The invention provides a recombinant TSP1 protein, amino acid sequence of the recombinant TSP1 protein sequence table SEQ ID No.2. The invention also provides a method to realize the soluble expression, soluble expression of recombinant TSP1 protein: most of recombinant proteins are soluble protein, total soluble protein of Escherichia coli accounted for 90%; and then use the Ni NTA His Bind (Clontech) purification of recombinant Echinococcus granulosus TSP1 pre column. The purified protein TSP1. In the use of elution buffer (500mM/L imidazole, 20mM/L Tris 500mM/L, NaCI, PH8.0) can get a high purity of Echinococcus granulosus TSP1. The purified protein is used as a coated antigen, and a ELISA kit for detecting Echinococcus granulosus is prepared.
【技术实现步骤摘要】
细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法
本专利技术属于基因工程
,具体涉及细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法。
技术介绍
跨膜蛋白1(TSP1)是细粒棘球绦虫成虫cDNA文库中的一个抗原基因。TSP1是一种重要的细粒棘球绦虫抗原,可能参与了细粒棘球绦虫信号传导途径,对于细胞的生长、分化具有重要的生理意义。TSP1同膜联蛋白家族(Annexinfamily)成员可能是同源基因,属于Annexin家族。研究该抗原的生理功能,不仅可以了解其对于细粒棘球蚴的寄生、生长、发育等生命活动中的重要意义,还可以为治疗和预防包虫病提供新的药物靶点和候选疫苗。基于以上研究背景,本专利技术构建了编码细粒棘球绦虫TSP1基因的原核表达质粒,转化入大肠杆菌表达系统,诱导其可溶性表达,并进行蛋白纯化,得到了该蛋白,为其今后的免疫原性、生化特性分析以及功能研究奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术通过基因工程技术,提供了一种细粒棘球绦虫TSP1的原核表达载体pET30a-TSP1,利用该载体转化大肠杆菌(BL21-DE3)实现了TSP1的高水平可溶性表达。并提供了一种亲和层析纯化方法,纯化出了大量的高纯度的重组TSP1,用于TSP1免疫原性、生化特性分析以及功能研究,抗包虫疫苗、抗包虫药物的研发及囊型包虫病患者的免疫诊断。本专利技术提供细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白,所述细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQIDNo.2。作为优选,所述细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白编码的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.1中第27位-836位碱基。 ...
【技术保护点】
细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白,其特征在于:所述细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。
【技术特征摘要】
1.细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白,其特征在于:所述细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQIDNo.2。2.根据权利要求1所述的细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白,其特征在于:所述细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白编码的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.1中第27位-836位碱基。3.权利要求1或2所述的细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白的可溶性表达,其特征在于:步骤如下:(1)目的基因TSP1的扩增;(2)构建TSP1表达质粒:将步骤(1)制备的目的基因TSP1酶切并纯化后,构建入pET-30a相应的多克隆酶切位点,构建质粒pET30a-TSP1;(3)将步骤(2)制备的质粒pET30a-TSP1转化入E.ColiBL21(DE3)感受态细胞中,将E.ColiBL21(DE3)-pET30a-TSP1进行扩大培养,然后加入0.2mmol/L的IPTG于25℃,诱导振荡培养8小时;离心重悬后超声,收集上清液。4.根据权利要求3所述的可溶性表达,其特征在于:步骤(3)中所述扩大培养是将E.ColiBL21(DE3)-pET30a-TSP1先接种至LB固体培养基上,37℃孵育过夜;然后挑取培养基上单克隆至LB液体培养基中,于37℃,180r/min振荡培养3小时,使OD值至0.5;最后取菌液接种至LB液体培养基中,于37℃,180r/min振荡培养,使OD值至0.5。5.权利要求1或2所述的细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白的纯化方法,其特征在于:是使用Ni-NTAHis-Bind(Clontech)纯化系统纯化重组蛋白,然后使用洗脱缓冲液进行洗脱;所述洗脱缓冲液的配方为:500mM/L咪唑,20mM/LTris,500mM/LNaCl,pH8.0。6.根据权利要求5所述的纯化方法,其特征在于:步骤如下:(1)加入超纯水于Ni-NTAHis-Bind预装柱中,使其缓慢的流过柱内填充的介质;(2)加入结合缓冲液;所述结合缓冲液的配方为:20mM/LTri...
【专利技术属性】
技术研发人员:景涛,辛奇,孙旭东,袁苗苗,李焕平,高海军,宋晓霞,鲁俊,那斌,吕薇,
申请(专利权)人:兰州大学,
类型:发明
国别省市:甘肃,62
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