超高效液相色谱‑串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测方法，尤其涉及超高效液相色谱‑串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法。本发明专利技术样品分果皮和果肉两部位，经甲醇‑水充分提取处理；采用Accucore XL C18柱(150×4mm，4.6μm)分离，甲醇‑0.15％甲酸水为流动相梯度洗脱，电喷雾离子源正负离子切换多反应监测模式串联质谱下检测，外标法定量。结果表明：九种功能性成分在较宽的质量浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.997。三个添加量水平的回收率在83.57％～112.91％之间，相对标准偏差均小于在1.58％～8.33％之间(n＝6)。测定了4批次常山胡柚样品，同时测定了其中的九种功能性成分。本方法快速、灵敏、准确，适用于常山胡柚中九种功能性成分的定性和定量检测。

【技术实现步骤摘要】
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法
本专利技术涉及一种检测方法，尤其涉及超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法。
技术介绍
常山胡柚是浙江省特色柑橘品种，亦为浙江省特有资源，已有一百多年的栽培历史。常山胡柚因其果实品质优良、风味独特，富含氨基酸、维生素、微量元素及黄酮类等功能性成分。具有止咳化痰、降压降糖等保健功效，深受广大消费者欢迎。常山胡柚的果皮和果肉等不同部位中均含有丰富的黄酮类等功能性成分，并有文献报道正在逐步被重视和开发[1-4]。随着对胡柚保健功能的认识逐步加强，对常山胡柚果皮和果肉两个部位中所含的主要功能性成分的含量也越来越关注。但常山胡柚中不同部位的多种功能性成分含量的超高效液相色谱-串联质谱法同时测定一直未见文献报道。因此，建立常山胡柚中不同部位的九种功能性成分的分析方法并得到功能成分的含量测定结果，有助于公众更好地了解和应用胡柚的保健功能，也有利于企业和主管部门对功能成分的含量进行有效的跟踪控制，该方法对促进常山胡柚的开发十分必要。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术的目的是提供超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法，该方法操作简便、灵敏度高、结果准确，适用于作为常山胡柚中不同部位的九种功能性成分的快速筛查和确证的检测手段。为了实现上述的目的，本专利技术采用了以下的技术方案：超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法，其特九种功能性成分分别为圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、柠檬苦素、橙皮素和诺米林，该方法包括以下的步骤：1)标准溶液的配制精密称取九种功能性成分的标准品10mg，精确至0.1mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀配制成1mg/mL的单标储备液；并根据需要移取适量储备液，用甲醇：水＝1∶1(v/v)溶液，稀释成适宜浓度的标准工作溶液，避光保存于4℃冰箱中；2)试样的制备将采集的胡柚经超纯水清洗擦干后，分别分离出常山胡柚的果皮和果肉两部分，取各部位的样品适量分别进行搅碎、混匀，备用；3)样品的前处理3.1)果皮称取试样0.5g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇：水＝6∶4(v/v)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液，提取两次，合并提取液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；3.2)果肉称取试样2.0g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇：水＝6∶4(v/v)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；4)超高效液相色谱分离条件色谱柱：AccucoreXLC18柱，150×4mm，4.6μm；柱温：35℃；进样量：50μL；流速：0.5mL/min；流动相：A为甲醇，B为含0.15％甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0.0～1.0min,30％A；1.0～14.0min,30％A～65％A；14.0～14.1min，65％A～95％A；14.1～20.0min,95％A；20.0～20.1min，90％A～30％A；20.1～22.0min，30％A；5)串联质谱分析条件离子源：ESI；扫描方式：正负离子切换扫描模式；检测方式：多反应监测；电喷雾电压+3500(-3000)V；毛细管温度：270℃，干燥气流量：10L/min；喷雾气压力：45psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：30L/min；保留时间、质荷比、碰撞能量、S-Lens电压和扫描模式条件进行优化后的质谱条件如下：*为定量离子。本专利技术由于采用了上述的技术方案，九种功能性成分在较宽的质量浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.997。三个添加量水平的回收率在83.57％～112.91％之间，相对标准偏差均小于在1.58％～8.33％之间(n＝6)。测定了4批次常山胡柚样品，同时测定了其中的九种功能性成分。本方法快速、灵敏、准确，适用于常山胡柚中九种功能性成分的定性和定量检测。附图说明图1为果肉中九种成分在不同溶剂比下的提取效率图。图2为果皮中九种成分在不同溶剂比下的提取效率图。图3为不同提取次数对果肉中九种成分的提取效率图。图4为不同提取次数对果皮中九种成分的提取效率图。图5～图13分别为九种功能性成分的多反应监测色谱图。具体实施方式1材料与方法1.1材料与试剂四份常山胡柚样品购自水果市场，经溯源均采集自浙江省衢州市常山县，为常山胡柚的成熟果实，分别试验编号为常山胡柚1、2、3、4。标准品：橙皮苷(CAS:520-26-3，纯度:97.06％)，新橙皮苷(CAS:13241-33-3，纯度：98.76％)，橙皮素(CAS:520-33-2，纯度：98.45％)，柚皮苷(CAS:10236-47-2，纯度：99.33％)，芸香柚皮苷(CAS:14259-46-2，纯度:99.38％)，柚皮素(CAS:480-41-1，纯度：98.09％)，柠檬苦素(CAS:1180-71-8，纯度：99.08％)，诺米林(CAS:1063-77-0，纯度：99.32％)，圣草次苷(CAS:13463-28-0，纯度：98.16％)等九个标准品均购自上海安谱实验科技股份有限公司。甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯，试验用水为超纯水。1.2仪器与设备Ultimate3000超高效液相色谱-TSQVantage三重四极杆串联质谱联用仪(美国ThermoScientific公司)；MultifugeX1R离心机(美国ThermoScientific公司)，高速粉碎机200g(浙江屹立工贸有限公司)。1.3方法1.3.1标准溶液的配制精密称取九种功能性成分的标准品10mg(精确至0.1mg)置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀配制成1mg/mL的单标储备液；并根据需要移取适量储备液，用甲醇-水(1∶1，v/v)稀释成适宜浓度的标准工作溶液，避光保存于4℃冰箱中。1.3.2试样的制备将采集的胡柚经超纯水清洗擦干后，分别分离出常山胡柚的果皮和果肉两部分，取各部位的样品适量分别进行搅碎、混匀，备用。1.3.3样品的前处理1.3.3.1果皮称取试样0.5g(精确至0.01g)，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇-水(6/4,V/V)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液，提取两次，合并提取液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。1.3.3.2果肉称取试样2.0g(精确至0.01g)，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇-水(6/4,V/V)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。1.3.4超高效液相色谱分离条件色谱柱：AccucoreXLC18柱(150×4mm，4.6μm)；柱温：35℃；进样量：50μL；流速：0.5mL/min。流动相：A为甲醇，B为含0.15％甲酸水溶液。梯度洗脱程序：0.0～1.0min,30％A；1.0～14本文档来自技高网...

