一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法技术

本发明专利技术提供了一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法。该技术方案首先考察了土茯苓中落新妇苷四种异构体间的相互转化关系，意外发现在抗坏血酸存在下，特定的pH及温度条件能启动落新妇苷向新落新妇苷的异构化反应，基于这种有益的发现，本发明专利技术以异构化方向、转化程度、产物分解程度等为导向，摸索了最佳的反应条件；在该条件下，落新妇苷主要异构化为新落新妇苷，并且分解速度较慢。以此为基础，本发明专利技术进一步设计了前端的浸提条件以及后续的纯化方法。应用本方明方法，可将土茯苓中落新妇苷大部分转化为新落新妇苷，从而使土茯苓提取物中新落新妇苷含量提高近9倍，极大地提高了从土茯苓中分离纯化新落新妇苷的效率。

A new method for preparation of new aglycone from Smilax glabra

The invention provides a new method for preparing new aglycone from Smilax glabra. The technical scheme first investigated the interaction between four isomers of sucsin in Smilax glabra. It was found that in the presence of ascorbic acid, specific pH and temperature conditions could initiate the isomerization of new aglyin to new aglyin. Based on this useful discovery, the invention is based on the direction of isomerization, transformation, and production. In this condition, the main isomerization of the isomerization is new inososide, and the decomposition rate is slow. Based on this, the invention further designs the extraction conditions of the front end and the subsequent purification method. By using this method, the most of the tuckahoin could be transformed into new inoside, which could increase the content of new aglycone in the extract of Smilax glabra by nearly 9 times, and greatly improved the efficiency of separating and purifying new aglycone from Poria.

