一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂。试剂R1中含有Tris缓冲液pH7.5、次黄嘌呤核苷、嘌呤核苷磷酸化酶PNP、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、甘油、丙二醇‑单甲醚、4‑甲基苯硼酸(4‑FPBA)、D‑海藻糖、氯化锂，试剂R2中含有Tris缓冲液pH7.5、2,4,6‑三溴‑3‑羟基苯甲酸(TBHBA)、NaN3 0.5g/L，该试剂适合与各种全自动生化分析仪配套使用，准确度和抗干扰能力良好，且具有良好的热稳定性。

A highly stable serum inorganic phosphorus (enzyme) detection kit

The invention relates to the technical field of clinical in vitro detection reagents, in particular to a stable serum inorganic phosphorus (enzyme method) detection reagent. Reagent R1 contains Tris buffer pH 7.5, hypoxanthine nucleoside, purine nucleoside phosphorylase PNP, xanthine oxidase, peroxidase, glycerol, propylene glycol monomethyl ether, 4_methylphenylboric acid (4_FPBA), D_trehalose, lithium chloride, reagent R2 contains Tris buffer pH 7.5, 2,4,6_tribromo_3_hydroxybenzoic acid (TBH_3_hydroxybenzoic acid). BA, NaN3 0.5g/L, this reagent is suitable for all kinds of automatic biochemical analyzer matching use, accuracy and anti-interference ability is good, and has good thermal stability.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒
本专利技术涉及临床体外检测试剂
，特别涉及一种稳定性强的血清无机磷（酶法）检测试剂。
技术介绍
1.背景人体内含磷(Phosphorus)约17mol(530g)，其中87%存在于骨骼中，其余存在于软组织、细胞内。体内许多重要的物质如某些蛋白质、酯类化合物、核酸、辅酶等都含有磷，在酸碱平衡中磷酸盐也具有重要作用。血液中的磷可分为4部分：无机磷、有机磷或磷酸酯、含磷脂类和少量的其他磷化物。血液中的磷与骨骼中的磷维持动态平衡，体内的磷主要以磷酸基形式参与许多对生命活动非常重要的物质代谢过程。例如：构成磷脂，进而与蛋白质构成细胞的组成成分；参与能量代谢，尤其是氧化磷酸化过程，形成ATP等；参与DNA、RNA以及许多辅酶(如焦磷酸硫胺素、辅酶I及辅酶II等)的构成；磷还作为某些酶的激活剂或抑制剂，参与多种酶促反应，糖、脂类和蛋白代谢过程中的许多生化反应，也都需要磷参与。2.临床意义血清无机磷增高：甲状旁腺功能减退症、假性甲状旁腺功能减退症、维生素D过多症、肾功能不全或衰竭、多发生骨髓瘤和骨折愈合期、急性酸中毒、白血病、淋巴瘤、骨肿瘤、老年性白内障、妊高征孕妇。高磷血症常无症状，但当钙、磷浓度(mg/dl)乘积大于70时，可发生转移性钙化，引起钙盐在关节、韧带、心肌、血管、皮下、角膜、结膜等以为沉淀，临床出现关节痛、眼结膜炎、角膜炎及皮肤瘙痒等症状。此外，高磷血症常伴有不同程度的低钙血症和肾功能衰竭的有关症状。血清无机磷降低：甲状旁腺功能亢进症、佝偻病或软骨病、糖利用增加、肾小管变性病变、乳糜泻、甲亢、肝硬化和肺心病。3.检测方法目前无机磷测定使用的方法有比色法、分光光度法和酶法。(1)硫酸亚铁磷钼蓝比色法原理：以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合生成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成蓝色化合物，进行比色测定。评价：该方法需要样本除蛋白，操作步骤繁琐，误差大。(2)紫外分光光度法原理：血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵作用所形成的复合物，直接在340nm或325nm波长测定其吸光度。评价：该方法显色稳定，试剂配置简单，且适用于全自动生化分析仪，但由于血清中存在还原性物质，容易导致检测结果不准确。(3)黄嘌呤氧化酶比色测定法原理：磷酸盐阴离子与次黄嘌呤核苷酸在嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)的催化下，生成次黄嘌呤和核糖-1-磷酸。黄嘌呤氧化酶氧化次黄嘌呤生成尿酸和过氧化氢。用Trinder反应呈色，吸光度的变化与磷酸盐阴离子的浓度成比例。评价：该方法操作简便，具有良好的线性、重复性和抗干扰能力，适合全自动生化分析仪。
技术实现思路
针对于血清无机磷检测，本专利技术提供了一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒，该试剂盒与常规检测方法相比，具有良好的热稳定性，且使用简单、方便，具有很好的准确度、重复性及良好的检测范围，有利于试剂在临床上的推广应用。本专利技术是通过以下步骤得到的：一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒，包括试剂R1、R2，组成成分如下：R1：Tris缓冲液（pH7.5）50mmol/L次黄嘌呤核苷0.3mmol/L嘌呤核苷磷酸化酶PNP100U/L黄嘌呤氧化酶20U/L过氧化物酶2KUL甘油1%丙二醇-单甲醚20mmol/L4-甲基苯硼酸(4-FPBA)0.01%D-海藻糖5g/L氯化锂5mmol/LR2：Tris缓冲液（pH7.5）50mmol/L2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸(TBHBA)5mmol/LNaN30.5g/L。