一种杨梅素的分析测定方法技术

一种杨梅素的分析测定方法，包括的步骤有待测试样品溶液的制备，标准样品溶液的制备，在容量瓶中加入标准样品溶液、ZrOCl2溶液和缓冲液，去离子水定容，使用荧光分光光度计扫描荧光光谱，测量λex/λem=460/545 nm的荧光强度IF，绘制以杨梅素标准品浓度为横坐标，荧光强度值为纵坐标的杨梅素标准曲线，再利用线性回归方程计算样品溶液中杨梅素的浓度。本方法采用荧光光谱法测定藤茶中杨梅素的含量，操作简便快捷，结果准确，能够有效避免结构类似物二氢杨梅素的干扰。

An analytical method for determination of myricetin

A method for the determination of myricetin is described. The steps include preparation of sample solution to be tested, preparation of standard sample solution, addition of standard sample solution, ZrOCl 2 solution and buffer solution to a volumetric flask, volume determination with deionized water, scanning fluorescence spectrum with a fluorescence spectrometer, and measurement of fluorescence intensity at lambda ex/lambda em=460/545 nm. Degree IF was used to draw the myricetin standard curve with myricetin concentration as abscissa and fluorescence intensity as ordinate. The myricetin concentration in sample solution was calculated by linear regression equation. This method is simple, rapid, accurate and can effectively avoid the interference of dihydromyricetin, a structural analogue.

