一种1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖标准样品的制备方法及应用，将五倍子单宁酸经甲醇醋酸溶液降解后，减压蒸发除去有机溶剂，再分别用乙醚和乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分减压蒸发除去有机溶剂，经冷冻干燥得到粗品，然后用甲醇溶解后通过葡聚糖凝胶色谱柱色谱分离，收集70％丙酮洗脱部分，减压蒸发除去丙酮，水相经冷冻干燥后得到1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖标准样品。该方法制备的1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖标准样品均匀性好、量值准确、稳定性好，从而为植物样品中1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖含量的检测、定量等提供优质的标准品。

Preparation of a standard sample of 1,2,3,4,6-O- five gallic acid glucose

The invention discloses a preparation method and application of a standard sample of 1,2,3,4,6_O_gallic acyl glucose. The gallnut tannic acid is degraded by methanol acetic acid solution, the organic solvent is removed by vacuum evaporation, then extracted by ether and ethyl acetate respectively, and the organic solvent is removed by partial vacuum evaporation of ethyl acetate, and then dried by freeze-drying. The crude product was then dissolved in methanol and separated by Sephadex gel column chromatography. 70% acetone eluent was collected, and acetone was evaporated at reduced evaporation. The 1,2,3,4,6 O O five gall glucose standard sample was obtained after freeze-drying. The standard sample of 1,2,3,4,6_O_pentagaloyl glucose prepared by this method has good homogeneity, accuracy and stability, thus providing high quality standard for the determination and quantification of 1,2,3,4,6_O_pentagaloyl glucose in plant samples.

