具有对抗大肠杆菌和产气荚膜梭菌的抗微生物作用并且具有高产孢能力的抗生素敏感性芽孢杆菌属菌株制造技术

本发明专利技术提供了一种芽孢杆菌属(Bacillus)菌株，所述芽孢杆菌属菌株的特征在于：(i)对氨苄西林(ampicillin)、万古霉素(vancomycin)、庆大霉素(gentamicin)、卡那霉素(kanamycin)、链霉素(streptomycin)、红霉素(erythromycin)、克林霉素(clindamycin)、四环素(tetracycline)以及氯霉素(chloramphenicol)具有敏感性；(ii)具有对抗大肠杆菌(E.coli)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的抗微生物活性；以及(iii)在孵育2天后进行测量时具有至少80％的产孢百分比。本发明专利技术进一步涉及一种用于选择这些菌株的方法。根据本发明专利技术的所鉴定出的菌株中的许多是菌种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的菌株。所述解淀粉芽孢杆菌中的一些被进一步鉴定为解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.amyloliquefaciens)，而其它被鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)。本发明专利技术的芽孢杆菌属菌株可以用作动物饲料的饲料添加剂，其中它具有益生作用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有对抗大肠杆菌和产气荚膜梭菌的抗微生物作用并且具有高产孢能力的抗生素敏感性芽孢杆菌属菌株
在动物饲料行业中将芽孢杆菌属菌种(Bacillusspp)用于益生菌解决方案，并且基于芽孢杆菌的益生菌对于生产动物的生产和健康的积极作用是众所周知的(Spiehs等,2008；Cutting,2011)。它们的使用与芽孢杆菌能够代替抗生素或减少抗生素的使用有关，所述抗生素在动物饲料行业中被用作生长促进剂。然而，对针对常用于人类的抗生素不具有抗生素抗性的芽孢杆菌属菌株的需求仍未得到满足。本专利技术提供了分离的芽孢杆菌属菌株，所述分离的芽孢杆菌属菌株的特征在于对氨苄西林(ampicillin)、万古霉素(vancomycin)、庆大霉素(gentamicin)、卡那霉素(kanamycin)、链霉素(streptomycin)、红霉素(erythromycin)、克林霉素(clindamycin)、四环素(tetracycline)以及氯霉素(chloramphenicol)具有敏感性并且还具有对抗诸如大肠杆菌(E.coli)和产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)之类的主要病原体的抗微生物活性。在第2天进行测量时，所述菌株进一步具有至少80％的产孢百分比，从而使得有可能高效地生产安全并且有用的芽孢杆菌芽孢以用于动物饲料生产。本专利技术进一步涉及本专利技术的芽孢杆菌属菌株的芽孢用于生产动物饲料添加剂、特别是用于猪和家禽的产品的用途，其中所述菌株具有益生(健康、饲料利用率以及生长促进)作用。
技术介绍
猪，特别是仔猪，易患新生动物泄泻症，即腹泻，所述新生动物泄泻症可能由诸如大肠杆菌(Escherichiacoli/E.coli)以及A型和C型产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens/C.perfringens)之类的细菌所引起。如果不进行治疗，新生动物泄泻症可能会导致死亡损失和严重的生产损失，包括体重减轻。大肠杆菌是仔猪腹泻的主要原因，并且在养殖场中所使用的抗生素中有50％至75％是用来对抗断奶后腹泻，所述断奶后腹泻主要由大肠杆菌所引起。腹泻是断奶幼畜和生长期幼畜(最多40kg)所面临的最大问题，并且大肠杆菌是最重要的会引起腹泻的病原体(Klose等,2010)。猪的肠道梭菌感染主要在断奶前的时期出现，但还与在肥育期侵害猪的出血性肠综合征有关。虽然针对C型产气荚膜梭菌进行免疫接种已极大地降低了断奶前死亡率，但当前没有可商购的疫苗可供用于对抗A型产气荚膜梭菌。A型产气荚膜梭菌感染目前随着断奶前猪的发病率不断增加而被重视，并且诊断和防治的方法与用于C型感染的诊断和防治方法相比均不同且更为复杂。家禽的多种感染和疾病由包括大肠杆菌和产气荚膜梭菌在内的病原性细菌所引起。由病原体所引起的感染和疾病会导致死亡率升高、性能下降以及生产成本增加。此外，这些病原体中有许多可能会向人类传播。禽类大肠杆菌病是一种由大肠杆菌引起的全身感染并且最常出现在年幼的肉仔鸡和幼禽中。益生菌在动物健康应用中被用以维持健康肠道微生物区系，包括减少诸如梭状芽孢杆菌(Clostridia)和大肠杆菌之类的有害细菌以及增加诸如乳酸杆菌属菌种(Lactobacillusspp.)和双歧杆菌(Bifidobacterium)之类的有益细菌。益生菌非常适合于维持病原性细菌与有益细菌之间的健康平衡，这是因为不同于抗生素，它们不会不加区别地破坏细菌，它们也不会产生病原性细菌的抗生素抗性菌株。认为益生菌通过以下多种机制维持健康肠道微生物区系：竞争性排斥病原性细菌、经由产生抗微生物性物质来减少病原性细菌、增强有益肠道微生物区系的生长和活力、以及刺激动物的全身性免疫应答。鉴于上述内容，期望用一种或多种芽孢杆菌属菌株来治疗或预防猪和家禽的因大肠杆菌和/或梭状芽孢杆菌感染所致的疾病。