【技术实现步骤摘要】
一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法
本专利技术涉及植物活性成分提取
，具体涉及一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法。
技术介绍
落新妇苷，即2(R):3(R)-3’,4’,5,7-4羟基磺烷酮-3-α-L-吡喃鼠李糖，是中药土茯苓的主要功效成分。落新妇苷有多种生物活性，如选择性免疫抑制、调节脂肪代谢、抗氧化、护肝作用等。根据落新妇苷分子结构，其在C2和C3位上存在立体异构现象，分别有2(R):3(R)(落新妇苷)、2(S):3(S)(新落新妇苷)、2(S):3(R)(新异落新妇苷)和2(R):3(S)(异落新妇苷)四种异构体。化合物的异构现象可能会影响其生物活性，一些药物的两种对映体有着完全不同的药理作用。因此有必要针对其异构体的生物学活性展开研究。土茯苓中同时含有落新妇苷的四种异构体，但落新妇苷含量最高，其他三种异构体含量很低，因此，采用常规浸提的方法只能得到以落新妇苷占绝大成分的提取物，既无法实现异构体之间的分离，也无法提升新落新妇苷成分的占比。因此从土茯苓中直接分离落新妇苷的方法目前已较为成熟，而从中获取新落新妇苷的方法却鲜有报道，即使有研究者取得了一定的成功，其收率也处于较低水平。这极大阻碍了新落新妇苷的性质研究以及深度应用。
技术实现思路
本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，以解决现有技术中缺乏一种此类方法的技术问题。本专利技术要解决的另一技术问题是，在以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法中，如何提升收率。本专利技术要解决的再一技术问题是，常规提取方法所获得的土茯苓提取物中，落新妇苷占主要成分，而新落新妇苷占比很低。为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，包括以下步骤：1)取土茯苓，粉碎后过20～40目筛，取浓度为10～90％(v/v)的乙醇水溶液作为提取剂，以筛过物的质量与所述提取剂的体积之比为1:20(kg:L)的比例，将所述筛过物与所述提取剂混合，于室温条件搅拌60min，过滤，取滤液；2)将步骤1)所得滤液在60℃条件下真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液；3)将步骤2)所得浓缩液的pH调整至5～9，向其中加入抗坏血酸至终浓度为0.1～10mM，于50～90℃环境中静置反应6～16h。作为优选，该方法还包括以下步骤4)：取步骤3)所得产物，利用树脂吸附、重结晶、硅胶柱层析、半制备色谱或高速逆流色谱从中提取新落新妇苷纯品。作为优选，步骤4)具体包括以下操作：取步骤3)所得产物，流过H103大孔树脂床进行吸附，然后用4倍柱床体积的乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；应用半制备色谱收集所述洗脱液中新落新妇苷成分，冷冻干燥。作为优选，步骤4)中所述大孔树脂床的柱床体积为160ml，柱床高度为60cm；所述乙醇溶液的浓度为50％(v/v)。作为优选，步骤1)所述乙醇水溶液的浓度为50％(v/v)。作为优选，步骤3)中浓缩液的pH被调整至8.0。作为优选，步骤3)中抗坏血酸的终浓度为1mM。作为优选，步骤3)中所述静置，是在水浴条件下进行的。作为优选，步骤3)中所述静置的温度为80℃。作为优选，步骤3)中所述静置的时间为10h。在以上技术方案中，所述土茯苓是名称为土茯苓的中药材，其本质为百合科植物光叶菝葜的干燥根茎。所述筛过物是指利用筛网筛分后，粒径较小因而通过筛网的部分。本专利技术提供了一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，该技术方案首先通过实验手段发现，由于土茯苓材料中四种异构体各自有着天然的含量水平，而且其化学性质极为接近，因此仅改进溶剂浸提工艺很难定向提取其中某一种异构体。在这种情况下，本专利技术考察了四种异构体相互的转化关系，意外发现在抗坏血酸存在下，特定的pH及温度条件能启动落新妇苷向新落新妇苷的异构化反应，基于这种有益的发现，本专利技术以异构化方向、转化程度、产物分解程度等为导向，摸索了最佳的反应条件；在该条件下，落新妇苷主要异构化为新落新妇苷，并且分解速度较慢。以此为基础，本专利技术进一步设计了前端的浸提条件以及后续的纯化方法。应用本方明方法，可将土茯苓中落新妇苷大部分转化为新落新妇苷，从而使土茯苓提取物中新落新妇苷含量提高近9倍，极大地提高了从土茯苓中分离纯化新落新妇苷的效率。附图说明图1是本专利技术具体实施方式中，异构化前土茯苓提取液的高效液相液色谱图；图中：1号峰为新落新妇苷；2号峰为落新妇苷。图2是本专利技术具体实施方式中，异构化后土茯苓提取液的高效液相液色谱图；图中：1号峰为新落新妇苷；2号峰为落新妇苷。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。实施例11kg土茯苓粉碎后过40目筛，加入浓度为50％乙醇水溶液20L，在室温条件下搅拌提取60分钟，经常规过滤获得提取液。图1为土茯苓提取液的高效液相色谱。图中峰1为新落新妇苷，峰2为落新妇苷。经高效液相色谱法测定，土茯苓中落新妇苷含量为2.2％，新落新妇苷含量为0.17％，即1kg土茯苓中总共含有落新妇苷22g，新落新妇苷1.7g；可见土茯苓中落新妇苷含量最高,而新落新妇苷含量很低。将土茯苓提取液浓缩除去乙醇后调节pH至8，加入最终浓度为1mM的抗坏血酸，在80度水浴中放置10小时进行异构化反应。图2为异构化反应后土茯苓提取液的高效液相色谱。图中峰1为新落新妇苷，峰2为落新妇苷。可见经异构化反应后，落新妇苷含量显著降低；而新落新妇苷含量显著升高，成为最主要黄酮成分。经高效液相色谱法测定，经异构化后1kg土茯苓中落新妇苷总量降为3.9g，而新落新妇苷总量增至16.7g。土茯苓中新落新妇苷含量提高了8.8倍，取代落新妇苷成为提取液中最主要黄酮成分，为后续从土茯苓中分离纯化新落新妇苷带来便利，并可极大提高新落新妇苷的产量。表1异构化反应前后1kg土茯苓中落新妇苷和新落新妇苷含量比较实验发现pH的降低会使异构化速度减慢，在pH3～4的条件下几乎不发生异构化反应；而pH过高(>9)又会导致黄酮不稳定，落新妇苷及其异构体迅速分解。温度升高可加快落新妇苷异构化速度，但同时也会使其分解速度加快。添加抗坏血酸可有效提高新落新妇苷的转化率，同时提高黄酮稳定性，降低其分解速率。实施例2(1)取1kg土茯苓粉碎过后40目筛，加入20L60％乙醇溶液，在室温下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，其特征在于包括以下步骤：1)取土茯苓，粉碎后过20～40目筛，取浓度为10～90％(v/v)的乙醇水溶液作为提取剂，以筛过物的质量与所述提取剂的体积之比为1:20(kg:L)的比例，将所述筛过物与所述提取剂混合，于室温条件搅拌60min，过滤，取滤液；2)将步骤1)所得滤液在60℃条件下真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液；3)将步骤2)所得浓缩液的pH调整至5～9，向其中加入抗坏血酸至终浓度为0.1～10mM，于50～90℃环境中静置反应6～16h。

【技术特征摘要】
1.一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，其特征在于包括以下步骤：1)取土茯苓，粉碎后过20～40目筛，取浓度为10～90％(v/v)的乙醇水溶液作为提取剂，以筛过物的质量与所述提取剂的体积之比为1:20(kg:L)的比例，将所述筛过物与所述提取剂混合，于室温条件搅拌60min，过滤，取滤液；2)将步骤1)所得滤液在60℃条件下真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液；3)将步骤2)所得浓缩液的pH调整至5～9，向其中加入抗坏血酸至终浓度为0.1～10mM，于50～90℃环境中静置反应6～16h。2.根据权利要求1所述的一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，其特征在于还包括以下步骤4)：取步骤3)所得产物，利用树脂吸附、重结晶、硅胶柱层析、半制备色谱或高速逆流色谱从中提取新落新妇苷纯品。3.根据权利要求2所述的一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，其特征在于步骤4)具体包括以下操作：取步骤3)所得产物，流过H103大孔树脂床进行吸附，然后用4倍柱床体积的乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；应用半制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：张清峰，郑丹，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西,36