一种胸腺法新的制备方法及其药物组合物技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种胸腺法新的制备方法及含有胸腺法新的药物组合物，该制备方法采用葡聚糖G型凝胶和氰基硅烷键合硅胶洗脱；采用本发明专利技术方法纯化的胸腺法新中，测定的杂质[D‑Ser1]‑胸腺法新和[D‑Asn28]‑胸腺法新均小于0.07％；本发明专利技术所述组合物制得的冻干粉针剂溶解性好、稳定性好、复溶性好；由该组合物制得的冻干粉针剂使用方便，利于贮运，其制备方法简单，易于工业化生产，且生产成本低。

A new preparation method of thymus method and its pharmaceutical composition

The invention belongs to the field of medicine technology, and specifically relates to a new preparation method of thymus method and a new pharmaceutical composition containing thymus method. The preparation method adopts dextran G gel and cyanosilane bonded silica gel to elute, and the impurities of [D, Ser1], thymus, and [D Asn2 are purified by thymus method. 8] Thymus method is less than 0.07%; the freeze-dried powder injection prepared by the composition has good solubility, stability and solubility; the freeze-dried powder injection prepared by the composition is convenient to use, convenient to store and transport, simple preparation method, easy to industrialize production and low production cost.

【技术实现步骤摘要】
一种胸腺法新的制备方法及其药物组合物
本专利技术属于医药
，具体涉及胸腺法新的制备方法及含有胸腺法新的药物组合物。
技术介绍
胸腺法新(Thymosinα1，又称胸腺素α1)，分子式为C129H215N33O55，是由28个氨基酸组成的多肽，相对分子质量为3108.28，为白色或类白色粉末，其氨基酸组成序列为N-Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH。80年代初美国的Merrifield等实验室人工合成了胸腺法新，目前，美国Sciclone和意大利SclavoSPA的胸腺法新产品，已在意大利等多个国家上市，商品名为Zadxin(日达仙)，早在上世纪末就已进入中国市场。中国专利CN201210052504公开了一种胸腺法新的纯化方法，具体步骤包括活性炭吸附过滤、中性氧化铝色谱柱分离、超滤膜浓缩、乙醚沉降离心洗涤、干燥。中国专利CN201110186259采用反相C18填料，依次采用0.1％TFA/乙腈、0.2％磷酸/乙腈和水/乙腈分别对胸腺法新粗肽进行第一次、第二次纯化和转盐制备。产品冻干后纯度达99％以上。中国专利CN200910304817提供了一种胸腺法新脱盐工艺。其工艺步骤为：将酸化后的胸腺肽α1溶液与阳离子交换树脂混合后先用水洗脱离子交换树脂，再用碱性溶液洗脱交换树脂，收集在230nm波长处有吸收的洗脱液，最后经浓缩干燥，得胸腺法新。具有样品处理量大，脱盐效率好，可重复上样，适合于工业化大生产的特点。现有胸腺法新的固相合成过程中，由于合成步骤较多，加入的原料数量较多，造成产物杂质种类比较多，已知的杂质包括：D-Asn28-胸腺法新、Asp28-胸腺法新、di-Ala4-胸腺法新等，未知杂质还有很多。胸腺法新是一种多肽，对酸碱度、温度等都很敏感，且在水中的稳定性差。为了增加胸腺法新制剂的稳定性，临床上将其制备成冻干粉针，且要求在2～8℃条件下保存，但注射用胸腺法新在生产环节上，需要使用2～8℃的注射用水配制灌装才能保证制剂的质量。中国专利申请201110220652公开了一种含有胸腺法新的药用组合物及其制备方法，该药物组合物含有以下成分：胸腺法新、甘露醇、山梨醇0.01M醋酸-醋酸钠缓冲溶液调节pH至3.8～4.2，但是正常人体血液的pH值为7.35～7.45，在此范围外的溶液会对血管内皮细胞造成损伤，并诱发血小板聚集和激发的血栓性静脉炎的链式反应。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，我们进行了大量的试验探索，发现添加磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液以及一定比例的聚右旋糖和甘氨酸可以明显提高胸腺法新注射制剂的稳定性。具体而言，本专利技术提供了：一种胸腺法新的纯化方法，包括以下步骤：步骤1：将胸腺法新粗品溶解在磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液缓冲液中，以葡聚糖G型凝胶为固定相，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液为流动相，收集目的峰获得第一洗脱液，冻干；步骤2：将第一洗脱液的冻干粉溶解于流动相A中，以氰基硅烷键合硅胶为固定相，以质量浓度为0.05～0.1％高氯酸的1％乙腈水溶液为A相，质量浓度为0.05～0.1％高氯酸的95％乙腈水溶液为B相，梯度为40％B→70％B，进行第二次纯化，线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用滤膜过滤，浓缩；步骤3：向浓缩液中缓慢加入乙醚，搅拌，在4-6℃下静置10-12小时后，析出胸腺法新。所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH为2.0～4.0。一种含有胸腺法新的药物组合物，包含胸腺法新、赋形剂、缓冲对，其特征在所述的赋形剂为右旋糖和甘氨酸组成的混合物。所述组合物包含以下重量份的成分：1.5～2重量份胸腺法新、40-60重量份赋形剂、缓冲对适量。