The invention belongs to the technical field of biological products, in particular to a patent application of a preparation method of an antibacterial peptide. The method of using Bacillus subtilis YS439 strain preparation, including strain rejuvenation, preparation of seed liquid and preparation of one gradeseed pot culture medium, fermentation, fermentation liquid pretreatment, extraction and purification steps of antibacterial peptide. Through the optimization of medium and fermentation conditions for specific fermentation strains, reached a high density and high yield the expected results, the average antibacterial titer in 13~15 fermentation liquid is about U/mL million, up to 159 thousand U/mL, the comprehensive recovery rate of more than 80% products. The production process is simple and easy to implement, good to shorten the production cycle of antimicrobial peptides, and low production cost, high yield, high purity of antibacterial peptide has the advantages, the invention can lay a foundation for the popularization and application of antimicrobial peptides.
【技术实现步骤摘要】
一种抗菌肽的制备方法
本专利技术属于生物制品
,具体涉及一种抗菌肽制备方法的专利申请。
技术介绍
抗菌肽是一类生物体内经诱导产生的具有生物活性的小分子多肽,具有广谱杀菌作用。天然的抗菌肽,已发现有A、B及D等多种。这类活性多肽多具有较好的耐酸碱性、热稳定性、以及广谱抗菌等特性。抗菌肽对细菌有很强的杀伤作用,尤其是对某些耐药性病原菌具有很强的杀灭作用。与传统抗生素相比,抗菌肽最大的特点在于其杀菌机理是其疏水性端螺旋直接插入细菌菌胞膜内而形成孔道,将细菌内容物泄出胞外而造成细菌死亡,具有作用迅速、对耐药菌有效且细菌不易产生耐药性的优良特点。已有研究还发现,某些抗菌肽对部分病毒、真菌、原虫和癌细胞等具有一定的杀灭作用,甚至能提高人体免疫力,加速伤口愈合。由于抗菌肽较为广泛的生物学活性,在医学上良好的应用前景,因而其应用价值巨大。现有应用中,抗菌肽作为饲料添加剂代替抗生素喂养小鸡、小猪及对虾预防禽畜及水产疾病已正在推广应用。现有技术中,抗菌肽的生产是通过注射大肠杆菌于柞蚕蛹,诱导产生抗菌肽的,然后再从柞蚕蛹提取天然抗菌肽,这种生产方式具有较为明显的得率低、成本高、大规模工业化生产困难的缺陷,一定程度限制了抗菌肽的生产和推广应用。因而极有必要开发新的抗菌肽生产制备工艺。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种抗菌肽的制备方法,从而为抗菌肽的生产和推广应用奠定良好基础。本专利技术所采取的技术方案详述如下。一种抗菌肽的制备方法,该方法利用枯草芽孢杆菌菌株发酵制备而成,所述枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)YS439,保藏于中国工业微生 ...
【技术保护点】
一种抗菌肽的制备方法,其特征在于,该方法利用枯草芽孢杆菌菌株发酵制备而成,所述枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌YS439,保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为 CICC 20445,制备方法具体包括如下步骤:(1)菌株复壮,具体为:如果菌株是以冻干粉形式保存,首先应将冻干粉形式菌株接种在斜面培养基上,26℃~35℃条件下培养36~72h进行复壮生长;所述斜面培养基,以质量百分比计,配方为:蛋白胨 0.4~0.8%,牛肉膏 0.2~0.3%,葡萄糖 1~4%,磷酸二氢钾0.2~0.5%,琼脂1.5~1.8%,pH=自然;(2)制备种子液,具体为:将步骤(1)中复壮后菌株接种于灭菌后摇瓶培养基中,26℃~35℃、150‑230 转/min摇瓶培养16~25h左右;所述摇瓶培养基,以质量百分比计,配方为:蛋白胨 0.4~0.8%,牛肉膏 0.2~0.3%,葡萄糖 1~4%,磷酸二氢钾0.2~0.5%,硫酸铵0.2~0.7%,硫酸镁0.1~0.3%,pH=自然;(3)制备一级种子罐培养液,具体为:将一级种子罐培养基灭菌后,接种步骤(2)中所制备的种子液,26℃~35℃、180‑220 ...
【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽的制备方法,其特征在于,该方法利用枯草芽孢杆菌菌株发酵制备而成,所述枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌YS439,保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CICC20445,制备方法具体包括如下步骤:(1)菌株复壮,具体为:如果菌株是以冻干粉形式保存,首先应将冻干粉形式菌株接种在斜面培养基上,26℃~35℃条件下培养36~72h进行复壮生长;所述斜面培养基,以质量百分比计,配方为:蛋白胨0.4~0.8%,牛肉膏0.2~0.3%,葡萄糖1~4%,磷酸二氢钾0.2~0.5%,琼脂1.5~1.8%,pH=自然;(2)制备种子液,具体为:将步骤(1)中复壮后菌株接种于灭菌后摇瓶培养基中,26℃~35℃、150-230转/min摇瓶培养16~25h左右;所述摇瓶培养基,以质量百分比计,配方为:蛋白胨0.4~0.8%,牛肉膏0.2~0.3%,葡萄糖1~4%,磷酸二氢钾0.2~0.5%,硫酸铵0.2~0.7%,硫酸镁0.1~0.3%,pH=自然;(3)制备一级种子罐培养液,具体为:将一级种子罐培养基灭菌后,接种步骤(2)中所制备的种子液,26℃~35℃、180-220转/min、通风量1:0.5~0.7条件下,培养8~15h;所述一级种子罐培养基,以质量百分比计,配方为:玉米面3~6%,豆粕4~8%,磷酸二氢钾0.2~0.5%,葡萄糖1~4%,硫酸铵0.2~0.7%,硫酸镁0.1~0.3%,pH=自然;(...
【专利技术属性】
技术研发人员:孙利鹏,管宁,焦国宝,曹超峰,席华强,陈晓宇,肖东坡,曹忠洋,何景阳,马爱丽,
申请(专利权)人:河南仰韶生化工程有限公司,
类型:发明
国别省市:河南,41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。