Guo等,2006描述了对作为潜在益生菌的芽孢杆菌属菌株进行的筛选以及在猪中对枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)MA139进行的测试。从肉仔鸡、猪、土壤、发酵食物以及中草药中采集了124个样品。从这些样品中分离出750种需氧型芽孢形成菌株。使用滤纸片平板扩散测定法(discplatediffusionassay)来测试针对大肠杆菌K88和K99、沙门氏菌(Salmonella)以及金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的抑制活性。测试具有最佳活性的6种芽孢杆菌在模拟GIT条件(pH2和0.3％的胆汁盐)下的存活率。枯草芽孢杆菌MA139是最佳的候选者并且在使用90头仔猪进行的28天饲喂试验中在仔猪中对枯草芽孢杆菌MA139进行体内测试。ADG和饲料利用率提高。乳酸菌增加，粪便中的大肠杆菌减少。然而，未测试对抗产气荚膜梭菌的抗微生物活性和对抗生素的敏感性。Barbosa等,2005描述了从有机(接触土壤)养殖的肉仔鸡的粪便中分离出237种芽孢杆菌。对31种分离株进行了表征。枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)存在于这些当中。多种枯草芽孢杆菌菌株对产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌显示出抑制作用。地衣芽孢杆菌还显示出对抗产气荚膜梭菌的作用。然而，所选的芽孢杆菌分离株中无一种表现出如本申请中所定义的对抗大肠杆菌的抗微生物活性。所选择的一种芽孢杆菌分离株对大肠杆菌菌株O78:K80显示出生长强度降低作用，但未显示出完全的抑制作用，并且未显示出对抗所测试的其它大肠杆菌菌株的作用(参见表5)。未提供有关孵育2天后的产孢百分比或对万古霉素、卡那霉素、链霉素以及克林霉素的敏感性的数据。Chaiyawan等,2010公开了一种芽孢杆菌属菌株菌种T3-1，所述芽孢杆菌属菌株菌种T3-1对医疗中广泛使用的抗生素敏感并且显示出对抗产气荚膜梭菌ATCC15191的抗微生物活性。所述菌株不具有对抗大肠杆菌O157的抗微生物活性。未提供有关孵育2天后的产孢百分比的数据。Benitez等,2011最近描述了完整或失活的大肠杆菌的存在增强了解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)LBM5006菌株对抗微生物肽的合成。US7,754,469涉及用于治疗家禽的微生物和方法，并且US8,021,654涉及使用芽孢杆菌属菌株治疗猪的方法。然而，在这些文章或专利中没有一篇中存在任何有关选择如下芽孢杆菌属菌株的描述或建议，所述芽孢杆菌属菌株对常用于人类的抗生素具有敏感性，具有对抗产气荚膜梭菌和大肠杆菌这两者的抗微生物活性并且具有高产孢百分比，以使得所述菌株可用于高效产孢并且因此可用于芽孢杆菌属益生菌生产。现有技术文献(例如Barbosa等,2005；Chaiyawan等,2010；以及Guo等,2006)中没有一篇公开了对常用于人类的抗生素具有敏感性、具有在抑制生长的意义上对抗产气荚膜梭菌和大肠杆菌这两者的抗微生物活性并且具有高产孢百分比的菌株。综上所述，与筛选芽孢杆菌属菌株有关的现有技术并未提供本专利技术的三个区别特征，即对常用于人类的抗生素具有敏感性、具有对抗大肠杆菌和产气荚膜梭菌的抗微生物活性以及具有高产孢百分比。现有技术也并未提供满足这三个标准的芽孢杆菌属菌株。
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题在于提供一种芽孢杆菌属菌株，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种芽孢杆菌属(Bacillus)菌株，所述菌株的特征在于：(i)对氨苄西林、万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、红霉素、克林霉素、四环素以及氯霉素具有敏感性；(ii)具有对抗大肠杆菌(E.coli)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的抗微生物活性；以及(iii)在孵育2天后进行测量时具有至少80％的产孢百分比。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.13 EP 12164087.41.芽孢杆菌属菌株，所述菌株选自由以下各项组成的组：(a)具有保藏号DSM25839的莫哈韦芽孢杆菌菌株CHCC15510；(b)具有保藏号DSM25840的解淀粉芽孢杆菌菌株CHCC15516、具有保藏号DSM27032的解淀粉芽孢杆菌菌株CHCC15536以及具有保藏号DSM27033的解淀粉芽孢杆菌菌株CHCC15539；以及(c)具有保藏号DSM25841的枯草芽孢杆菌菌株CHCC15541。2.一种芽孢杆菌组合物，所述芽孢杆菌组合物包含至少一种如权利要求1所述的芽孢杆菌属菌株的细胞。3.如权利要求2所述的芽孢杆菌组合物，所述芽孢杆菌组合物包含至少两种如权利要求1所述的菌株的细胞。4.如权利要求2或3所述的芽孢杆菌组合物，所述芽孢杆菌组合物包含至少三种如权利要求1所述的菌株的细胞。5.如权利要求2或3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·尼尔森，梅泰·戴尼斯·康托，柏姬斯图劳里森，帕特里克·德克斯，E·约翰森，
申请(专利权)人：科汉森有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK