本发明专利技术涉及能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯去氧胆酸聚合物胶束的制备方法及其应用，有效解决制备能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束，并实现对癌症的综合治疗用药问题，取15-20ml浓硝酸置于烧杯中，加入150-200mg透明质酸，控制温度0℃，反应3-6h，再加入400-500ml冰水沉淀，抽滤，沉淀物用蒸馏水洗涤至pH为6.8-7.0，冷冻干燥，得透明质酸硝酸酯，将10-15mg去氧胆酸钠溶于5-7ml有机溶剂中，加入60-80mg1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺和36-45mg羟基琥珀酰亚胺，室温活化反应15min，将100-150mg透明质酸硝酸酯溶于20-25ml有机溶剂中，将其加入去氧胆酸钠溶液中，室温搅拌反应24-48h，透析48h，冷冻干燥，即得，本发明专利技术有效克服难溶性药物的吸收问题，靶向性强，实现对癌症的综合治疗。
【技术实现步骤摘要】
一种能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯去氧胆酸聚合物胶 束的制备方法及其应用
本专利技术涉及医药，特别是一种能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯去氧胆酸聚合物 胶束的制备方法及其应用。
技术介绍
到目前为止，肿瘤的治疗主要依靠化学药物治疗、外科手术、放射治疗、免疫治疗 及综合治疗，临床上常用的抗肿瘤药物大多是以传统的核酸及蛋白质为靶点的细胞毒性药 物，其缺点是选择性差、毒副作用强，作用机制单一，易产生耐药性。一氧化氮（NO)是体内 重要的信使物质和效应分子，参与了多种生理和病理反应，具有广泛的生理功能。NO可以增 强巨噬细胞对于肿瘤细胞的毒性，抑制肿瘤细胞的增殖，抑制血管生成和转移并加速肿瘤 细胞的凋亡。一方面，NO能够抑制线粒体呼吸作用，改变铁的代谢和与一些酶的相互作用来 破坏肿瘤细胞生长，从而发挥直接的抗肿瘤作用。另一方面，NO与氧自由基结合，生成一系 列活性氮，如N 2O3, NO2和0N00-，破坏肿瘤细胞内的蛋白质、核酸等组分从而发挥间接作用。 由于NO是气体物质，在体内半衰期比较短，在水溶液中不稳定，不方便利用等特 点，越来越多的研究集中于NO供体。其中靶向抗肿瘤NO供体药物由于对靶组织特异性的 药物传递而逐渐成为研究热点。透明质酸（HA)作为一种天然的高分子酸性黏多糖，广泛分 布于人体的各部位，具有良好的生物相容性和生物可降解性；此外，透明质酸与肿瘤细胞表 面过度表达的特异性标志物，如CD44具有较高的亲合力，可潜在的增强由受体介导的细胞 内吞作用，从而将药物主动靶向于病灶部位，可避免对正常细胞的毒性，提高药物的治疗指 数。近年来，以透明质酸作为靴向载体用于传递抗肿瘤药物的研究受到广泛关注。因此，若 将透明质酸衍生化形成有机硝酸酯类NO供体，一方面可以在细胞内谷胱甘肽酶、细胞色素 P450酶等催化或非酶促作用下释放出NO发挥作用，另一方面还可以实现肿瘤的主动靶向 目的。 但是，透明质酸具有很高的亲水性，单纯的HA聚合物不适用于脂溶性抗肿瘤药物 的包封及选择性转运，由于HA具有可用于化学修饰的多种官能团，可与疏水性分子共价形 成两亲性的嵌段聚合物，在水中自组装形成胶束，实现难溶性药物的靶向转运而引起了广 泛的关注。嵌段共聚物胶束作为抗肿瘤药的载体，可以通过增强难溶性药物在水中的溶解 性、延长药物血液循环时间、通过EPR效应提高药物在肿瘤部位的选择性蓄积、降低网状内 皮系统对抗肿瘤药物的识别和摄取来极大的改善抗癌药物的抗肿瘤效果，是一种长效、高 效、安全的抗肿瘤药物载体。 选择具有良好生物相容性、肿瘤细胞靶向性的天然多糖--透明质酸，通过浓硝 酸硝化法向HA分子中引入硝基，形成透明质酸硝酸酯，之后通过酰胺反应将硝酸酯化的HA 与脱氧胆酸共价相连形成两亲性的二嵌段共聚物，该共聚物在水中可以自组装形成纳米级 胶束，从而构建了一种新型的兼具NO供体与肿瘤细胞主动靶向性的透明质酸硝酸酯-去氧 胆酸聚合物胶束，并将一种有效的NO供体、强大的胶束负载药物特性、透明质酸独特的肿 瘤细胞靶向性、辅助的抗肿瘤活性、良好的生物相容性有机的整合于一体，既可克服难溶性 药物的吸收问题，传统化疗技术的非靶向性难题，NO体内半衰期短的问题，又可以实现NO 与化疗药协同治疗肿瘤的目的，实现对癌症的综合治疗，但至今未见有能提供一氧化氮的 透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束的制备方法及其应用的公开报道
