The invention discloses a fumonisin detection method comprises the following steps: 1, FB1 hapten respectively with KLH and OVA coupling, FB1 KLH and FB1 OVA; step two, using the FB1 KLH as immunogen, using conventional method to prepare monoclonal antibodies against FB1. The detection object targeted, high accuracy and sensitivity than the commercially available ELISA kit, and the invention adopts anti fumonisin B1 monoclonal antibody, without cross reaction with other mycotoxins in grain, have greater specificity than commercially available with polyclonal antibody based ELISA kit. To reduce the false positive rate.
【技术实现步骤摘要】
一种伏马毒素检测方法
本专利技术涉及一种检测方法,具体是一种伏马毒素检测方法。
技术介绍
伏马毒素B1(FumonisinB1,FB1)是串珠镰刀菌在一定湿度和温度条件下繁殖所产生的次级代谢产物,在全世界范围内分布广泛。1988年,Gelderblom等首次从串珠镰刀菌培养液中分离出伏马毒素。伏马毒素能够对玉米及其制品造成污染,而且在以谷物为原料的一些产品中如面条、啤酒、调味品,甚至在芦笋中也检测到了伏马毒素。据报道,伏马毒素与马脑白质软化症,猪的肺水肿症候群,大鼠肝癌等疾病有关。除上述疾病外,在南非的特兰斯凯地区和中国林县地区研究发现,食用伏马毒素污染的玉米制品与人类食道癌相关。串珠镰刀菌产生的毒素已经被国际癌症研究会(InternationalAgencyforResearchonCancer,IARC)划分到2B类--可能的人类致癌物。加入WTO之后,农产品及相关食品的国际贸易量日益增加,随之对进出口产品的生物安全性的要求也越来越高,为了保证这类产品的顺利上市和食用者的健康,出入境检疫、海关、生产企业、监督部门等部门迫切需要一种特异、快速、简便的伏马毒素检测方法。胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,应用抗原抗体反应的一种免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、单宁酸/柠檬酸钠和柠檬酸三钠等作用下,聚合成特定大小的金颗粒,由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,故称为胶体金。胶体金标记,实质上是蛋白质高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理是胶体金颗粒表面的负电荷,与蛋白质分子的正电荷基团因静电作用而形成牢固结合。这种球型 ...
【技术保护点】
一种伏马毒素检测方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一,将FB1半抗原分别与KLH和OVA偶联,得到FB1‑KLH和FB1‑OVA;步骤二,用所述FB1‑KLH作为免疫原,采用常规方法制备抗FB1的单克隆抗体;步骤三,将所述单克隆抗体加入EP管中,使用洗涤液洗涤,将待侧样品进行萃取,得到萃取液,该萃取液稀释后加入所述管中,震荡;步骤四,去除上清液,使用洗涤液洗涤,将所述OVA‑FB1加入所述管中,震荡;步骤五,去除上清液,使用洗涤液洗涤,将抗FB1单克隆抗体加入所述管中,震荡;步骤六,去除上清液,使用洗涤液洗涤,加入发光底物,震荡,测定发光值;步骤七,根据已知不同浓度FB1与抗FB1单克隆抗体加入后得到的发光值,制作标准曲线,再根据待测样品的发光值,通过标准曲线得到对应的FB1浓度。
【技术特征摘要】
1.一种伏马毒素检测方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一,将FB1半抗原分别与KLH和OVA偶联,得到FB1-KLH和FB1-OVA;步骤二,用所述FB1-KLH作为免疫原,采用常规方法制备抗FB1的单克隆抗体;步骤三,将所述单克隆抗体加入EP管中,使用洗涤液洗涤,将待侧样品进行萃取,得到萃取液,该萃取液稀释后加入所述管中,震荡;步骤四,去除上清液,使用洗涤液洗涤,将所述OVA-FB1加入所述管中,震荡;步骤五,去除上清液,使用洗涤液洗涤,将抗FB1单克隆抗体加入所述管中,震荡;步骤六,去除上清液,使用洗涤液洗涤,加入发光底物,震荡,测定发光值;步骤七,根据已知不同浓度FB1与抗FB1单克隆抗体加入后得到的发光值,制作标准曲线,再根据待测样品的发光值,通过标准曲线得到对应的FB1浓度。2.根据权利要求1所述的伏马毒素检测方法,其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员:周合,张根义,张进,周朱晨,杨敏,胡彬,吴念绮,
申请(专利权)人:百奥森江苏食品安全科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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