协助鉴别诊断中风的方法技术

本发明专利技术提供协助鉴别诊断已患有或正患有中风的患者的出血性中风、缺血性中风和短暂性脑缺血发作的方法。所述方法包括：(i)测定获自患者的离体样品中生物标志物VCAM-1、GFAP和CRP的浓度；以及(ii)建立所述生物标志物的浓度的统计学意义。任选地，所述方法还包括以下步骤：(iii)测定获自患者的离体样品中生物标志物IL-6和sTNFR1的浓度；(iv)确定所述患者的性别；以及(v)与所述患者的性别结合，建立五种生物标志物的浓度的统计学意义。本发明专利技术也提供基底，其包含VCAM-1、GFAP和CRP的探针，用于协助鉴别诊断中风的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利技术背景中风是全世界第三大导致死亡的原因，并且可被定义为脑功能的快速发展丧失，原因是向脑的血液供应的中断。根据世界卫生组织(WorldHealthOrganisation)统计，全世界每年一千五百万的人患有中风，具有五百万的死亡以及另五百万永久地残疾。据推测，高血压是这一千五百万中风例中一千两百七十万例的贡献因子。在英国，每年大约150,000人具有中风，并且中风导致每年约53,000的死亡。仅在英国，每年中风花费经济估计80亿英镑，并且中风患者占据所有医院急性病床的大约20％以及长期病床的25％。中风可被归类为三种子类型：i)缺血性中风(IS)：当向脑的血液供应减少时发生，其导致脑损害。当血管堵塞时(通常由血凝块)，发生缺血性中风。该凝块在动脉粥样硬化斑块处局部地形成(血栓形成型中风)，或可选地其发生是由于源自血流中别处的移动颗粒或碎片(栓塞性中风)；ii)短暂性脑缺血发作(TIA)：其为‘微中风’，当向脑的血液供应暂时减少时发生。如果症状被快速地解决(24小时内个体返回正常的健康)则诊断为TIA；以及iii)出血性中风(HS)：当血液积累在头骨拱顶内时(通常当变弱的血管破裂时)发生。可将出血性中风分类为两种主要的子类型，即脑内的(脑组织内)和蛛网膜下腔的(脑的表层附近及其保护层下)。IS和TIA导致所有中风例的大约85％，HS导致15％。为了使中风后的神经性损害缩到最小，关键是快速和准确地诊断中风患者，以便可施用适当的治疗。例如，为了打破凝块，可施用溶解血栓的疗法，如组织血纤维蛋白溶酶原激活剂(TPA)。然而，这样的疗法仅在IS中是准许的，并且对HS是不利的。TIA的性质不需要这样的疗法，而诸如华法林和阿司匹林的血液稀释剂是这样的病例的处方药。目前，如果怀疑中风，评估身体的症状，并且通常进行电脑断层(CT)扫描。CT扫描对鉴定HS患者具有好的敏感性(大约90％敏感性)但对鉴定IS和TIA患者具有弱的敏感性(大约20％敏感性)。在实践中，TIA由于其短暂性的性质而极少发生或不发生组织损害，因此CT扫描作为诊断技术是无效的。磁共振成像(MRI)改善IS诊断的敏感性(至多大约80％)但增加时间需求、机器的可及性，并且昂贵的费用限制了其在中风诊断中的使用。CT扫描用于IS和TIA检测的弱敏感性意味着用于检测IS和TIA的基于生物流体的诊断生物标志物试验将为非常珍贵的工具以协助临床医生诊断中风子类型。基于生物流体的生物标志物具有促进和提高中风诊断准确性的潜能。多种候选生物标志物已被提议用于中风和中风子类型描述的诊断，并且现有技术中对IS/TIA与HS的区分存在若干描述，例如EP1238284、WO2010/086697、WO2010/012834和WO2002/012892。EP1419388公开了区分HS与IS以及所有中风类型与非中风对照的数据。然而，迄今为止还没有发现任何一种在临床实践中的用途，并且存在具有高敏感性和特异性以能够进行准确诊断的所有三种中风子类型的生物标志物的真实临床需求。使用血液试验对三种不同中风子类型的鉴别诊断将利于更知情的临床决策，潜在地使得不需要昂贵且不快速的神经成像诊断学，并且可改善患者的临床结果。专利技术概述根据第一方面，本专利技术提供协助鉴别诊断已患有或正患有中风的患者的出血性中风、缺血性中风和短暂性脑缺血发作的方法，其包括：测定获自患者的离体样品中生物标志物VCAM-1、GFAP和CRP的浓度；以及建立生物标志物的浓度的意义。根据第二方面，本专利技术提供基底，其包含生物标志物VCAM-1、GFAP和CRP的探针，用于本专利技术第一方面所述的协助鉴别诊断患者的出血性中风、缺血性中风和短暂性脑缺血发作的方法。根据第三方面，本专利技术涉及包含VCAM-1、GFAP和CRP的探针的基底在本专利技术第一方面所述的协助鉴别诊断患者的出血性中风、缺血性中风和短暂性脑缺血发作的方法中的用途。根据第四方面，本专利技术涉及VCAM-1、GFAP、CRP、IL-6和/或sTNFR1作为出血性中风的生物标志物和/或作为出血性中风、缺血性中风和短暂性脑缺血发作的区分指标的用途。