【技术实现步骤摘要】
一种杨梅素的分析测定方法
本专利技术涉及一种杨梅素的测定方法，属于分析化学

技术介绍
杨梅素，又称杨梅黄酮、杨梅酮，属黄酮醇类化合物，普遍存在于豆科(Leguminosae)、报春花科(Primulaceae)、葡萄科(Vitaceae)、菊科(Compositae)等植物中。其主要来源于杨梅科杨梅属植物杨梅Myricarubra(Lour)Sieb.etZucc.的树叶、皮、根等的提取物；杨梅是原产中国的亚热带果树之一，主要分布于宁波余姚和慈溪等地。杨梅树皮和树叶中的活性成分杨梅素有多种理化作用：(1)血小板活化因子(PAF)的拮抗作用，具有抗血栓、抗心肌缺血、改善微循环等多方面的心血管药理作用，(2)降血糖作用；(3)抗氧化作用；(4)保肝护肝作用；(5)解痉乙醇中毒；除上述已经验证的药理作用外，还具有抗炎、抗肿瘤、抗突变、预防龋齿、抗氧化性、消除体内自由基等多种药理作用。杨梅素的结构通式为目前检测杨梅素的方法主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法等，中国专利201610079019.9中介绍一种用HPLC测定藤茶中11中黄酮类各成分的方法，它利用高压液相色谱可检测二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、杨梅素等黄酮类物质，但是采用高压液相色谱法分析检测的速度慢、药品、溶剂消耗大，而由于杨梅素和二氢杨梅素在测定波长下的吸光度相互干扰，采用紫外分光光度法分析结果不准确。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种杨梅素的分析测定方法，通过藤茶样品中的杨梅素与ZrOCl2络合成具有荧光的产物，利用荧光光谱法计算杨梅素的含量，所述方法具有操作简便快捷、结果准确、稳定性好的特点。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种杨梅素的分析测定方法，它包括如下步骤：a、制备测试样品：准确称取藤茶粉末，用少量甲醇浸泡，取上清液，用甲醇定容到棕色容量瓶中，得浓度为1.00-2.00mg/mL的藤茶样品溶液；b、制备标准样品：称取杨梅素标准品，用甲醇溶解配制成不同浓度的系列杨梅素标准品溶液；c、绘制标准曲线：在若干容量瓶中分别加入CH3COONa-CH3COOH缓冲液和ZrOCl2溶液，再分别加入步骤b制得的系列杨梅素标准品溶液，用去离子水定容，摇匀，放置1h后用荧光分光光度计扫描荧光光谱，测量λex/λem＝460/545nm的荧光强度IF，以杨梅素标准品的浓度为横坐标，荧光强度值为纵坐标作杨梅素标准曲线，得出荧光强度和标准品浓度的线性回归方程，IF＝-0.29+1999.78c；d、测定样品：在容量瓶中加入步骤a制得的测试样品溶液，重复步骤c，扫描荧光光谱，测量待测样品在λex/λem＝460/545nm的荧光强度，利用线性回归方程计算样品溶液中杨梅素的浓度。上述杨梅素的分析测定方法，所述步骤c和步骤d中定容后反应溶液的pH值为4.0-4.5。上述杨梅素的分析测定方法，所述ZrOCl2溶液是质量百分比浓度为2％的二氯氧化锆甲醇溶液，反应溶液中ZrOCl2的浓度为7.2×10-3-9.1×10-3mol/L。上述杨梅素的分析测定方法，所述步骤c和步骤d的反应溶液中甲醇含量小于20％。上述杨梅素的分析测定方法，所述步骤a中将藤茶粉末浸泡于10mL甲醇中，50℃超声溶解30min，静置24h，离心取上清液于25mL棕色容量瓶中，甲醇定容，得藤茶样品溶液。本专利技术利用二氯氧化锆和样品中杨梅素络合成具有荧光的产物，再用荧光光谱法生成标准曲线，求得线性回归方程，从而计算出杨梅素的含量。利用ZrOCl2敏化荧光法分析藤茶中杨梅素含量是一种全新的检测杨梅素的方法，为藤茶质量评价提供了快速、准确的参考数据，可应用于实际样品如藤茶、杨梅的枝叶中杨梅素的检测。上述方法操作简单，只需将藤茶提取液与ZrOCl2溶液在有缓冲溶液的条件下混合，扫描荧光光谱即可分析得出其中的杨梅素的含量。同时它的分析速度快、反应灵敏度高，其检出的限量仅为3.3ng/mL，只有高压液相法3.1μg/mL的检出浓度的千分之一。荧光法具有选择性高的特点，由于二氢杨梅素与ZrOCl2溶液不发生反应，能够完全区分样品中的结构类似物二氢杨梅素，从而避免荧光分光光度法中二氢杨梅素对测定结果的干扰，测定结果准确、数据重现性好。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1是本专利技术标准溶液杨梅素(A)的三维荧光图谱；图2是本专利技术样品溶液藤茶(B)的三维荧光图谱；图3是本专利技术杨梅素系列标准溶液的三维荧光图谱；图4是本专利技术藤茶样品溶液的三维荧光图谱；图5是本专利技术藤茶样品加标系列溶液的三维荧光图谱；图6是本专利技术杨梅素的荧光法标准曲线图；图7是本专利技术杨梅素的荧光法加标曲线图；图8是本专利技术杨梅素的色谱法标准曲线图；图9是本专利技术杨梅素的色谱法加标曲线图。