中药祖师麻注射液及其原料药材的指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术公开了中药祖师麻注射液及其原料药材祖师麻的指纹图谱检测方法，该方法包括供试品溶液的制备、对照指纹图谱的建立和供试液指纹图谱的测定。本发明专利技术通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件，经多次实验验证表明，本发明专利技术提供的中药祖师麻注射液及其原料药材祖师麻的指纹图谱检测方法，可以全面、客观、准确的检测和评价祖师麻注射液的质量，可以为祖师麻注射液从源头上保证原料药材的安全，有效，为保证临床疗效具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药注射剂的质检方法，具体涉及一种祖师麻注射液及其原料药材祖师麻的指纹图谱检测方法。
技术介绍
祖师麻，又名祖司麻、走司马，收载于《中国药典》1977年版一部，为瑞香科植物黄瑞香、陕甘瑞香及凹叶瑞香的茎皮和根皮。祖师麻注射液为瑞香科植物黄瑞香的根皮和茎皮经加工制成的灭菌水溶液，原收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册，质量标准为部标WS3-B-3927-98。祛风除湿，活血止痛。用于肢体关节肿胀、冷痛与刺痛，活动屈伸不利，阴雨天加重，舌有瘀斑，脉沉弦者；风湿性关节炎、类风湿性关节炎属上述症候者。祖师麻含有香豆素类、二萜类、木质素类、黄酮类、蒽醌类及甾醇类等化学成分，其中祖师麻甲素(7，8-二羟基香豆精)又称瑞香素，为生理活性成分。中药质量控制技术是中药现代化的关键技术之一，HPLC指纹图谱技术正在越来越多地应用于中药质量控制。原标准中有一项薄层鉴别和祖师麻甲素的含量测定，不能很好的反应制剂的整体质量，为确保临床用药安全有效，很有必要在现有技术的基础之上，设计研发一种能全面检测和评价祖师麻注射液质量的指纹图谱检测方法。本专利技术采用高效液相色谱法建立祖师麻注射液的HPLC指纹图谱分析方法；利用色谱指纹图谱相似度计算软件，对得到的HPLC指纹图谱进行相似度计算；建立祖师麻注射液标准特征指纹图谱，为该产品质量控制提供合理、可靠、简便的方法模式。
技术实现思路
本专利技术提供一种祖师麻注射液及其原料药材的指纹图谱检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价祖师麻注射液的质量，对控制祖师麻注射液的质量和原料药材的质量和保证临床疗效具有重要意义。为了实现以上技术目的，本专利技术采取的技术方案为：中药祖师麻注射液的指纹图谱检测方法，包括以下步骤：（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈为流动相A，以0.05%～0.5%磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱，柱温为30～40℃，检测波长为210～230nm；进样量5μl，流速：1.0ml/min。（2）参照物溶液制备：取祖师麻甲素对照品适量，精密称定，用注射用水稀释制成每1ml含4μg的溶液，微孔滤膜滤过，得到参照物溶液；（3）供试品溶液制备：精密量取祖师麻注射液5ml，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理1h，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；（4）高效液相色谱法测定祖师麻注射液的对照指纹图谱：取步骤（2）制得的祖师麻注射液参照物溶液，取14批祖师麻注射液按照步骤(3)制备成的供试品溶液，在色谱条件下进样，测得参照物溶液及各批次祖师麻注射液的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为祖师麻注射液对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定待测注射液指纹图谱：按步骤（3）祖师麻注射液供试品溶液制备方法制备待测供试品溶液，在相同的色谱条件下进样，测得待测供试品溶液的指纹图谱；（6）将步骤（5）得到的待测供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照溶液特征指纹图谱用相似度软件评价。进一步的，所述色谱条件为：以规格为5μm，泰克美C184.6mm×250mm为色谱柱，流动相：乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长为220nm，流速为1ml/min，理论塔板数按祖师麻甲素峰计算应不低于6000。中药祖师麻注射液原料药材祖师麻的指纹图谱检测方法，包括以下步骤：（1）色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈为流动相A，以0.05%～0.5%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，柱温为30～40℃，检测波长为210～230nm；进样量5μl，流速：1.0ml/min。（2）参照物溶液制备：取祖师麻对照药材适量，精密称定，用注射用水制成每1ml含5μg的对照药材溶液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，得到参照物溶液；（3）供试品溶液制备：精密称祖师麻中药材粉末1.0g，置25ml量瓶中，加水适量，超声处理1h，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；（4）高效液相色谱法测定祖师麻药材的对照指纹图谱：取步骤（2）制得的祖师麻药材参照物溶液及16批祖师麻药材按照步骤(3)制备的供试品溶液，在色谱条件下进样，测得祖师麻药材参照物及各批次祖师麻药材的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为祖师麻药材对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定待测祖师麻药材指纹图谱：按步骤（3）祖师麻药材供试品溶液制备方法制备待测祖师麻药材供试品溶液，在相同的色谱条件进样，测得待测祖师麻药材供试品溶液的指纹图谱；（6）将步骤（5）得到的待测祖师麻药材供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照药材特征指纹图谱用相似度软件评价。