【技术保护点】
超高效液相色谱‑串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法，其特征在于，九种功能性成分分别为圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、柠檬苦素、橙皮素和诺米林，该方法包括以下的步骤：1)标准溶液的配制精密称取九种功能性成分的标准品10mg，精确至0.1mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀配制成1mg/mL的单标储备液；并根据需要移取适量储备液，用甲醇：水＝1∶1(v/v)溶液，稀释成适宜浓度的标准工作溶液，避光保存于4℃冰箱中；2)试样的制备将采集的胡柚经超纯水清洗擦干后，分别分离出常山胡柚的果皮和果肉两部分，取各部位的样品适量分别进行搅碎、混匀，备用；3)样品的前处理3.1)果皮称取试样0.5g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇：水＝6∶4(v/v)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液，提取两次，合并提取液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；3.2)果肉称取试样2.0g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇：水＝6∶4(v/v)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；4)超高效液相色谱分离条件色谱柱：Accucore XL C18柱，150×4mm，4.6μm；柱温：35℃；进样量：50μL；流速：0.5mL/min；流动相：A为甲醇，B为含0.15％甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0.0～1.0min,30％A；1.0～14.0min,30％A～65％A；14.0～14.1min，65％A～95％A；14.1～20.0min,95％A；20.0～20.1min，90％A～30％A；20.1～22.0min，30％A；5)串联质谱分析条件离子源：ESI；扫描方式：正负离子切换扫描模式；检测方式：多反应监测；电喷雾电压+3500(‑3000)V；毛细管温度：270℃，干燥气流量：10L/min；喷雾气压力：45psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：30L/min；保留时间、质荷比、碰撞能量、S‑Lens电压和扫描模式条件进行优化后的质谱条件如下：...

【技术特征摘要】
1.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法，其特征在于，九种功能性成分分别为圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、柠檬苦素、橙皮素和诺米林，该方法包括以下的步骤：1)标准溶液的配制精密称取九种功能性成分的标准品10mg，精确至0.1mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀配制成1mg/mL的单标储备液；并根据需要移取适量储备液，用甲醇：水＝1∶1(v/v)溶液，稀释成适宜浓度的标准工作溶液，避光保存于4℃冰箱中；2)试样的制备将采集的胡柚经超纯水清洗擦干后，分别分离出常山胡柚的果皮和果肉两部分，取各部位的样品适量分别进行搅碎、混匀，备用；3)样品的前处理3.1)果皮称取试样0.5g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇：水＝6∶4(v/v)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液，提取两次，合并提取液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；3.2)果肉称取试样2.0g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷美康，彭芳，徐思绮，冯敬骞，祝子铜，
申请(专利权)人：衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：浙江,33