一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法，属于山楂中有效成分提取领域。旨在提供一种毒性小、耗时短的提取山楂中金丝桃苷的方法。该方法采用ASE萃取法对山楂粉末进行萃取，先用正己烷对山楂粉末进行除杂，再用乙醇萃取除杂后的样品，收集乙醇萃取液，并用乙醇将乙醇萃取液定容至50ml，离心，取上清液；所述的除杂步骤的参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s；所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。本发明专利技术可用于替代药典中所记载的方法对山楂中的金丝桃苷进行提取，并可作为后期对山楂中金丝桃苷的含量进行测定时所需的供试品。

Method for extracting hypericin from Hawthorn by ASE

The invention discloses a method for extracting hypericin from Hawthorn by ASE, which belongs to the field of extraction of effective components in hawthorn. The invention aims to provide a method with low toxicity and short time to extract hypericin from hawthorn. The method adopts ASE extraction method to extract the hawthorn powder, hawthorn powder first with hexane to remove the impurities, then the ethanol extraction from the purified samples collected, ethanol extract, ethanol extract and the volume to 50ml with ethanol, centrifugation, supernatant; the removal step parameters: the pressure of 1500psi, temperature 80 C, time is 5min, 2 times, irrigation volume is 100% and the blowing time is 100s; the parameter extraction step is: the pressure of 1500psi, temperature 110 C, time is 5min, 1 times, irrigation volume is 100%, purge time is 100s. The invention can be used to replace the method recorded in the Pharmacopoeia and extract the hypericin from hawthorn, and can be used as a test sample for the determination of the content of the hypericin in the Hawthorn at the later stage.

【技术实现步骤摘要】
一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法
本专利技术属于山楂中有效成分的提取领域，尤其是一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法。
技术介绍
山楂叶为蔷薇科植物山里红(CrataeguspinnatifidaBge.varmajorN.E.Br.)，具有活血化瘀，理气通脉，用于气滞血瘀，胸闷憋气，心悸见忘，眩晕耳鸣。研究结果表明山楂中金丝桃苷是已经被证实治疗心血管疾病，并有解痉镇痛，保护胃黏膜、肝组织及调节血脂，增强免疫力，抗抑郁及对心脑缺血的保护作用。2015年版药典记载的提取及测定山楂中金丝桃苷的方法为：本品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色(约4小时)，提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。在15000r/min下离心3min，取上清液。本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用三氯甲烷除杂后，采用甲醇索提至无色，杂质较少。而三氯甲烷毒性较大；另外，按照药典方法进行，耗时至少需4小时。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种毒性小、耗时短的ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法。为了实现上述技术效果，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取法对山楂粉末进行萃取，先用正己烷对山楂粉末进行除杂，再用乙醇萃取除杂后的样品，并收集乙醇萃取液；步骤2：用乙醇将乙醇萃取液定容至50ml，离心，取上清液；所述的除杂步骤的参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s；所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将山楂样品粉碎，过三号筛，取1g与1g石英砂混合均匀；步骤S2：在放有滤膜的10mlASE萃取池中加1g硅藻土，再将步骤1所得的混合物倒入，并加石英砂至其低于池口2mm；步骤S3：用25ml正己烷萃取除杂，再用25ml乙醇对其进行萃取提纯，收集乙醇萃取液。优选地，所述的步骤2包括下述子步骤：步骤SS1：将收集所得的乙醇萃取液用乙醇定容至50ml；步骤SS2：在15000r/min下离心3min，取上清液。本专利技术与传统方法相比，具有以下优点：1.本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用三氯甲烷除杂后，采用甲醇索提至无色，杂质较少。而三氯甲烷毒性较大，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，甲醇提取后金丝桃苷含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。2.在除杂过程中，药典方法加入三氯甲烷索提取液无色，时间相对较长，且三氯甲烷毒性较大，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，2次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数2次。提取过程中采用110℃，提取5min，提取1次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。附图说明图1为药典方法提取山楂叶中金丝桃苷的色谱图；图2为ASE法萃取山楂叶中金丝桃苷的色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)。1.2试剂：试剂与溶液(除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯)水：符合GB/T6682规定的一级水；正己烷(C6H14)：分析纯；乙醇(C2H6O)：分析纯；乙腈(C2H3N)：色谱纯(液相色谱用)；磷酸(H3PO4)：分析纯；石英砂：粒径约2mm。2、方法2.12015年版药典方法本品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色(约4小时)，提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，在15000r/min下离心3min，取上清液。2.2快速溶剂萃取法(ASE)样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约1.0g，精密称定，与1g石英砂混合均匀，待用，在预先放好过滤膜的10ml萃取池中先加入1g硅藻土，后加入混合均匀的样品，再加入适量石英砂，轻轻振摇使之与池口在同一水平线下2mm处，拧紧萃取池上盖。萃取(包括除杂和提取2步，见ASE条件方法)结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用烯乙醇稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液。2.3ASE萃取条件所述的除杂步骤的参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s；所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。3.结果取相同批号的样品1.0g，共4份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，进行平行试验，测得样品中金丝桃苷的含量见表1，RSD为3.9％.试验表明ASE提取方法重复性良好。表1重现性试验结果表2可以看出采用ASE仪器1、ASE仪器2和药典方法提取后的结果以及ASE仪器之间的重复性均良好。表2样品采用药典方法与ASE方法测定含量的结果对比4.讨论ASE提取溶剂的选择：本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用三氯甲烷除杂后，采用甲醇索提至无色，杂质较少。而三氯甲烷毒性较大，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，甲醇提取后金丝桃苷含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。ASE提取条件的优化：在除杂过程中，药典方法加入三氯甲烷索提取液无色，时间相对较长，且三氯甲烷毒性较大，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，2次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数2次。提取过程中采用110℃。提取5min，提取1次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。以上所述的仅为本专利技术的较佳实施例，凡在本专利技术的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取法对山楂粉末进行萃取，先用正己烷对山楂粉末进行除杂，再用乙醇萃取除杂后的样品，并收集乙醇萃取液；步骤2：用乙醇将乙醇萃取液定容至50ml，离心，取上清液；所述的除杂步骤的参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s；所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

【技术特征摘要】
1.一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取法对山楂粉末进行萃取，先用正己烷对山楂粉末进行除杂，再用乙醇萃取除杂后的样品，并收集乙醇萃取液；步骤2：用乙醇将乙醇萃取液定容至50ml，离心，取上清液；所述的除杂步骤的参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s；所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。2.根据权利要求1所述的一种ASE法提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖强，王丽丽，欧妮，韦日伟，陈学松，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45