T细胞受体制造技术

本发明专利技术提供工程化的T细胞受体(TCR)，其包含至少一个以下氨基酸残基：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101；其中所述至少一个氨基酸残基不存在于相应的种系TCR氨基酸序列中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞受体专利
本专利技术涉及T细胞受体(TCR)。特别地，本专利技术涉及工程化的TCR，与相应的种系TCR序列相比，当作为外源TCR表达时，所述工程化的TCR具有高水平的细胞表面表达。本专利技术还涉及用于增加TCR的细胞表面表达的方法。专利技术背景T细胞受体(TCR)基因疗法是将抗原特异性TCR链转移到受体T细胞，从而将T淋巴细胞的特异性重新定向到感兴趣的靶抗原。引入的TCR在细胞表面上表达的能力方面差异很大。引入的强表达的TCR与内源TCR共表达，或甚至可以胜过内源TCR的细胞表面表达。当与内源强TCR共表达时，引入的弱表达的TCR不存在于细胞表面(图1)。在T细胞表面上抗原特异性TCR的高水平表达导致T细胞更高的亲合力，这有利于治疗性TCR疗法的功效。因此，需要增加弱表达的TCR的细胞表面表达的方法和途径。专利技术概述本专利技术人已经确定了TCR框架区内许多关键氨基酸位置和残基，其增强TCR细胞表面表达。因此，在第一方面，本专利技术提供了包含至以下氨基酸残基中的至少一个的工程化的TCR：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101；其中所述至少一个氨基酸残基不存在于相应的种系TCR氨基酸序列中。所述至少一个氨基酸残基可以选自以下列表：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；和β链的R43。工程化的TCR可以包含α链的L96。工程化的TCR可以包含β链的R9。工程化的TCR可以包含β链的Y10。工程化的的TCR可以包含α链的T24。工程化的TCR可以包含多个如本专利技术第一方面所定义的氨基酸残基。工程化的TCR可以包含α链的L96；β链的R9和β链的Y10。工程化的TCR可以包含α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101中的每一个。在第二方面，本专利技术提供了编码如本专利技术第一方面所定义的TCRα链和/或β链的核酸序列。核酸序列可以包含通过内部自切割序列或内部核糖体进入位点连接的编码α链的核酸序列和编码β链的核酸序列。在第三方面，本专利技术提供了包含根据本专利技术第二方面的核酸序列的载体。载体可以是逆转录病毒载体、慢病毒载体或转座子。在第四方面，本专利技术提供了包含根据本专利技术第二方面的核酸序列或根据本专利技术第三方面的载体的细胞。细胞可以是T细胞、天然杀伤细胞或干细胞。细胞可以衍生自从受试者分离的T细胞、天然杀伤细胞或干细胞。在第五方面，本专利技术提供了包含表达TCR的细胞的药物组合物，所述TCR包含以下氨基酸残基中的至少一个：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101。细胞可以表达包含多个如本专利技术第一方面所定义的氨基酸残基的TCR。细胞可以表达由本专利技术第一方面所定义的工程化的TCR。在第六方面，本专利技术涉及根据本专利技术第五方面的药物组合物，其用于治疗和/或预防疾病。在第七方面，本专利技术提供根据本专利技术第三方面的载体或根据本专利技术第四方面的细胞，其用于制备用于治疗和/或预防疾病的药物。在第八方面，本专利技术涉及用于治疗疾病的方法，其包括向受试者施用根据本专利技术第四方面的细胞的步骤。在第九方面，本专利技术涉及用于产生根据本专利技术第四方面的细胞的方法，其包括用根据本专利技术第三方面的载体体外或离体转导细胞的步骤。在第十方面，本专利技术提供了用于增加TCR的细胞表面表达的方法，其包括以下步骤：(i)提供TCRα链和/或β链序列；(ii)确定在选自以下的一个或多个位置的TCRα链和/或β链序列的氨基酸残基：α链的L96；Β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101；并且(iii)将步骤(ii)中列出的一个或多个位置处的氨基酸残基改变为选自以下的氨基酸残基：α链的L96；Β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101。该方法可以包括改变TCR氨基酸序列使其包含多个如本专利技术第一方面所定义的氨基酸残基的步骤。可以通过诱变本文档来自技高网...

【技术保护点】
工程化的T细胞受体(TCR)，其包含至少一个以下氨基酸残基：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101；其中所述至少一个氨基酸残基不存在于相应的种系TCR氨基酸序列中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.20 GB 1506642.61.工程化的T细胞受体(TCR)，其包含至少一个以下氨基酸残基：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101；其中所述至少一个氨基酸残基不存在于相应的种系TCR氨基酸序列中。2.根据权利要求1的工程化的TCR，其中所述至少一个氨基酸残基选自：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；或β链的R43。3.根据权利要求1的工程化的TCR，其包含α链的L96。4.根据权利要求1的工程化的TCR，其包含β链的R9。5.根据权利要求1的工程化的TCR，其包含β链的Y10。6.根据权利要求所述的工程化的TCR，其包含α链的T24。7.根据权利要求1至6中任一项所述的工程化的TCR，其包含多个如权利要求1或权利要求2所定义的氨基酸残基。8.根据权利要求7的工程化的TCR，其包含α链的L96；β链的R9和β链的Y10。9.根据前述权利要求中任一项所述的工程化的TCR，其包括以下各项：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101。10.核酸序列，其编码如前述权利要求中任一项定义的TCRα链和/或β链。11.根据权利要求10的核酸序列，其包含通过内部自切割序列或内部核糖体进入位点连接的编码α链的核酸序列和编码β链的核酸序列。12.载体，其包含根据权利要求10或11的核酸序列。13.根据权利要求12的逆转录病毒载体、慢病毒载体或转座子。14.细胞，其包含根据权利要求10或11的核酸序列或根据权利要求12或13的载体。15.根据权利要求14的细胞，其是T细胞、天然杀伤细胞或干细胞。16.根据权利要求15的细胞，其衍生自从受试者分离的T细胞、天然杀伤细胞或干细胞。17.药物组合物，其包含表达包含至少一个以下氨基酸残基的TCR的细胞：α链的L96；β链的R9；β链的Y10；α链的T24；α链的V19；α链的T20；α链的M50；α链的T5；α链的Q8；α链的S86；α链的F39；α链的D55；β链的R43；α链的A66；β链的V19；β链的L21；β链的L103；α链的T3；α链的S7；α链的P9；α链的M11；α链的A16；α链的T18；α链的L21；α链的S22；α链的D26；α链的F40；α链的S47；α链的R48；α链的Q49；α链的I51；α链的L52；α链的V53；α链的T67；α链的E68；α链的N74；α链的F76；α链的N79；α链的Q81；α链的A83；α链的K90；α链的S92；α链的D93；和α链的M101。18.药物组合物，其包含表达如权利要求1至9中任一项所定义的TCR的细胞。19.根据权利要求17或18的药物组合物，其用于治疗和/或预防疾病。20.根据权利要求12或13的载体或根据权利要求14至16中任一项的细胞，其用于制备用于治疗和/或预防疾病的药物。21.用于治疗疾病的方法，其包括将权利要求14至16中任一项的细胞施用于受试者的步骤。22.用于产生根据权利要求14至16中任一项的细胞的方法，其包括用根据权利要求12或13的载体体外或离体转导细胞的步骤。23.用于增加TCR的细胞表面表达的方法，其包括以下步骤：(i)提供TCRα链和/或β...

【专利技术属性】
技术研发人员：H斯陶斯，S托马斯，B威尔科克斯，F穆罕默德，
申请(专利权)人：UCL商务股份有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB