miRNA的应用、应用其的产品及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种miRNA的应用、应用其的产品及检测方法，涉及生物技术领域，本发明专利技术中提供的miR‑195、miR‑1204或miR‑101可以作为梅毒感染相关疾病的生物标志物，并研制相应的疾病进展监测、辅助诊断试剂盒，用于梅毒感染的风险预估与检测，对我国梅毒的预防及治疗必定有很好的帮助。另外，本发明专利技术还提供了上述miR‑195、miR‑1204或miR‑101的检测方法，借助于实时定量PCR的技术来统计微小RNA变化，具有分析样本需要量小、自动化程度高、避免污染等优点。

【技术实现步骤摘要】
miRNA的应用、应用其的产品及检测方法
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种miRNA的应用、应用其的产品及检测方法。
技术介绍
梅毒在我国高发，并且正在增加。潜伏梅毒比例逐渐上升，临床中潜伏梅毒甲苯胺红不加热血清试验(tolulizedredunheatedserumtest，TRUST)滴度较低，甚至有部分患者TRUST阴性。同时，据统计梅毒治疗后30％左右的患者出现血清固定的情况，流行病学结果显示潜伏梅毒治疗后发生血清固定的概率最高。综上所述，TRUST作为判断梅毒活动性的诊断准确性不够。目前正在使用的诊断技术：梅毒的诊断目前主要有暗视野显微镜观察和血清学检测。1)暗视野显微镜：从一期梅毒硬下疳渗出液中，可以用暗视野显微镜观察到梅毒螺旋体。本方法是最直接的诊断方法。但是本方法有很大的局限性，机体梅毒螺旋体感染后，在组织和血液中很难再用本方法找到螺旋体。2)血清学检测：目前主要使用的检测方法，分为梅毒螺旋体特异性抗体检测和非梅毒螺旋体抗体特异性检测。当机体感染梅毒后，可以检测到梅毒螺旋体特异性抗体阳性，但是多数感染了梅毒螺旋体的患者，梅毒螺旋体特异性抗体终身阳性，即使治疗后也不会降低或转阴。非梅毒螺旋体抗体检测目前主要被用于疾病活动性检测，一般认为正规青霉素治疗后，大部分患者能达到临床治愈和血清治愈，治疗后3个月降低4倍，6个月降低8倍，但有部分患者的非梅毒螺旋体抗体降到某个滴度(一般≤1∶8)时不再下降，维持在低滴度3个月以上，甚至终生阳性，称为血清固定。MicroRNAs(即miRNAs)是今年来分子生物学研究领域的一份热点，它的成熟状态是一类长约19-23个核苷酸的单链RNA分子，进化上具有高度的保守性，可在转录后水平上对基因表达进行调节，并参与哺乳动物几乎所有的病理和生理活动，如个体发育、组织分化、细胞凋亡和免疫调节等，与许多疾病的发生、发展存在着紧密的联系。已有许多研究显示，在一些慢性感染疾病中，病原体会影响宿主的miRNAs表达。miRNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，并且存在显著的疾病特异性。综上所述，miRNAs可作为梅毒感染的潜在分子标志物。但是，目前没有关于外周血单个核细胞(PBMCs)中miRNAs用于梅毒感染的诊断标志物及预后的辅助判断等方面的报道。因此，开发能够作为诊断梅毒感染的标志物的miRNAs尤为重要。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供miR-195、miR-1204或miR-101任意一种或多种物质在制备用于诊断梅毒的产品中的应用，以缓解现有技术中存在的对梅毒感染相关的特定小RNA研究尚有不足的技术问题。本专利技术的第二个目的在于提供一种用于诊断梅毒的试剂。本专利技术的第三个目的在于提供一种用于诊断梅毒的试剂盒。本专利技术的第四个目的在于提供miR-195、miR-1204或miR-101任意一种或多种物质的检测方法，以缓解现有技术中对上述三种小RNA的检测特异性不够强的技术问题。本专利技术提供了如下(a)-(c)任意一种或多种物质在制备用于诊断梅毒的产品中的应用：(a)miR-195；(b)miR-1204；(c)miR-101。进一步地，所述miR-195的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述miR-1204的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，所述miR-101的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。进一步地，所述用于诊断梅毒的产品为试剂或试剂盒。本专利技术还提供了一种用于诊断梅毒感染的试剂，所述试剂包括如下(A)-(C)任意一种或多种物质：(A)用于检测miR-195的引物；(B)用于检测miR-1204的引物；(C)用于检测miR-101的引物。本专利技术还提供了一种用于诊断梅毒感染的试剂盒，所述试剂盒包括如下(A)-(C)任意一种或多种物质或权利要求4所述的试剂：(A)用于检测miR-195的引物；(B)用于检测miR-1204的引物；(C)用于检测miR-101的引物。