【技术实现步骤摘要】
一种1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品的制备方法
本专利技术涉及一种1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品的制备方法，属于分析检测
技术背景单宁酸(Tannicacid)是从五倍子、塔拉等富含鞣质的植物样品中提取制备的由不同数目棓酰基和葡萄糖形成的酯的聚合物的一类天然多酚化合物。因此，从化学成分上看单宁酸是由不同聚合度的棓酸的混合物。其中又以1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖(PGG)含量为主要成分。1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖具有较强的生物活性，广泛存在于多种植物中，同时也是中药质量控制的重要指标。但由于缺少对照品，给相关产品的质量控制带来一定的困难。因此，提供一种制备1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖对照品的方法具有重要的意义。1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖在中药五倍子中含量较高，由于五倍子中也存在相似的其它化学成分，造成其分离制备困难。本专利技术提供一种以单宁酸为原料，利用单宁酸在热的甲醇中醇解制备得到1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖的方法。本方法制备过程如下所示：
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品的制备方法。本专利技术具体通过以下步骤制备得到：(1)以单宁酸作为材料，将单宁酸按照单宁酸∶甲醇醋酸溶液＝1∶5-20(g/mL)的比例溶解于甲醇醋酸溶液中于65℃反应15h。其中甲醇醋酸溶液中甲醇体积百分比浓度为70％，浓度为0.1M的醋酸。(2)反应结束后于30-40℃下减压旋转蒸发除去甲醇，加水补充至原溶液体积。(3)将上述所得溶液分别用等体积的乙醚和乙酸乙酯萃取3次。(4)将乙酸乙酯萃取部分合并后经减压蒸发除去溶剂，并经冷冻干燥后获得1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖粗品。(5)粗产品用少量甲醇溶解，上葡聚糖凝胶色谱柱，先用体积百分比浓度为50％甲醇溶液(含2％甲酸)冲洗去杂，再用体积百分比浓度为70％的丙酮洗脱，收集丙酮洗脱部分，减压蒸发除去丙酮，水相经冷冻干燥后得到1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖纯品，呈白色粉末状固体。本专利技术的效果及优点：本方法制备的1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品均匀性好、量值准确、稳定性好，从而为1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖含量的检测、定量等提供优质的标准品。附图说明图1单宁酸醇解制备1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖工艺流程图图21，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖ESI-MS质谱图(负离子模式)图31，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖的红外光谱图图41，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖的1HNMR谱图图51，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖的13CNMR谱图图6均匀性趋势图图71，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品的标准曲线图8白芍提取物HPLC色谱图，280nm波长下检测具体实施方式本具体实施例仅是对专利技术的解释，并不是对本专利技术的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可根据需要对本实施例作出没有创造性贡献的修改，但只要在本专利技术的权利要求范围内都受到专利法的保护。实施例1：利用单宁酸醇解制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品的工艺流程图见图1。称取单宁酸原料25.0g置于500mL圆底烧瓶中，加入体积百分比浓度为70％甲醇醋酸溶液(0.1M，pH5.0)中于65℃反应20h。反应结束后，将反应液pH值立即调至6.0，并于30℃下减压旋转蒸发除去甲醇，加水补充至原溶液体积。将上述所得溶液分别用等体积的乙醚和乙酸乙酯萃取3次。将3次乙酸乙酯萃取部分合并后经30℃下减压蒸发除去溶剂，经冷冻干燥后得到1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖粗产品。粗产品用少量甲醇溶解后上葡聚糖凝胶色谱柱，先用500mL体积百分比浓度为50％甲醇溶液(含2％甲酸)冲洗去杂，再用300mL体积百分比浓度为70％的丙酮洗脱，收集丙酮洗脱部分，30℃减压蒸发除去丙酮，水相经冷冻干燥后得到白色粉末状固体1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品3.2g。其ESI-MS质谱图(负离子模式)见图2，红外光谱图见图3。实施例2：称取单宁酸原料25.0g置于500mL圆底烧瓶中，加入500mL体积百分比浓度为70％甲醇醋酸溶液(0.1M，pH5.0)于65℃反应15h。反应结束后于40℃下减压旋转蒸发除去甲醇，加水补充至原溶液体积。将上述所得溶液分别用等体积的乙醚和乙酸乙酯萃取3次。将3次乙酸乙酯萃取部分合并后经40℃下减压蒸发除去溶剂，经冷冻干燥后得到1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖粗产品。粗产品用少量甲醇溶解后上SephardexLH_20葡聚糖凝胶色谱柱，先用500mL体积百分比浓度为50％甲醇溶液(含2％甲酸)冲洗去杂，再用300mL体积百分比浓度为70％的丙酮洗脱，收集丙酮洗脱部分，40℃减压蒸发除去丙酮，水相经冷冻干燥后得到1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品4.1g，白色粉末状固体。实施例3：称取单宁酸原料25.0g置于500mL圆底烧瓶中，加入500mL体积百分比浓度为70％甲醇醋酸溶液(0.1M，pH5.0)于65℃反应15h。反应结束后于40℃下减压旋转蒸发除去甲醇，加水补充至原溶液体积。将上述所得溶液分别用等体积的乙醚和乙酸乙酯萃取3次。将3次乙酸乙酯萃取部分合并后经40℃下减压蒸发除去溶剂，经冷冻干燥后得到1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖粗产品。粗产品用少量甲醇溶解后上SephardexLH_20葡聚糖凝胶色谱柱，先用500mL体积百分比浓度为50％甲醇溶液(含2％甲酸)冲洗去杂，再用300mL体积百分比浓度为70％的丙酮洗脱，收集丙酮洗脱部分，40℃减压蒸发除去丙酮，水相经冷冻干燥后得到1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品4.5g，白色粉末状固体。实施例4：1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的结构鉴定1H-NMR(500MHz,methanol-d4)δ:4.42(2H,m,H-6),4.53(1H,m,H-5),5.62(1H,dd,J＝1.6,8.4Hz,H-2),5.64(1H,t,J＝9.6Hz,H-4),5.93(1H,t,J＝9.6Hz,H-3),6.27(1H,d,J＝8.4Hz,H-1),6.93,6.98,7.01,7.08,7.14(each2H,s,H-galloyl-2,6)；13C-NMR(100MHz,methanol-d4)δ:61.76(C-6),68.46(C-4),70.83(C-2),72.75(C-3),73.05(C-5),92.46(C-1),109.00,109.04,109.12,109.28(each2C,C-galloyl-2,6),118.37,118.85,118.89,119.00,119.69(each1C,C-galloyl-1),138.62,138.74,138.92,138.97,139.38(each1C,C-galloyl-4),144.89,144.98,145.04,145.07,145.16(each2C,C-galloyl-3,5),164本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种1，2，3，4，6‑O‑五没食子酰葡萄糖标准样品的制备方法及应用，其特征在于，制备方法包括以下步骤：(1)以单宁酸作为材料，将单宁酸按照单宁酸∶甲醇醋酸溶液＝1∶5‑20(g/mL)的比例溶解于甲醇醋酸溶液中于65℃反应15h。其中甲醇醋酸溶液中甲醇体积百分比浓度为70％，浓度为0.1M的醋酸。(2)反应结束后于30‑40℃下减压旋转蒸发除去甲醇，加水补充至原溶液体积。(3)将上述(2)所得溶液分别用等体积的乙醚和乙酸乙酯萃取3次。(4)将乙酸乙酯萃取部分合并后经减压蒸发除去溶剂，并经冷冻干燥后获得1，2，3，4，6‑O‑五没食子酰葡萄糖粗品。(5)粗产品用少量甲醇溶解，上葡聚糖凝胶色谱柱，先用体积百分比浓度为50％甲醇溶液(含2％甲酸)冲洗去杂，再用体积百分比浓度为70％的丙酮洗脱，收集丙酮洗脱部分，减压蒸发除去丙酮，水相经冷冻干燥后得到1，2，3，4，6‑O‑五没食子酰葡萄糖纯品，呈白色粉末状固体。

【技术特征摘要】
2017.09.05 CN 20171079062181.一种1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖标准样品的制备方法及应用，其特征在于，制备方法包括以下步骤：(1)以单宁酸作为材料，将单宁酸按照单宁酸∶甲醇醋酸溶液＝1∶5-20(g/mL)的比例溶解于甲醇醋酸溶液中于65℃反应15h。其中甲醇醋酸溶液中甲醇体积百分比浓度为70％，浓度为0.1M的醋酸。(2)反应结束后于30-40℃下减压旋转蒸发除去甲醇，加水补充至原溶液体积。(3)将上述(2)所得溶液分别用等体积的乙醚和乙酸乙酯萃取3次。(4)将乙酸乙酯萃取部分合并后经减压蒸发除去溶剂，并经冷冻干燥后获得1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖粗品。(5)粗产品用少量甲醇溶解，上葡聚糖凝胶色谱柱，先用体积百分比浓度为50％甲醇溶液(含2％甲酸)冲洗去杂，再用体积百分比浓度为70％的丙酮洗脱，收集丙酮洗脱部分，减压蒸发除去...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亮亮，汪咏梅，徐曼，胡新宇，刘瑜琛，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32