本发明专利技术涉及一种用于稳定生理活性的蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的组合物，更具体地说，涉及一种使用含有铵盐或铵盐和琥珀酸盐的组合的组合物，稳定蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的方法。含有根据本发明专利技术的铵盐或铵盐和琥珀酸盐组合的组合物能有效抑制蛋白质-Fc结构域融合蛋白的聚集，并因此使得融合蛋白能够储存很长一段时间。因此，该组合物可广泛用于使用该蛋白质-Fc结构域融合蛋白的医疗领域。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于稳定生理活性的蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的组合物，更具体地说，涉及一种使用含有铵盐或铵盐和琥珀酸盐组合的组合物，稳定蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的方法。
技术介绍
用于治疗疾病目的的抗体药物是应用了先进的生物过程技术，包括细胞系开发技术、细胞培养技术和纯化技术的生物药。随着这些抗体药物被证明比现有药物具有优异的疗效和安全性，对此的需求日益增多。例如，已将通过将人p75的人肿瘤坏死因子受体融合到人IgG1的Fc结构域的胞外配体结合部分而制备的融合蛋白(TNFR:Fc；依那西普)用作治疗类风湿性关节炎的药剂。此外，为了提高生理活性物质的体内的半衰期，试图使用GLP-1R激动剂和Fc结构域的融合蛋白(US2004-0558627；Chung,H.S.et al.,Regulatory peptide,170,2011)开发糖尿病治疗剂。另外，试图将诸如hGH或EPO的生理活性物质融合到Fc结构域以增加生理活性物质的体内半衰期(KR10-2008-7018012)。近年来，VEGF受体和Fc结构域的融合蛋白(aflibercept)已被批准并用作治疗湿性年龄相关性黄斑变性(WAMD)的药剂。然而，如上所述的融合蛋白的问题在于，它们具有大且复杂的结构并且物理上不稳定，因此导致聚集。各种导致这样的聚集的因素都存在于生产和存储蛋白质的过程。例如，聚集可以由以下一种或多种因素引起。在纯化期间，并非最佳的pH、盐的种类、盐浓度、温度、与空气接触、搅拌速度等都会引起聚集，而在配制过程中，蛋白质的浓度条件会引起聚集。在缓冲液交换期间，通过过滤膜、搅拌等会引起聚集，而在存储过程中，温度变化、pH变化、与空气接触、搅拌等会引起聚集。另外，当含有蛋白质的制剂暴露于光时，也会发生聚集，并且材料封装也会引起聚集(Hamada,H.et al.,Current Pharmaceutical Biotechnology,10:400,2009)。当抗体蛋白的疏水区由于其结构变化而被暴露时，在缓冲液中发生融合蛋白的最大聚集。换句话说，蛋白质分子的疏水区被集合在一起形成聚集，并且这种聚集由于抗体蛋白质之间的共价键也可能以不可逆的方式发生(Hamada,H.et al.,Current Pharmaceutical Biotechnology,10:348,2009)。因上述原因而聚集的融合蛋白或抗体蛋白随着时间的流逝而具有降低的活性或失去活性。此外，当这些蛋白质聚集时，它们具有不会出现在非聚集状态下的抗原性，因此当被注入人体时，会导致抗毒抗体(ADA)的产生。因此，目前迫切需要一种用于减少融合蛋白的聚集的方法和稳定的制剂，其包含展现出降低的聚集水平的融合蛋白(Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing,Biotechnology:Pharmaceutical Aspects Volume XI,2010,pp 271-291)。为了这个目的，尝试了加入防止聚集或控制pH的赋形剂或者加入缓冲液组合物的方法。在抗体蛋白的疏水基团暴露于蛋白质分子的表面并相互结合而引起聚集的情况下，使用能够稳定暴露的疏水基团的赋形剂来防止聚集。例如，报道了使用氨基酸如精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、组氨酸和甘氨酸(US 4362661A和US 7648702)，聚山梨醇酯系表面活性剂，两亲性聚合物如聚乙二醇(PEG)或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，多糖如葡聚糖，或单糖或二糖如蔗糖、麦芽糖或海藻糖(US 5945098A)。然而，蛋白质和Fc结构域的融合蛋白比通常生产的抗体蛋白质的稳定性要差，并且因此相比其它蛋白质或抗体显示出更强的形成聚集的趋势。有这样一个实例，其中向蛋白质-Fc结构域融合蛋白中加入表面活性剂如聚山梨醇酯来制备制剂，以防止融合蛋白的聚集(Steven J.Shire et al.,Biotechnology:Pharmaceutical Aspects,Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing,XI:115,2010)。因此，本专利技术人发现，含有铵盐或铵盐和琥珀酸盐组合的组合物可以通过抑制融合蛋白的聚集来增加蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的稳定性，使其能够很容易地保存很长的一段时间，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种用于稳定化的组合物和使用该组合物稳定蛋白质-Fc结构域融合蛋白的方法，所述组合物可以通过抑制生理活性的蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的聚集，增加该融合蛋白的稳定性。本专利技术的另一个目的是提供一种用于预防和治疗疾病的组合物，该组合物包含所述用于稳定化的组合物。为了达到上述目的，在一个方面，本专利技术提供了一种用于稳定蛋白质-Fc结构域融合蛋白的组合物，其含有铵盐或铵盐和琥珀酸盐的组合，以及一种用于预防和治疗疾病的组合物，其包括所述用于稳定所述融合蛋白的组合物。在另一个方面，本专利技术提供了一种用于稳定蛋白质-Fc结构域融合蛋白的方法，其将铵盐或铵盐和琥珀酸盐的组合添加到含有所述融合蛋白的组合物中。附图说明图1示出测量在50℃将依那西普(TNF受体的水溶性部分和Fc结构域的融合蛋白)在含有各种赋形剂(精氨酸(Arg)、EDTA、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、羟丙基环糊精(HP环糊精)、氯化铵、聚乙二醇(PEG)、脯氨酸(Pro)、蔗糖、海藻糖和聚山梨醇酯20)的制剂溶液中存储1周后，依那西普的聚集度的结果。图2示出测量在50℃将依那西普在含有各种赋形剂(精氨酸(Arg)、脯氨酸(Pro)、50mM氯化铵、100mM氯化铵、200mM氯化铵、蔗糖、聚山梨醇酯20和羟丙基环糊精(HPcD))的制剂溶液中存储1周后，依那西普的聚集度的结果。图3示出测量在37℃将依那西普在含氯化铵的制剂溶液中存储4周后，依那西普的聚集度的结果。Arg：精氨酸；AmCl：氯化铵；AmSul：硫酸铵；Am+Lys：氯化铵+赖氨酸；Am+EDTA：氯化铵+EDTA；Am+Polysorabate 20：氯化铵+聚山梨醇酯20；Am+Suc：氯化铵+蔗糖。图4和图5示出测量在45℃将依那西普在含有精氨酸、氯化铵、硫酸铵、氯化铵+赖氨酸、氯化铵+EDTA、氯化铵+聚山梨醇酯20、和氯化铵+本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于稳定蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的组合物，其包含铵盐。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.11.27 KR 10-2012-01349461.一种用于稳定蛋白质和Fc结构域的融合蛋白的组合物，其包含铵
盐。
2.根据权利要求1的组合物，进一步包含琥珀酸盐。
3.根据权利要求2的组合物，其中以5-200mM的浓度包括所述琥珀酸
盐。
4.根据权利要求2或3的组合物，其中所述琥珀酸盐用作具有pH 5.5-
6.5的缓冲液。
5.根据权利要求1的组合物，其中所述铵盐抑制蛋白质-Fc结构域融合
蛋白的聚集。
6.根据权利要求1的组合物，其中所述铵盐选自氯化铵、硫酸铵、碳
酸铵和硝酸铵。
7.根据权利要求1的组合物，其中以5-500mM的浓度包括所述铵盐。
8.根据权利要求1的组合物，其中所述蛋白质-Fc结构域融合蛋白是人
p75肿瘤坏死因子受体的胞外配体结合结构域融合到人IgG1的Fc结构域的
融合蛋白。
9.根据权利要求1的组合物，进一步包含赋形剂。
10.根据权利要求9的组合物，其中所述赋形剂是选自碱性氨基酸、糖
类和表面活性剂中的至少一种。
11.根据权利要求9的组合物，其中所述赋形剂是蔗糖、赖氨酸或蔗糖
和赖氨酸两者。
12.一种稳定蛋白质-Fc结构域融合蛋白的方法，向包含所述蛋白质-Fc
结构域融合蛋白的组合物中添加铵盐。
13.根据权利要求12的方法，其中所述组合物进一步包括琥珀酸盐。
14.根据权利要求13的方法，其中以5-200mM的浓度包括所述琥珀酸
盐。
15.根据权利要求13或14中，其中以具有pH 5.5-6.5的缓冲液的形式
添加所述琥珀酸盐。
16.根据权利要求12的方法，其中所述铵盐抑制蛋白质-Fc结构域融合
\t蛋白的聚集...
【专利技术属性】
技术研发人员：朴淳宰，金成圭，
申请(专利权)人：阿特根公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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