进一步地，所述用于检测miR-195的引物具有如SEQIDNo.4所示序列的上游引物和如SEQIDNo.5所示序列的下游引物；所述用于检测miR-1204的引物具有如SEQIDNo.6所示序列的上游引物和如SEQIDNo.7所示序列的下游引物；所述用于检测miR-101的引物具有如SEQIDNo.8所示序列的上游引物和如SEQIDNo.9所示序列的下游引物。进一步地，所述试剂盒还包括miR-195标准品、miR-1204标准品、miR-101标准品和试剂。进一步地，所述试剂为逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水和Taq酶。另外，本专利技术还提供了一种如下(a)-(c)任意一种或多种物质的检测方法，所检测述方法包括：提取样本RNA进行荧光定量qPCR反应，得到所述(a)-(c)任意一种或多种物质的相对表达量；所述(a)-(c)为：(a)miR-195；(b)miR-1204；(c)miR-101。进一步地，所述样本RNA为外周血单个核细胞的RNA。本专利技术提供的miR-195、miR-1204或miR-101通过实验筛选发现在患有梅毒感染的患者的外周血单个核细胞中特异性表达，且表达显著上升。因此本专利技术中提供的miR-195、miR-1204或miR-101可以作为梅毒感染相关疾病的生物标志物，并研制相应的疾病进展监测、辅助诊断试剂盒，用于梅毒感染的风险预估与检测，对我国梅毒的预防及治疗必定有很好的帮助。另外，研究这些与梅毒相关的miRNAs表达对于梅毒免疫机制的研究也提供了理论基础，找到血清固定发生的潜在机制，从而开发具有潜在治疗价值的新型小分子药物。另外，本专利技术还提供了上述miR-195、miR-1204或miR-101的检测方法，借助于实时定量PCR的技术来统计微小RNA变化，具有分析样本需要量小、自动化程度高、避免污染等优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例4提供的利用荧光定量PCR方法检测miR-195在各组待测血液样本中的含量的结果图；图2为本专利技术实施例4提供的利用荧光定量PCR方法检测miR-1204在各组待测血液样本中的含量的结果图；图3为本专利技术实施例4提供的利用荧光定量PCR方法检测miR-101在各组待测血液样本中的含量的结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供了如下(a)-(c)任意一种或多种物质在制备用于诊断梅毒的产品中的应用：(a)miR-195；(b)miR-1204；(c)miR-101。本专利技术提供的miR-195、miR-1204或miR-101通过实验筛选发现在患有梅毒感染的患者的外周血单个核细胞中特异性表达，且表达显著上升。因此本专利技术中提供的本文档来自技高网...

【技术保护点】
如下(a)‑(c)任意一种或多种物质在制备用于诊断梅毒的产品中的应用：(a)miR‑195；(b)miR‑1204；(c)miR‑101。

【技术特征摘要】
1.如下(a)-(c)任意一种或多种物质在制备用于诊断梅毒的产品中的应用：(a)miR-195；(b)miR-1204；(c)miR-101。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-195的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述miR-1204的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，所述miR-101的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于诊断梅毒的产品为试剂或试剂盒。4.一种用于诊断梅毒感染的试剂，其特征在于，所述试剂包括如下(A)-(C)任意一种或多种物质：(A)用于检测miR-195的引物；(B)用于检测miR-1204的引物；(C)用于检测miR-101的引物。5.一种用于诊断梅毒感染的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下(A)-(C)任意一种或多种物质或权利要求4所述的试剂：(A)用于检测miR-195的引物；(B)用于检测miR-1204的引物；(C)用于检测miR-101的引物。6.根据权利要求4所述的试剂或权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述用于检测m...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑和平，杨斌，黄涛，张君，陈文韬，
申请(专利权)人：南方医科大学皮肤病医院广东省皮肤病医院，广东省皮肤性病防治中心，中国麻风防治研究中心，
类型：发明
国别省市：广东,44