，显著提高了检测结果的准确性和重复性。本专利技术所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量的检测方法，包括如下步骤：(6)样品溶液制备步骤样品管称取含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶样品0.01g置带塞试管中后待用；(7)标准溶液制备：精密移取牛血清白蛋白标准溶液配制成浓度约为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准溶液；(8)空白溶液制备：1ml水溶液；(9)按下表制备葡萄糖醛酸标准溶液系列(10)在步骤(1)(2)(3)(4)所配备的样品溶液、空白对照及标准溶液中加入试剂E1.0mL后，经旋涡混合器上混合，室温放置10min；再加入3.0mL试剂F，经旋涡混合器混匀后，在50℃水浴放置10min，用0号管作对照，依法测定《药典四部通则0401紫外-可见分光光度法》，于波长750nm处测定样品、空白对照、标准溶液的每管吸光度；依据所测得吸光度计算蛋白质含量。在本专利技术的一个优选实施例中，所述步骤(5)中的试剂E为：试剂A：称取1.0g水合硫酸铜(CuSO4·5H2O)，加水溶解并稀释至100mL；试剂B：称取2.0g水合酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)，加水溶解稀释至100mL；试剂C：称取25.0g无水碳酸钠及5.0g氢氧化钠，加水溶解后稀释至250mL；试剂D：临用前，将等量的试剂A及试剂B混合；试剂E：临用前，将1份试剂D及10份试剂C混合。在本专利技术的一个优选实施例中，所述步骤(5)中的试剂F为：临用前，取酚试液进行10倍稀释。本专利技术所要解决的技术问题在于针对现有YY/T0606.9-2007组织工程医疗产品第9部分：透明质酸钠，附录B：透明质酸钠蛋白质含量所存在的不足而提供一种医用交联透明质酸钠凝胶(含盐酸利多卡因)蛋白质含量的检测方法基础上改进了分析方法，实现了方法操作简便、快捷，检验仪器简单常见，并且显著提高了测试结果的重复性和准确性。附图说明图1为本专利技术的含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质-吸光度线性回归曲线及方程示意图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步说明，可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本专利技术。但不以任何方式限制本专利技术，凡依照本专利技术的内容所做的任何本领域的等同替换均属于本专利技术的保护范围之内。实施例1实验方法与过程：仪器与试剂分析天平：BSA224S型(厂家：赛多利斯)、紫外-可见分光光度计。试剂A：称取1.0g水合硫酸铜(CuSO4·5H2O)，加水溶解并稀释至100mL。试剂B：称取2.0g水合酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)，加水溶解稀释至100mL试剂C：称取25.0g无水碳酸钠及5.0g氢氧化钠，加水溶解后稀释至250mL。试剂D：临用前，将等量的试剂A及试剂B。混合试剂E：临用前，将1份试剂D及10份试剂C混合。试剂F：临用前，取酚试液进行10倍稀释等。样品：一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶产品。样品溶液制备步骤样品管称取两管含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶样品各0.01g置带塞试管中后待用(样品1，样品2)。标准溶液制备：精密移取牛血清白蛋白标准溶液配制成浓度约为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准溶液。空白溶液制备：1ml水溶液按下表1制备葡萄糖醛酸标准溶液系列。表1测定方法(11)在上述步骤所配备的样品、空白对照及标准溶液中加入试剂E1.0mL后，经旋涡混合器上混合，室温放置10min。再加入3.0mL试剂F，经旋涡混合器混匀后，在50℃水浴放置10min，用0号管作对照，依法测定《药典四部通则0401紫外-可见分光光度法》，于波长750nm处测定样品、空白对照、标准溶液的每管吸光度。依据图1所示的吸光度与蛋白质的关系式计算样品中蛋白质含量。(7)实验结果测量及数据分析：1.使用紫外分光光度计，测得对照品溶液浓度及吸光度测量结果见表22.根据对照品浓度测试结果绘制线性回归分析曲线及线性回归方程见表23.根据样品的紫外分光光度计测定的吸光度测量结果，计算样品中的蛋白质含量结果见表2。表2对照品溶液浓度(ug/ml)吸光度A2.030.00944.060.01718.120.035610.150.046720.300.0870R20.9980R0.9990标准曲线斜率标准曲线截距0.00430.0009标示质量浓度C(mg/ml)20凝胶密度d(g/ml)1.01称样量m(g)吸光度Aρ1ρ2蛋白质含量ρ3样品10.01270.012219801.982.650.0134％样品20.01300.013219801.982.890.0146％蛋白质含量平均值0.0140％上述说明并非对专利技术的限制，本专利技术也并不限于上述举例，本
的普通技术人员，在本专利技术的实质范围内作出的变化、改型、添加或替换，也应属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品溶液制备步骤样品管称取含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶样品0.01g置带塞试管中后待用；(2)标准溶液制备：精密移取牛血清白蛋白标准溶液配制成浓度约为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准溶液；(3)空白溶液制备：1ml水溶液；(4)按下表制备葡萄糖醛酸标准溶液系列

【技术特征摘要】
1.一种含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶蛋白质含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品溶液制备步骤样品管称取含盐酸利多卡因医用交联透明质酸钠凝胶样品0.01g置带塞试管中后待用；(2)标准溶液制备：精密移取牛血清白蛋白标准溶液配制成浓度约为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准溶液；(3)空白溶液制备：1ml水溶液；(4)按下表制备葡萄糖醛酸标准溶液系列(5)在步骤(1)(2)(3)(4)所配备的样品溶液、空白对照及标准溶液中加入试剂E1.0mL后，经旋涡混合器上混合，室温放置10min；再加入3.0mL试剂F，经旋涡混合器混匀后，在50℃水浴放置10min，用0号管作对照，依法测定《药典四部通则0401紫外-可见分光光度法》，于波长750n...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲍文仙，熊祥龙，
申请(专利权)人：浙江景嘉医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33