所述赋形剂中聚右旋糖为喷雾干燥聚右旋糖。所述赋形剂中聚右旋糖和甘氨酸的重量比为(3～5)：1。所述药物组合物中使用的缓冲对为pH＝7.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。所述的组合物的pH值为6.6～7.5。一种含有胸腺法新的药物组合物制备冻干粉针的方法，该方法包括以下步骤：取赋形剂溶解于2/3处方量的注射用水中，搅匀；加入处方量胸腺法新，测pH值，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH至6.6～7.5，加入注射用水至全量，用微孔滤膜精滤，冻干得冻干粉针。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1、采用本专利技术方法纯化的胸腺法新中，测定的杂质[D-Ser1]-胸腺法新和[D-Asn28]-胸腺法新均小于0.07％。2、由该组合物制得的冻干粉针剂稳定性良好，复溶性好；由该组合物制得的冻干粉针剂使用方便，利于贮运，其制备方法简单，易于工业化生产，且生产成本低。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。按CN1390853A的方法制备的胸腺法新粗品，经检测其HPLC纯度为94.52％。实施例1步骤1：将胸腺法新粗品5g用pH2.6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液溶解，制成浓度200mg/ml的溶液，以SephadexG-15为固定相，以pH2.6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液为流动相，洗脱速度为2ml/min，洗脱20min，检测波长为210nm，收集目的峰获得第一洗脱液，冻干；步骤2：将第一洗脱液的冻干粉4.2g溶解于流动相A中，以YMC-PackCN为固定相，以质量浓度为0.05％高氯酸的乙腈水溶液A(体积比为99％水/1％乙腈)为A相，质量浓度为0.05％高氯酸的乙腈水溶液B(体积比为5％水/95％乙腈)为B相，流速为60ml/min，洗脱30min，梯度为40％B→70％B，进行第二次纯化，检测波长为210nm，收集纯度大于95％以上洗脱液，将洗脱液用0.22μm滤膜过滤，浓缩；步骤3：向此浓缩液中缓慢加入8ml乙醚，搅拌，在4-6℃温度下静置10-12小时后，将析出的胸腺法新干燥，得纯度为99.93％的胸腺法新2.82g，纯化总收率为56.4％。实施例2步骤1：将胸腺法新粗品8g溶解在pH2.6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液溶解，制成浓度250mg/ml的溶液，以SephadexG-25为固定相，pH2.6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液为流动相，洗脱速度为5ml/min，洗脱20min，检测波长为210nm，收集目的峰获得第一洗脱液，冻干；步骤2：将第一洗脱液的冻干粉7.1g溶解于流动相A中，以YMC-PackCN为固定相，以质量浓度为0.1％高氯酸的乙腈水溶液A(体积比为99％水/1％乙腈)为A相，质量浓度为0.1％高氯酸的乙腈水溶液B(体积比为5％水/95％乙腈)为B相，流速为75ml/min，洗脱25min，梯度为40％B→70％B，进行第二次纯化，检测波长为210nm，收集纯度大于95％以上洗脱液，将洗脱液用0.22μm滤膜过滤，浓缩；步骤3：向此浓缩液中缓慢加入10ml乙醚，搅拌，在4-6℃温度下静置10-12小时后，将析出的胸腺法新干燥，得纯度为99.81％的胸腺法新4.87g，纯化总收率为60.9％。实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胸腺法新的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：步骤1：将胸腺法新粗品溶解在磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液中，以葡聚糖G型凝胶为固定相，磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液为流动相，收集目的峰获得第一洗脱液，冻干；步骤2：将第一洗脱液的冻干粉溶解于流动相A中，以氰基硅烷键合硅胶为固定相，以质量浓度为0.05～0.1％高氯酸的1％乙腈水溶液为A相，质量浓度为0.05～0.1％高氯酸的95％乙腈水溶液为B相，梯度为40％B→70％B，进行第二次纯化，线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用滤膜过滤，浓缩；步骤3：向浓缩液中加入乙醚，搅拌，在4‑6℃下静置10‑12小时后，析出胸腺法新。

【技术特征摘要】
1.一种胸腺法新的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：步骤1：将胸腺法新粗品溶解在磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，以葡聚糖G型凝胶为固定相，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液为流动相，收集目的峰获得第一洗脱液，冻干；步骤2：将第一洗脱液的冻干粉溶解于流动相A中，以氰基硅烷键合硅胶为固定相，以质量浓度为0.05～0.1％高氯酸的1％乙腈水溶液为A相，质量浓度为0.05～0.1％高氯酸的95％乙腈水溶液为B相，梯度为40％B→70％B，进行第二次纯化，线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用滤膜过滤，浓缩；步骤3：向浓缩液中加入乙醚，搅拌，在4-6℃下静置10-12小时后，析出胸腺法新。2.根据权利要求1所述的一种胸腺法新的制备方法，其特征在于，其中所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH为2.0～4.0。3.一种含有胸腺法新的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含胸腺法新、赋形剂、缓冲液，所述的赋形剂为聚右旋...

【专利技术属性】
技术研发人员：李霞，王燕，
申请(专利权)人：李霞，
类型：发明
国别省市：北京,11