附图简述图1为使用本专利技术的生物标志物区分TIA与其他中风类型的ROC曲线分析；图2为使用本专利技术的生物标志物区分IS与其他中风类型的ROC曲线分析；图3为使用本专利技术的生物标志物区分HS与其他中风类型的ROC曲线分析；图4为显示男性和女性个体中每种中风子类型的GFAP浓度的图表；图5为显示男性和女性个体中每种中风子类型的VCAM1浓度的图表；图6为显示男性和女性个体中每种中风子类型的CRP浓度的图表；图7为显示男性和女性个体中每种中风子类型的sTNFR1浓度的图表；图8为显示男性和女性个体中每种中风子类型的IL-6浓度的图表；和图9显示数据和相应的ROC曲线分析，其分别地比较设计分类算法用于从所有中风类型区分HS的逻辑回归和神经网络方法。专利技术详述本专利技术涉及基于生物标志物的方法和生物芯片，其可被用来协助区分三种中风子类型：出血性中风(HS)、缺血性中风(IS)和短暂性脑缺血发作(TIA)。除非另有规定，所有本文提及的术语‘中风’涵盖所有三种形式的中风。本文使用的术语‘缺血性中风(IS)’指中风的类型，当向脑的血液供应减少时发生，其导致脑损害。当血管堵塞时(通常通过血凝块)，缺血性中风发生。该凝块在动脉粥样硬化斑块下可局部地形成(血栓形成型中风)，或可选地其发生是由于源自血流中其他处的移动颗粒或碎片(栓塞性中风)。术语‘短暂性脑缺血发作(TIA)’指‘小中风’，当向脑的血液供应暂时性减少时发生。如果症状被很快地解决(24小时内个体返回正常的健康)则诊断为TIA。当血液在头骨拱顶内积累时(通常当变弱的血管破裂时)，术语‘出血性中风(HS)’发生。可将出血性中风分类为两种主要的子类型：脑内的(脑组织内)；和蛛网膜下腔的(脑表层周围并在其保护层下)。本文提及的‘已患有或正患有中风的患者’包括已被诊断为当前正患有中风或已被诊断为之前中过中风的患者。中风可为最近的事件，这样的事件发动个体寻求临床帮助的过程。术语“个体”和“患者”在本文可被交换地使用，并且指哺乳动物，其包括非灵长类(例如牛、猪、马、狗、猫、大鼠和小鼠)和灵长类(例如猴和人)。优选地，个体或患者为人。本文使用的术语‘生物标志物’指存在于获自患者的生物样品中的分子，所述样品中生物标志物的浓度可指示病理状态。本文描述了多种生物标志物，本申请的专利技术人发现所述多种生物标本文档来自技高网...

【技术保护点】
协助鉴别诊断已患有或正患有中风的患者的出血性中风、缺血性中风和短暂性脑缺血发作的方法，其包括：i)测定获自所述患者的离体样品中生物标志物VCAM‑1、GFAP和CRP的浓度；以及ii)建立所述生物标志物的浓度的统计学意义。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.06.04 GB 1309928.81.协助鉴别诊断已患有或正患有中风的患者的出血性中风、缺血性中风和短暂性脑缺
血发作的方法，其包括：
i)测定获自所述患者的离体样品中生物标志物VCAM-1、GFAP和CRP的浓度；以及
ii)建立所述生物标志物的浓度的统计学意义。
2.如权利要求1所述的方法，其还包括：
iii)测定获自所述患者的离体样品中生物标志物IL-6和sTNFR1的浓度；
iv)确定所述患者的性别；以及
v)与所述患者的性别结合，建立五种生物标志物的浓度的统计学意义。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中将每种生物标志物的浓度值输入统计学算法以产
生输出值，所述输出值与出血性中风、缺血性中风或短暂性脑缺血发作的鉴别诊断相关。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述方法被用来鉴别诊断出血性中风和缺血性中风/
短暂性脑缺血发作。
5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述统计学算法包括逻辑回归方程。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者被诊断为正患有或已患有中
风。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述患者通过以下步骤被诊断为已患有或正患有中
风：测定获自所述患者的离体样品中至少两种生物标志物的浓度，并且通过将每种生物标
志物的浓度值与相应的对照值比较，建立所述生物标志物的浓度的统计学意义...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊凡·麦康内尔，约翰·拉蒙特，彼得·菲茨杰拉德，康斯坦提诺斯·马克里斯，
申请(专利权)人：兰道克斯实验有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB