一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测β‑兴奋剂类药物的试纸条及其应用，它涉及生物技术领域。它的制备方法为：制备喷涂有β‑兴奋剂类药物单克隆抗体‑胶体金标记物的结合物释放垫，制备具有包被有β‑兴奋剂类药物半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；将上述步骤制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。本发明专利技术操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制，实现对大批量样品进行快速检测和现场监控。

Test strip for detection of beta stimulant drugs and its application

The invention discloses a test strip for detecting beta stimulant drugs and its application, which relates to the field of biotechnology. The preparation method for its preparation: spraying beta stimulant drugs monoclonal antibody colloidal gold labeled conjugate pad, prepared with the reaction film packet detection line is beta stimulant drugs hapten carrier protein conjugates and coated with the control line of Goat anti mouse antibody the above steps; the prepared conjugate pad, reaction film and sample absorption pad and absorbent pad and the bottom plate are assembled into strips. The invention has the advantages of simple operation, high sensitivity, fast detection speed, low cost, and is not limited by the detection equipment, and realizes the rapid detection and on-site monitoring for large quantities of samples.

【技术实现步骤摘要】
一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条及其应用
本专利技术涉及的是生物
，具体涉及一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条及其应用。
技术介绍
β-兴奋剂(β-agonist)全称β-肾上腺素受体激动剂(β-adrenoceptoragonist)，又叫β-激动剂，是一类化学结构和生理功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙胺类药物，常见的β-兴奋剂有克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、马布特罗、非诺特罗、特布他林等。β-兴奋剂能选择性地与细胞膜上的β-肾上腺素受体结合，起到调节交感神经兴奋、松弛气管平滑肌的功能，因此在临床上常用于人和动物哮喘类病症的治疗。20世纪80年代有研究表明，β-兴奋剂影响营养物质在动物体内的流向和重新分配，使体内的脂肪分解代谢增强、蛋白质合成增加，显著提高瘦肉率。β-兴奋剂残留会聚集在动物可食用组织中，由于这类化合物具有口服活性，如果违法超量使用将会对人与动物的肝、肾等内脏器官产生毒副作用，因此世界各国已将这类物质列为禁止用于食品动物的化学物质。目前国内外关于β-兴奋剂类药物残留的主要检测方法是色谱法，如气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气质联用法(GC-MS)、液质联用法(LC-MS)等，这类方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品前处理复杂、繁琐费时、检测成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。
技术实现思路
针对现有技术上存在的不足，本专利技术目的是在于提供一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条及其应用，操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制，实现对大批量样品进行快速检测和现场监控，实用可靠，易于推广使用。为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，底板上依次粘贴有样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，所述结合物释放垫的1/3-1/2被覆盖于样品吸收垫下，结合物释放垫上喷涂有β-兴奋剂类药物单克隆抗体-胶体金标记物，所述反应膜上具有包被有β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线。作为优选，所述的样品吸收垫为吸滤纸或滤油纸；结合物释放垫为玻璃棉或聚酯材料；反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸；底板为PVC底板或其他硬质不吸水的材料板。作为优选，所述的β-兴奋剂类药物单克隆抗体是以β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述的β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物是由β-兴奋剂类药物半抗原与载体蛋白偶联得到；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白；所述β-兴奋剂类药物半抗原是由4-羟基苯乙酰溴与叔丁胺反应后，经硼氢化钠还原，再与氯乙酸钠反应得到；所述的羊抗鼠抗抗体体是以鼠源抗体为免疫原对山羊进行免疫制备获得。一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条的制备方法，其步骤为：(1)制备喷涂有β-兴奋剂类药物单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；(2)制备具有包被有β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；(3)将步骤(1)和(2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。作为优选，试纸条的具体制备步骤包括：①将4-羟基苯乙酰溴与叔丁胺反应后，经硼氢化钠还原，再与氯乙酸钠反应，制备β-兴奋剂类药物半抗原；②将β-兴奋剂类药物半抗原与载体蛋白偶联，制备β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物；③用β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌β-兴奋剂类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株；④提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；⑤分别将β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠抗抗体包被于反应膜的检测线和质控线上；⑥用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；⑦将制备的β-兴奋剂类药物单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到β-兴奋剂类药物单克隆抗体-胶体金标记物；⑧将β-兴奋剂类药物单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；⑨将样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白(质量分数)、pH7.2的0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；⑩在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4～30℃条件下可保存12个月。一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条的应用，其用于检测样品中β-兴奋剂类药物的方法包括如下步骤：(1)对样品进行前处理；(2)用试纸条进行检测：样品经处理后滴入试纸条卡孔内，当β-兴奋剂类药物在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线和质控线处各出现一条红色条带；如果β-兴奋剂类药物在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与β-兴奋剂类药物全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带；(3)分析检测结果：①阴性：当质控线显示出红色条带，检测线同时也显示出红色条带，样品中β-兴奋剂类药物浓度低于检测限，判为阴性；②阳性：当质控线显示出红色条带，而检测线不显色，样品中β-兴奋剂类药物浓度等于或高于检测限，判为阳性；③无效：当质控线不显示出红色条带，则无论检测线显示出红色条带与否，该试纸条均判为无效。作为优选，所述β-兴奋剂类药物为盐酸氯丙那林、班布特罗、克仑特罗、西布特罗、溴布特罗、马布特罗、溴氯布特罗、西马特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、克伦丙罗、莱克多巴胺、特布特林中的一种或两种及两种以上的组合。本专利技术的有益效果：本试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、不受检测设备限制、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点，且可以同时检测盐酸氯丙那林、班布特罗、克仑特罗、西布特罗、溴布特罗、马布特罗、溴氯布特罗、西马特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、克伦丙罗、莱克多巴胺、特布特林13种β-兴奋剂类药物，检测方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用，实现对大批量样品进行快速检测和现场监控。附图说明下面结合附图和具体实施方式来详细说明本专利技术；图1为本专利技术试纸条剖面结构示意图；图2为本专利技术试纸条检测结果判定图；图3为本专利技术β-兴奋剂类药物半抗原合成图。具体实施方式为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。参照图1-3，本具体实施方式采用以下技术方案：一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条，包括样品吸收垫1、结合物释放垫2、反应膜3、吸水垫4和底板5，底板5上依次粘贴有样品吸收垫1、结合物释放垫2、反应膜3、吸水垫4，所述结合物释放垫2的1/3-1/2被覆盖于样品吸收垫1下，结合物释放垫2上喷涂有β-兴奋剂类药物单克隆抗体-胶体金标记物，所述反应膜3上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测β‑兴奋剂类药物的试纸条，其特征在于，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(5)，底板(5)上依次粘贴有样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)，所述结合物释放垫(2)的1/3‑1/2被覆盖于样品吸收垫(1)下，结合物释放垫(2)上喷涂有β‑兴奋剂类药物单克隆抗体‑胶体金标记物，所述反应膜(3)上具有包被有β‑兴奋剂类药物半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线(T)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(C)。