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种能提供一氧 化氮的透明质酸硝酸酯去氧胆酸聚合物胶束的制备方法及其应用，可有效解决制备能提供 一氧化氮的透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束，并实现对癌症的综合治疗用药问题。 本专利技术解决的技术方案是，将透明质酸分子结构中的羟基通过浓硝酸硝化法化学 修饰为透明质酸硝酸酯，然后将透明质酸分子中的氨基与去氧胆酸分子中的羧基进行酰胺 化反应共价连接，形成二嵌段共聚物，在水介质中形成胶束，所述透明质酸为分子量等于或 低于400kd，并等于或高于600道尔顿的低分子量透明质酸，具体由以下步骤实现： (1)、透明质酸硝酸酯的合成：取15_20ml的质量含量3 96%的浓硝酸置于烧杯 中，缓慢加入150_200mg的透明质酸，控制温度为(TC，反应3-6h，再加入400-500ml冰水进 行沉淀，抽滤得沉淀物，沉淀物用蒸馏水洗涤至PH为6. 8-7. 0,冷冻干燥，得透明质酸硝酸 酯（NO2-HA); (2)、透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束的制备：将10_15mg的去氧胆酸钠， 溶于5-7ml有机溶剂中，加入60-80mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC)和 36-45mg羟基琥珀酰亚胺（NHS)，室温活化反应15min，成去氧胆酸钠溶液；将步骤（1)制备 的100-150mg透明质酸硝酸酯，溶于20-25ml有机溶剂中，搅拌下将其缓慢加入去氧胆酸钠 溶液中，再继续室温搅拌反应24-48h，透析48h，冷冻干燥，得透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚 合物胶束； 所述的有机溶剂为甲酰胺、或N，N-二甲基甲酰胺、或N，N-二甲基甲酰胺与甲酰胺 的混合溶剂。 上述方法制备的能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束可有 效用于制备抗肿瘤药物组合物，该抗肿瘤药物组合物是由透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合 物胶束和药学活性或药理活性分子制成载药纳米胶束，所述的药学活性或药理活性分子 为脂溶性的药物分子，或青蒿素及其衍生物、紫杉醇、多西紫杉醇、羟基喜树碱；所述抗肿瘤 药物组合物可以用于注射、口服或植入给药。 本专利技术选择具有良好生物相容性、肿瘤细胞靶向性的天然多糖一透明质酸，通 过浓硝酸硝化法向HA分子中引入硝基，形成透明质酸硝酸酯，之后通过酰胺反应将硝酸酯 化的HA与脱氧胆酸共价相连形成两亲性的二嵌段共聚物，该共聚物在水中可以自组装形 成纳米级胶束，从而构建了一种新型的兼具NO供体与肿瘤细胞主动靶向性的透明质酸硝 酸酯-去氧胆酸聚合物胶束，并将一种有效的NO供体、强大的胶束负载药物特性、透明质酸 独特的肿瘤细胞靶向性、辅助的抗肿瘤活性、良好的生物相容性有机的整合于一体，既可克 服难溶性药物的吸收问题，传统化疗技术的非靶向性难题，NO体内半衰期短的问题，又可以 实现NO与化疗药协同治疗肿瘤的目的，实现对癌症的综合治疗，是治疗癌症药物上的一大 创新。 【附图说明】 图1为本专利技术透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束紫外分光光谱图。 图2为本专利技术透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束激光粒度分析图。 【具体实施方式】 以下结合实施例对本专利技术的【具体实施方式】作详细说明。 本专利技术在具体实施中，可由以下实施例给出。 实施例1 本专利技术在具体实施中，可由以下方法给出： (1)、透明质酸硝酸酯的合成：取17-18ml的质量含量3 96%的浓硝酸置于烧杯 中，缓慢加入170_180mg的透明质酸，控制温度为(TC，反应3-6h，再加入430-470ml冰水进 行沉淀，抽滤得沉淀物，沉淀物用蒸馏水洗涤至PH为6. 8-7. 