TCR及其用途制造技术

本发明专利技术涉及对与自身脂质(优选(mLPA)或其衍生物)相关的CD1c分子具有抗原特异性的TCR或其功能性变体，涉及相关多肽，蛋白质，核酸，重组表达载体，宿主细胞，细胞群，抗体和药物组合物。本发明专利技术还涉及所述TCR和相关产品的用途，特别是用于治疗和/或预防血液病症。

TCR and its use

The present invention relates to a TCR or its functional variant of CD1c molecules associated with their own lipid (mLPA) or its derivatives, involving related peptides, proteins, nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells, cell groups, antibodies and pharmaceutical compositions. The invention also relates to the uses of the TCR and related products, especially for the treatment and / or prevention of blood disorders.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TCR及其用途
本专利技术涉及对与自身脂质(优选(mLPA)或其衍生物)相关的CD1c分子具有抗原特异性的TCR或其功能性变体，涉及相关多肽，蛋白质，核酸，重组表达载体，宿主细胞，细胞群，抗体和药物组合物。本专利技术还涉及所述TCR和相关产品的用途，特别是用于治疗和/或预防血液病症。专利技术背景免疫系统通过感测致癌过程中产生的抗原差异在控制恶性细胞的生长中起关键作用。肿瘤特异性T细胞和抗原在癌症免疫治疗中得到积极利用，这种治疗可以达到治疗效果并且副作用很小。识别由CD1分子呈递的脂质抗原的T细胞的发现为基础和翻译免疫学开辟了新的视角。四种CD1a-d同种型是非多态性抗原呈递分子，其沿着不同的细胞内运输途径来调查内吞途径并交叉多种脂质Ag。CD1限制性T细胞的特征在于与MHC限制性T细胞相比的显著的自身反应性以及直接识别CD1表达细胞。最近专利技术人表明，CD1自反应T细胞占循环T细胞库的相当部分。他们假设这种CD1“自反应”T细胞响应可能参与肿瘤免疫监视，其中自身抗原是免疫响应的目标。专利技术人已经发现急性白血病母细胞表达不同的CD1同种型并且具有能够以CD1依赖性方式识别白血病细胞的分离的T细胞克隆，这表明癌症起源的脂质抗原可以是特异性响应的靶标。此外，他们已经分离并分子表征了白血病衍生的脂质抗原，该抗原被受限于CD1c的自身反应性T细胞克隆所识别，CD1c是由急性髓性白血病(AML)和B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)频繁表达的CD1同种型。由于CD1分子基本上仅在成熟白细胞上表达，因此使系统性GVHD的风险最小化，从而利用CD1限制性T细胞对自身脂质抗原的响应是白血病的过继免疫疗法的有力选择。此外，它们不是多态的，因此相同的CD1同种型将在所有个体中呈递相同的脂质抗原。考虑到在造血干细胞移植背景下的过继免疫治疗策略(成功治疗血液恶性肿瘤)，这具有进一步的优点，因为相同的异体CD1自反应T细胞可以用于治疗不同患者的白血病。本专利技术人进一步显示，在免疫缺陷小鼠模型中，mLPA特异性T细胞限制体内白血病进展，表明利用这些T细胞进行CD1c+急性白血病的过继免疫治疗的可能性。为了产生大量用于过继免疫疗法的肿瘤反应性T细胞，有可能产生表达重组抗原特异性T细胞受体(TCR)的T淋巴细胞。TCR以两种形式存在，如αβ异二聚体或γδ异二聚体。这四条链显示由“免疫球蛋白V区样”(V)N端结构域连接到“免疫球蛋白C区样”(C)第二结构域所组成的特征性结构。每个这些结构域都有一个特征性域内二硫桥。V区由V区段与J或D区段重排形成，并且是赋予T细胞抗原特异性的分子的一部分。CD1c自反应性TCR也由α链和β链形成，每个α链和β链由V区组成，它们共同赋予对CD1c分子和C区结合的脂质抗原的特异性。有可能将由CD1c自反应性T细胞克隆表达的TCR进行克隆并转移到多克隆T细胞中以将它们重定向至针对白血病细胞。每个TCR肽含有可变互补决定区(CDR)以及框架区(FR)和恒定区。αβT细胞的序列多样性很大程度上取决于a和β链可变结构域的第三互补决定区(CDR3)环的氨基酸序列，所述多样性是分别位于β链基因座中的可变(Vb)、多样性(Db)和连接(Jb)基因区段之间以及α链基因座中的类似Va和Ja基因区段之间的重组的结果。在TCRα和β链基因座中存在多个这样的基因区段，这允许编码大量不同的CDR3序列。在TCR基因重排过程中，通过在Vb-Db，Db-Jb和Va-Ja连接处独立添加和删除核苷酸，CDR3序列多样性进一步增加。在这方面，免疫活性反映在TCR的多样性中。
技术实现思路
本专利技术人发现CD1c自反应性T细胞识别新型的自身脂质，鉴定为甲基溶血磷脂酸，其积累在白血病细胞中。原发性急性髓性和B细胞急性白血病母细胞表达CD1分子。甲基溶血磷脂酸特异性T细胞有效地杀伤CD1c+急性白血病细胞，很少识别未转化的表达CD1c的细胞，并且保护免疫缺陷型小鼠免于CD1c+人类白血病细胞。白血病细胞中积累的免疫原性自体脂质抗原的鉴定以及脂质特异性T细胞在体内观察到的白血病控制为白血病免疫监视和可能的免疫治疗提供了新的概念框架。在本专利技术中，从健康供体和白血病患者中分离出不同的CD1c自反应性T细胞克隆，其选择性识别新型自身脂质肿瘤相关抗原(TAA)，所述抗原代表新型免疫疗法的潜在靶标。具体地，TAA是甲基溶血磷脂酸(mLPA)，C16-甲基溶血磷脂酸(C16-mLPA)或C18-甲基溶血磷脂酸(C18-mLPA)，属于一类新型脂质，仅当由CD1c+细胞呈递时其可作为T细胞-刺激抗原。已经从五个独立的CDlc自反应T细胞克隆中克隆了TCR。TCR可用于过继免疫治疗，细胞治疗，治疗白血病，预防造血干细胞移植(HSCT)后的白血病复发(目前无可用治疗)和改善HSCT疗效。然后，本专利技术提供了分离或纯化的T细胞受体(TCR)，其包含：-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa1)氨基酸序列：SEQ.IDNO:25,31,37,43和49，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa2)氨基酸序列：SEQ.IDNO:26,32,38,44和50，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa3)氨基酸序列：SEQ.IDNO:27,33,39,45和51，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb1)氨基酸序列：SEQ.IDNO:28,34,40,46和52，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb2)氨基酸序列：SEQ.IDNO:29,35,41,47和53，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb3)氨基酸序列：SEQ.IDNO:30,36,42,48和54。优选地，分离或纯化的T细胞受体(TCR)包含：-与SEQIDNO：25具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：26具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：27具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：28具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：29具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：30具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：31具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：32具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：33具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：34具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：35具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：36具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：37具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：38具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：39具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：40具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：41具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：42具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：43具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离或纯化的T细胞受体(TCR)，包含：‑与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa1)氨基酸序列：SEQ.ID NO:25,31,37,43和49，和；‑与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa2)氨基酸序列：SEQ.ID NO:26,32,38,44和50，和；‑与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa3)氨基酸序列：SEQ.ID NO:27,33,39,45和51，和；‑与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb1)氨基酸序列：SEQ.ID NO:28,34,40,46和52，和；‑与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb2)氨基酸序列：SEQ.ID NO:29,35,41,47和53，和；‑与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb3)氨基酸序列：SEQ.ID NO:30,36,42,48和54。