【技术特征摘要】
1.一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条，其特征在于，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(5)，底板(5)上依次粘贴有样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)，所述结合物释放垫(2)的1/3-1/2被覆盖于样品吸收垫(1)下，结合物释放垫(2)上喷涂有β-兴奋剂类药物单克隆抗体-胶体金标记物，所述反应膜(3)上具有包被有β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(T)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(C)。2.根据权利要求1所述的一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条，其特征在于，所述的样品吸收垫(1)为吸滤纸或滤油纸；结合物释放垫(2)为玻璃棉或聚酯材料；反应膜(3)为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；吸水垫(4)为吸水纸；底板(5)为PVC底板或其他硬质不吸水的材料板。3.根据权利要求1所述的一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条，其特征在于，所述的β-兴奋剂类药物单克隆抗体是以β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述的β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物是由β-兴奋剂类药物半抗原与载体蛋白偶联得到；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白；所述β-兴奋剂类药物半抗原是由4-羟基苯乙酰溴与叔丁胺反应后，经硼氢化钠还原，再与氯乙酸钠反应得到；所述的羊抗鼠抗抗体体是以鼠源抗体为免疫原对山羊进行免疫制备获得。4.一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条的制备方法，其特征在于，其步骤为：(1)制备喷涂有β-兴奋剂类药物单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；(2)制备具有包被有β-兴奋剂类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；(3)将步骤(1)和(2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。5.根据权利要求4所述的一种检测β-兴奋剂类药物的试纸条的制备方法，其特征在于，所述试纸条的具体制备步骤包括：①将4-羟基苯乙酰溴与叔丁胺反应后，经硼氢化钠还原，再与氯乙酸钠反应，制备β-兴奋剂类药物半抗原；②将β-兴奋剂类药物半抗原与载...

【专利技术属性】
技术研发人员：张成图，孟茹，陈永忠，吴英，伊平昌，
申请(专利权)人：西宁市畜牧兽医站，
类型：发明
国别省市：青海,63