一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒，其特征在于，所述试剂在使用时R1：R2=5:1,R1用量为250μl。本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术使用了氯化锂、甘油、D-海藻糖、丙二醇-单甲醚和4-甲基苯硼酸作为酶稳定剂，保证了试剂中的酶在37℃条件下能够稳定12d以上。（2）本专利技术使用了Tris盐酸缓冲液，将试剂的pH值稳定在酶的最适水平，保证了试剂的稳定性，提高了酶的催化效率。附图说明图1为实施例1试剂检测方法；图2为实施例1试剂抗干扰性能比较结果；图3为实施例1试剂与对照组试剂盒对比检测结果；图4为实施例1试剂与对照组试剂盒相关性曲线图；图5为实施例1试剂与对照组试剂热稳定性曲线图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明：(1)实施例1R1：Tris缓冲液（pH7.5）50mmol/L次黄嘌呤核苷0.3mmol/L嘌呤核苷磷酸化酶PNP100U/L黄嘌呤氧化酶20U/L过氧化物酶2KUL甘油1%丙二醇-单甲醚20mmol/L4-甲基苯硼酸(4-FPBA)0.01%D-海藻糖5g/L氯化锂5mmol/LR2：Tris缓冲液（pH7.5）50mmol/L2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸(TBHBA)5mmol/LNaN30.5g/L。本实施例试剂的使用方法：本实施例试剂在使用时采用全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用速率法进行测定。将样本和试剂的比例设定为10：250：50，检测波长为505nm，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作见图1。实施例2干扰性试验：取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到图2的要求。然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并认可的血清无机磷试剂同时对比测定血清无机磷的含量,对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见图2。相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%。由图2可以看出，实施例1试剂在胆红素≤300μmol/L、肌酐≤200μmol/L、血红蛋白≤200mg/L、甘油三酯≤2.5mmol/L、胆固醇≤50μmol/L情况下对测试结果没有明显干扰。与对照组结果相比，本专利技术试剂抗干扰能力较好，说明实施例1的试剂在准确度和抗干扰能力上达标。实施例3相关性实验：利用实施例1试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的血磷(酶法)试剂盒作为对照组试剂进行对照检测，同时检测20个临床血清样本，检测结果如图3所示，并获得了两种试剂的相关性曲线（如图4所示）。通过检测结果显示，两个试剂盒的相关系数为0.999，说明了两者有极大的相关性。试验所用校准品和质控品分别为：校准品：血清无机磷的含量为1.43mmol/L。质控品：血清无机磷的靶值为1.41mmol/L，靶值范围：1.20-1.62mmol/L。实施例4试剂稳定性验证试验：将本专利技术实施例1试剂作为试验组，取一种市售血清无机磷(酶法)检测试剂盒作为对照组，试验组与对照组试剂每组各自取一份，做37℃热稳定性检测试验，封闭放置在37℃恒温水浴锅中（每天仅在检测的时候取出，检测完毕后，依然封口放回37℃水浴锅中，连续12天），作为37℃热稳定性验证。将试剂同时在日立7180全自动生化分析仪器上，按照图1方法进行检测，并在仪器上建立标准曲线。取冻干粉质控品，溶解均匀后，平均分成15份，-20℃储存，每天质控一个，并且跟踪检测结果，其热稳定性跟踪监测趋势如图5。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒，其特征在于，由试剂R1、R2组成，组成成分：R1：Tris缓冲液（pH7.5）                  50mmol/L次黄嘌呤核苷                       0.3mmol/L嘌呤核苷磷酸化酶PNP                100U/L黄嘌呤氧化酶                       20U/L过氧化物酶                         2KUL甘油                               1%丙二醇‑单甲醚                      20mmol/L4‑甲基苯硼酸(4‑FPBA)               0.01%D‑海藻糖                           5g/L氯化锂                             5mmol/LR2：Tris缓冲液（pH7.5）                  50mmol/L2,4,6‑三溴‑3‑羟基苯甲酸(TBHBA)     5mmol/LNaN3                                               0.5g/L。...

【技术特征摘要】
1.一种稳定性强的血清无机磷(酶法)检测试剂盒，其特征在于，由试剂R1、R2组成，组成成分：R1：Tris缓冲液（pH7.5）50mmol/L次黄嘌呤核苷0.3mmol/L嘌呤核苷磷酸化酶PNP100U/L黄嘌呤氧化酶20U/L过氧化物酶2KUL甘油1%丙二醇-单甲醚20mmol/L4-甲基苯硼酸(4-FPBA)0.01%D-海藻糖5g/L氯化锂5mmol/LR2：Tris缓冲液（pH7.5）50mmol/L2,4,6-三溴...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗维晓，胡晓飞，王美丽，
申请(专利权)人：山东博科诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37