具体实施方式本专利技术所述的一种杨梅素的测定方法，包括如下步骤：a、制备测试样品：准确称取粉碎的藤茶粉末于25mL棕色容量瓶中，用少量甲醇浸泡，50℃超声溶解提取30min，静置24h离心，取上清液，用甲醇定容到25mL棕色容量瓶中，得浓度为1.00-2.00mg/mL的藤茶样品溶液。所述甲醇为无水甲醇。b、制备标准样品：准确称取杨梅素标准品于棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得浓度为1.00-10.00μg/mL的杨梅素标准品储备液。将杨梅素标准品储备液按照梯度稀释成一系列杨梅素标准品溶液。系列标准品溶液的浓度梯度范围为0.05-0.5μg/mL。c、绘制标准曲线：在若干10mL容量瓶中分别加入一定体积的浓度为2％的ZrOCl2溶液和CH3COONa-CH3COOH缓冲液，再分别加入步骤b制得的系列杨梅素标准品溶液，用去离子水定容，摇匀，溶液的pH值调节至4.2左右。放置1h后使用荧光分光光度计扫描荧光光谱，测量λex/λem＝460/545nm的荧光强度IF，以杨梅素标准品的浓度为横坐标，荧光强度值为纵坐标作杨梅素标准曲线图，根据标准曲线图得标准品浓度与荧光强度IF的线性回归方程。所述ZrOCl2溶液为质量百分比浓度为2％的二氯氧化锆甲醇溶液。所述荧光光谱的扫描范围为λex:330-550nm，λem:480-630nm，扫描间隔设定为5nm，狭缝宽度为ex/em:5.0/5.0，扫描速度为12000nm/min。d、测定样品溶液：取一定体积的步骤a制得的测试样品溶液加入到10mL容量瓶中，再加入2％的ZrOCl2溶液和CH3COONa和CH3COOH缓冲液，用去离子水定容，摇匀，使溶液的pH值调节至4.2。放置1h后使用荧光分光光度计扫描荧光光谱，测量λex/λem＝460/545nm的荧光强度IF。利用步骤c得到的线性回归方程计算测试样品溶液中杨梅素的浓度。反应溶液的pH范围在4.0-4.5时，杨梅素与Zr形成稳定的络合物，有利于荧光光谱测定。pH过低小于3.5时，ZrOCl2在酸性环境中以Zr4+存在，与杨梅素不容易结合；pH过高大于5.0时，ZrOCl2发生水解，与杨梅素的结合能力降低，从而荧光降低。所述ZrOCl2溶液是浓度为2％(w/w)二氯氧化锆甲醇溶液。ZrOCl2的加入量为在反应溶液中其浓度范围为4.5×10-3-1.0×10-3mol/L，ZrOCl2的浓度优选为7.2×10-3-9.1×10-3mol/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杨梅素的分析测定方法，其特征在于，它包括如下步骤：a、制备测试样品：准确称取藤茶粉末用少量甲醇浸泡，取上清液，用甲醇定容到棕色容量瓶中，得浓度为1.00‑2.00 mg/mL的藤茶样品溶液；b、制备标准样品：称取杨梅素标准品，用甲醇溶解配制成不同浓度的系列杨梅素标准品溶液；c、绘制标准曲线：在若干容量瓶中分别加入CH3COONa‑CH3COOH缓冲液和ZrOCl2溶液，再分别加入步骤b制得的系列杨梅素标准品溶液，用去离子水定容，摇匀，放置1 h后用荧光分光光度计扫描荧光光谱，测量λex/λem=460/545 nm的荧光强度IF，以杨梅素标准品的浓度为横坐标，荧光强度值为纵坐标作杨梅素标准曲线，得出荧光强度和标准品浓度的线性回归方程，IF= ‑0.29+1999.78c；d、测定样品：在容量瓶中加入步骤a制得的测试样品溶液，重复步骤c，扫描荧光光谱，测量待测样品在λex/λem=460/545 nm的荧光强度，利用线性回归方程计算样品溶液中杨梅素的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种杨梅素的分析测定方法，其特征在于，它包括如下步骤：a、制备测试样品：准确称取藤茶粉末用少量甲醇浸泡，取上清液，用甲醇定容到棕色容量瓶中，得浓度为1.00-2.00mg/mL的藤茶样品溶液；b、制备标准样品：称取杨梅素标准品，用甲醇溶解配制成不同浓度的系列杨梅素标准品溶液；c、绘制标准曲线：在若干容量瓶中分别加入CH3COONa-CH3COOH缓冲液和ZrOCl2溶液，再分别加入步骤b制得的系列杨梅素标准品溶液，用去离子水定容，摇匀，放置1h后用荧光分光光度计扫描荧光光谱，测量λex/λem=460/545nm的荧光强度IF，以杨梅素标准品的浓度为横坐标，荧光强度值为纵坐标作杨梅素标准曲线，得出荧光强度和标准品浓度的线性回归方程，IF=-0.29+1999.78c；d、测定样品：在容量瓶中加入步骤a制得的测试样品溶液，重复步骤c，扫描...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文红，郭立达，徐凤娇，吕芳，宋瑛，曹津津，
申请(专利权)人：河北工业职业技术学院，
类型：发明
国别省市：河北,13