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.01 IT EP15187993.91.一种分离或纯化的T细胞受体(TCR)，包含：-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa1)氨基酸序列：SEQ.IDNO:25,31,37,43和49，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa2)氨基酸序列：SEQ.IDNO:26,32,38,44和50，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRa3)氨基酸序列：SEQ.IDNO:27,33,39,45和51，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb1)氨基酸序列：SEQ.IDNO:28,34,40,46和52，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb2)氨基酸序列：SEQ.IDNO:29,35,41,47和53，和；-与选自下组的氨基酸序列具有至少80％相同性的互补决定区(CDRb3)氨基酸序列：SEQ.IDNO:30,36,42,48和54。2.如权利要求1所述的分离或纯化的T细胞受体(TCR)，其包含：-与SEQIDNO：25具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：26具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：27具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：28具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：29具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：30具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：31具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：32具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：33具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：34具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：35具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：36具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：37具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：38具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：39具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：40具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：41具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：42具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：43具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：44具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：45具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：46具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：47具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：48具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：49具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：50具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：51具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：52具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：53具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：54具有至少80％相同性的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的分离或纯化的T细胞受体(TCR)，其包含：-与SEQIDNO：25具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：26具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：27具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：28具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：29具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：30具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：31具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：32具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：33具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：34具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：35具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：36具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：37具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：38具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：39具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：40具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：41具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：42具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：43具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：44具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：45具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：46具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：47具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：48具有至少80％相同性的氨基酸序列，或-与SEQIDNO：49具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：50具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：51具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：52具有至少80％相同性的氨基酸序列，和与SEQIDNO：53具有至少80％相同性的氨基酸序列和与SEQIDNO：54具有至少80％相同性的氨基酸序列。4.如权利要求1或2所述的分离或纯化的T细胞受体(TCR)，其包含：-SEQIDNO:25,和SEQIDNO:26和SEQIDNO:27和SEQIDNO:28,和SEQIDNO:29和SEQIDNO:30，或-SEQIDNO:31,和SEQIDNO:32和SEQIDNO:33和SEQIDNO:34,和SEQIDNO:35和SEQIDNO:36，或-SEQIDNO:37,和SEQIDNO:38和SEQIDNO:39和SEQIDNO:40,和SEQIDNO:41和SEQIDNO:42，或-SEQIDNO:43,和SEQIDNO:44和SEQIDNO:45和SEQIDNO:46,和SEQIDNO:47和SEQIDNO:48，或-SEQIDNO:49,和SEQIDNO:50和SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·卡索拉蒂，P·德拉伯纳，C·德拉拉，C·加拉瓦格里亚，M·孔索尼，
申请(专利权)人：圣拉斐尔医院有限公司，圣拉斐尔基金会中心，
类型：发明
国别省市：意大利,IT