0,冷冻干燥，得透明质酸硝酸 酯（NO2-HA); (2)、透明本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯去氧胆酸聚合物胶束的制备方法，其特征在于，将透明质酸分子结构中的羟基通过浓硝酸硝化法化学修饰为透明质酸硝酸酯，然后将透明质酸分子中的氨基与去氧胆酸分子中的羧基进行酰胺化反应共价连接，形成二嵌段共聚物，在水介质中形成胶束，所述透明质酸为分子量等于或低于400 kd，并等于或高于600道尔顿的低分子量透明质酸，具体由以下步骤实现：（1）、透明质酸硝酸酯的合成：取15‑20ml的质量含量≧96%的浓硝酸置于烧杯中，缓慢加入150‑200mg的透明质酸，控制温度为0℃，反应3‑6h，再加入400‑500ml冰水进行沉淀，抽滤得沉淀物，沉淀物用蒸馏水洗涤至pH为6.8‑7.0，冷冻干燥，得透明质酸硝酸酯；（2）、透明质酸硝酸酯‑去氧胆酸聚合物胶束的制备：将10‑15mg的去氧胆酸钠，溶于5‑7ml有机溶剂中，加入60‑80mg 1‑乙基‑（3‑二甲基氨基丙基）碳二亚胺和36‑45mg 羟基琥珀酰亚胺，室温活化反应15min，成去氧胆酸钠溶液；将步骤（1）制备的100‑150mg透明质酸硝酸酯，溶于20‑25ml有机溶剂中，搅拌下将其缓慢加入去氧胆酸钠溶液中，再继续室温搅拌反应24‑48h，透析48h，冷冻干燥，得透明质酸硝酸酯‑去氧胆酸聚合物胶束；所述的有机溶剂为甲酰胺、或N,N‑二甲基甲酰胺、或N,N‑二甲基甲酰胺与甲酰胺的混合溶剂。...
【技术特征摘要】
1. 一种能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯去氧胆酸聚合物胶束的制备方法，其特征在 于，将透明质酸分子结构中的羟基通过浓硝酸硝化法化学修饰为透明质酸硝酸酯，然后将 透明质酸分子中的氨基与去氧胆酸分子中的羧基进行酰胺化反应共价连接，形成二嵌段共 聚物，在水介质中形成胶束，所述透明质酸为分子量等于或低于400 kd，并等于或高于600 道尔顿的低分子量透明质酸，具体由以下步骤实现： (1) 、透明质酸硝酸酯的合成：取15_20ml的质量含量3 96%的浓硝酸置于烧杯中，缓慢 加入150-200mg的透明质酸，控制温度为0°C，反应3-6h，再加入400-500ml冰水进行沉淀， 抽滤得沉淀物，沉淀物用蒸馏水洗涤至pH为6. 8-7. 0,冷冻干燥，得透明质酸硝酸酯； (2) 、透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束的制备：将10-15mg的去氧胆酸钠，溶于 5_7ml有机溶剂中，加入60-80mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺和36-45mg羟 基琥珀酰亚胺，室温活化反应15min，成去氧胆酸钠溶液；将步骤（1)制备的100-150mg透明 质酸硝酸酯，溶于20-25ml有机溶剂中，搅拌下将其缓慢加入去氧胆酸钠溶液中，再继续室 温搅拌反应24-48h，透析48h，冷冻干燥，得透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束； 所述的有机溶剂为甲酰胺、或N，N-二甲基甲酰胺、或N，N-二甲基甲酰胺与甲酰胺的混 合溶剂。2. 根据权利要求1所述的能提供一氧化氮的透明质酸硝酸酯去氧胆酸聚合物胶束的 制备方法，其特征在于，由以下步骤实现： (1) 、透明质酸硝酸酯的合成：取17_18ml的质量含量3 96%的浓硝酸置于烧杯中，缓慢 加入170-180mg的透明质酸，控制温度为0°C，反应3-6h，再加入430-470ml冰水进行沉淀， 抽滤得沉淀物，沉淀物用蒸馏水洗涤至pH为6. 8-7. 0,冷冻干燥，得透明质酸硝酸酯； (2) 、透明质酸硝酸酯-去氧胆酸聚合物胶束的制备：将12-13mg的去氧胆酸钠，溶于 5. 5-6. 5ml有机溶剂中，加入65-75mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和39-42mg 羟基琥珀酰亚胺，室温活化反应15min，成去氧胆酸钠溶液；...
【专利技术属性】
技术研发人员：张慧娟，焦晓静，陈倩倩，冀嫣丹，张振中，张红岭，侯琳，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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