进一步的，所述色谱条件为：以规格为5μm，泰克美C184.6mm×250mm为色谱柱，流动相：乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长为220nm，流速为1ml/min，理论塔板数按祖师麻甲素峰计算应不低于6000。本专利技术将供试品指纹图谱与对照指纹图谱经计算机相似度评价软件（选用中国药典委推荐的“中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件2012A版”）计算，获得指纹图谱相似度数值，依据相似度数值，应用于祖师麻注射液的质量控制，以指纹图谱相似度应大于0.90为检验质控标准；应用于祖师麻注射液原料药材祖师麻的质量控制，以指纹图谱相似度应大于0.85为检验质控标准。本专利技术提供的祖师麻注射液及其原料药材的指纹图谱检测方法用于生产检验质量控制，所得产品具有较高的质量稳定性，可确保产品安全有效。采用本专利技术提供的中药祖师麻注射液指纹图谱检测方法检测出有10个特征峰，以5号峰为标记，有明显的吸收峰，为祖师麻甲素化合物，可作为标准参照物。采用本专利技术提供的中药祖师麻注射液原料药材祖师麻指纹图谱检测方法检测出有12个共有峰，以6号峰为标记，有明显的吸收峰，为祖师麻甲素化合物，可作为标准参照物。本专利技术提供的祖师麻注射液原料药材的指纹图谱检测方法，选择与祖师麻注射液指纹图谱测定方法相同的检测条件进行药材指纹图谱考察，便于更好的考察药材指纹图谱与制剂指纹图谱的相关性，也有利于比较各药材产地的差异，为保证祖师麻注射液的安全稳定的原料药材来源提供保证。本专利技术提供的祖师麻注射液及其原料药材指纹图谱检测方法的最佳条件筛选过程：1、仪器与试剂仪器：WatersALLiancee本文档来自技高网...

【技术保护点】
中药祖师麻注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈为流动相A，以0.05%～0.5%磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱，柱温为30～40℃，检测波长为210～230nm；进样量5μl，流速：1.0ml/min；（2）参照物溶液制备：取祖师麻甲素对照品适量，精密称定，用注射用水稀释制成每1ml含4μg的溶液，微孔滤膜滤过，得到参照物溶液；（3）供试品溶液制备：精密量取祖师麻注射液5ml，置10ml 量瓶中，加水适量，超声处理1h，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm 的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；（4）高效液相色谱法测定祖师麻注射液的对照指纹图谱：取步骤（2）制得的祖师麻注射液参照物溶液，取14批祖师麻注射液按照步骤(3)制备成的供试品溶液，在色谱条件下进样，测得参照物溶液及各批次祖师麻注射液的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为祖师麻注射液对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定待测注射液指纹图谱：按步骤（3）祖师麻注射液供试品溶液制备方法制备待测供试品溶液，在相同的色谱条件下进样，测得待测供试品溶液的指纹图谱；（6）将步骤（5）得到的待测供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照溶液特征指纹图谱用相似度软件评价。...

【技术特征摘要】
1.中药祖师麻注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈为流动相A，以
0.05%～0.5%磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱，柱温为30～40℃，检测波长为210～
230nm；进样量5μl，流速：1.0ml/min；
（2）参照物溶液制备：取祖师麻甲素对照品适量，精密称定，用注射用水稀释制成每1ml
含4μg的溶液，微孔滤膜滤过，得到参照物溶液；
（3）供试品溶液制备：精密量取祖师麻注射液5ml，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理
1h，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
（4）高效液相色谱法测定祖师麻注射液的对照指纹图谱：取步骤（2）制得的祖师麻注射
液参照物溶液，取14批祖师麻注射液按照步骤(3)制备成的供试品溶液，在色谱条件下进
样，测得参照物溶液及各批次祖师麻注射液的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度
软件计算获得共有模式作为祖师麻注射液对照指纹图谱；
（5）高效液相色谱法测定待测注射液指纹图谱：按步骤（3）祖师麻注射液供试品溶液制
备方法制备待测供试品溶液，在相同的色谱条件下进样，测得待测供试品溶液的指纹图谱；
（6）将步骤（5）得到的待测供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照溶液特征指纹图
谱用相似度软件评价。
2.根据权利要求1所述的中药祖师麻注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于:所述色
谱条件为：以规格为5μm，泰克美C184.6mm×250mm为色谱柱，流动相：乙腈为流动相A，以
0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长为220nm，流速为1ml/min，理论塔
板数按祖师麻甲素峰计算应不低于6000。
3.中药祖师麻注射液原料药材祖师麻的指纹图谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：王志锋，席倬霞，雷文贵，张涛，
申请(专利权)人：甘肃兰药药业有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62