一种微生物耐药基因芯片试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种微生物耐药基因芯片试剂盒。该试剂盒包括扩增待测微生物基因的引物对和检测探针。该芯片包括检测待测微生物耐药基因的探针。一种微生物耐药基因芯片试剂盒，其特征在于：包括扩增待测微生物耐药基因的引物对和检测所述细菌耐药基因的探针；所述引物具有如AEQ ID No:1～32所示的序列或其互补链；所述探针具有如AEQ ID No:33～6所示的序列或其互补链。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学领域，特别是涉及一种微生物耐药基因芯片试剂盒。
技术介绍
微生物耐药检测显示，在耐药微生物中，革兰氏阴性菌占70％左右，其中以大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌为多，且多重耐药情况严重；革兰氏阳性菌占30％左右，其中，葡萄球菌属占到2/3,而金黄色葡萄球菌几乎占葡萄球菌属的一半，肠球菌属占革兰氏阳性菌的1/4左右。由于第三代和第四代头孢菌素、碳青霉烯类以及氟喹诺酮类等超广谱抗菌药物被广泛使用，微生物的耐药情况变得日益严重，造成感染性疾病难以控制、易复发、术后感染率高、昂贵抗菌药物使用量增加等后果。耐药菌株还随着国际交流的增多在全球范围蔓延。目前，临床上使用的耐药芯片试剂盒步骤过于繁琐，最顺利的情况也需要72小时才能提供药敏结果，且难以对自身生长缓慢、生长条件苛刻的微生物进行检测。此外，血清免疫学试剂盒也可用于微生物的耐药性检测，但其假阳性率和假阴性率高，重复性差，效能也不高。鉴于临床治疗的需要，医生往往先根据流行病学资料、临床症状、体征及影像学特征等，估计可能的病原体及药敏情况，经验性应用覆盖可能病原体的抗菌药物或者相对广谱的抗菌药物，待培养结果出来后，再对抗菌药物进行调整，这严重限制了临床医师为患者及时有效地选择敏感抗菌药物，尤其不利于重症感染性疾病的及时治疗，而且很可能存在抗生素滥用的问题，助长了耐药菌的产生。通过更便捷的试剂盒检测微生物的耐药基因，实现临床上耐药菌的快速准确诊断，是目前临床微生物学的重要研究和发展方向，它对控制医院内感染和抢救重症感染病人具有重要的意义。目前，临床微生物耐药基因的检测，基本以表型检测为主。由于耐药机制的多样性，某些耐药基因可能沉默表达，但潜在的耐药性是存在的，在合适的环境条件下，就会转变成耐药微生物，或者将耐药基因传播给其他微生物。PCR杂交分析是检测微生物耐药基因最常见的试剂盒，然而，在众多的耐药基因中筛选某一种或者几种耐药基因，需要做大量的重复工作。耐药基因芯片试剂盒，具有敏感性高、特异性强、快速、高通量等特性并行检测多种基因信息，实现大量重复工作的同步化，从而能提高检测效率。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一是提供一种微生物耐药基因芯片试剂盒，它可以用于多种临床常见耐药微生物产生的耐药基因的同时检测。为解决上述技术问题，本专利技术的微生物耐药基因芯片试剂盒，包括扩增待测微生物耐药基因的引物对和检测所述细菌耐药基因的探针；所述引物具有如AEQIDNo:1～32所示的序列或其互补链；所述探针具有如AEQIDNo:33～61所示的序列或其互补链。为解决上述技术问题，本专利技术的用于微生物耐药基因芯片，包括检测待测微生物耐药基因的探针，所述探针具有如AEQIDNo:33～61所示的序列或其互补链；所述微生物耐药基因包括：0XA-23、MP、VIM、aac(6,)-Ie-aph(2”)-Ia、CTX_M、KPC、CIT、mecA、TEM、SHV、DHA、qnrB、qnrS、aac(6,)-lb、ParC和GyrA。附图说明附图是用本专利技术的芯片试剂盒对临床血液样本进行耐药基因检测得到的芯片扫描图。具体实施方式以下实施例仅用于说明本专利技术，而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验试剂盒，通常按照常规条件。实施例1利用本专利技术的试剂盒进行临床常见耐药微生物的耐药基因检测。本实施例的检测目标包括：革兰氏阳性球菌中的金黄色葡萄球菌和肠球菌的耐药基因，以及革兰氏阴性杆菌中的肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的耐药基因。所述耐药基因没有微生物种属特异性差异，包括TEM、SHV、CTX-M、DHA、CIT、MP、VM、KPC、0XA-23、qnrB、qnrS、mecA、aac(6，)-Ie-aph(2”)-la、aac(6,)_Ib、GyrA和ParC，其中，aac(6,)-lb基因设计3个突变位点，分别为T304C、T304A、G535T；GyrA设计3个突变位点，分别为N87、Y87、L83；ParC设计4个突变位点，分别为180、K84、G84、V84。扩增上述耐药基因特异性片段的引物对，其正向引物和反向引物的序列长度为15～50个核苷酸，优选为15～25个核苷酸。引物的详细信息如表1所示：表1本专利技术的微生物耐药芯片试剂盒引物检测上述微生物耐药基因的特异探针，其序列长度为40～70个核苷酸，优选为45～60个核苷酸。探针的具体信息如表2所示：表2本专利技术的微生物耐药基因检测试剂盒包括的特异探针芯片为玻璃或其他类似的固相基质材料，针对微生物各耐药基因的特异性寡核苷酸探针固定在固相载体上。本文档来自技高网...

【技术保护点】
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述耐药基因为0XA‑23、IMP、VIM、aac(6,)‑Ie‑aph(2”)‑la、CTX‑M、KPC、CIT、mecA、TEM、SHV、DHA、qnrB、qnrS、aac(6,)‑lb、ParC和GyrA。

【技术特征摘要】
1.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述耐药基因为0XA-23、IMP、VIM、aac(6,)-Ie-aph(2”)-la、CTX-M、KPC、CIT、mecA、TEM、SHV、DHA、qnrB、qnrS、aac(6,)-lb、ParC和GyrA。2.—种用于微生物耐药基因芯片，其特征在于：包...

【专利技术属性】
技术研发人员：李寿乐，
申请(专利权)人：天津福德信泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12