本发明专利技术提供产生包括嵌合抗原受体(CAR)的基因修饰的T细胞的组合物和方法，所述嵌合抗原受体具有抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域，其中T细胞在培养中显示延长的指数扩张，其是不依赖配体的和不依赖添加外源细胞因子或饲养细胞。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供产生包括嵌合抗原受体(CAR)的基因修饰的T细胞的组合物和方法，所述嵌合抗原受体具有抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域，其中T细胞在培养中显示延长的指数扩张，其是不依赖配体的和不依赖添加外源细胞因子或饲养细胞。【专利说明】产生用于癌症治疗的T细胞持续性群体的组合物和方法 相关申请的交叉引用 本申请要求2012年2月22日提交的美国临时申请系列号61/601，890的优先权， 其内容以其全部通过引用被并入本文。 专利技术背景 通过遗传修饰以表达嵌合抗原受体（CARs)的肿瘤特异的Τ淋巴细胞 的产生正作为产生强大抗肿瘤效应的合成生物学的形式而获得动力（Jena et al.,2010, Blood. 116:1035-1044 ；Bonini et al. , 2011, Biol Blood Marrow Transplant 17(1 Suppl):S15-20 ；Restifo et al. , 2012, Nat Rev Immunol 12:269-281 ;Kohn et al., 2011, Mol Ther 19:432-438 ；Savoldo et al.,2011,J Clin Invest 121:1822-1825； Ertl et al·, 2011, Cancer Res 71:3175-3181)。因为特异性由抗体片段给予，所以 CAR T 细胞不是MHC限制的，并因此较基于需要MHC匹配的T细胞受体的方法更实用。 来自用⑶19特异的CAR+T细胞治疗的患者的临床数据表明输入的Τ细胞的强大 体内增殖是肿瘤免疫消融（immunoablation)的关键要求（Porter et al·，2011，N Engl J Med 365:725-733 ;Kalos et al·，2011，Sci Transl Med 3:95ra73)。因此，人们已作 出努力将共刺激分子如CD28、0X40和4-1BB的信号传导内结构域（endodomains)并入 CARs。1998年首次报道了表达能共同递送⑶28共同刺激和T细胞受体/⑶3 ζ链（⑶3 ζ ) 活化信号的嵌合单链（scFv)受体的基因改造 Τ细胞的应用增加了 CAR Τ细胞的功能和 增殖（Krause et al，1998, J Exp Med 188:619-626 ;Finney et al·，1998, Journal of Immunology 161:2791-2797)。许多实验室已证实与0)3ζ或Fee R1相比，CD28信号传导 结构域的并入提高临床前研究中CARs的功能（Geiger et al.，2001，Blood 98:2364-2371; Arakawa et al. , 2002, Anticancer Research 4285-4289 ；Haynes et al. , 2002, J Immunol 169 (10):5780-6；Maher et al.,2002, Nature Biotechnology 20:70-75 ；Finney et al,2004,J Immunol 172:104-113 ；Gyobu et al.,2004, Cancer Res 64:1490-1495； Moeller et al. , 2004, Cancer Gene Ther 11:371-379 ；Teng et al.,2004, Hum Gene Ther 15:699-708 ；Friedmann-Morvinski et al. , 2005, Blood 105:3087-3093 ；Pule et al.,2005, Molecular Therapy 12:933-941 ；ffestwood et al. , 2005, Proc Natl Acad Sci USA 102:19051-19056 ；ffillemsen et al. , 2005, J Immunol 174:7853-7858 ；Kowolik et al,2006, Cancer Res 66:10995-11004 ；Loskog et al.,2006,Leukemia 20:1819-1828； Shibaguchi et al.,2006, Anticancer Res26:4067-4072 ；Brentjens et al. , 2007, Clin Cancer Res 13:5426-5435 ;Teng et al.,2006, Human Gene Therapy 17:1134-1143)。 在患有B细胞恶性肿瘤的患者的研究中，与只赋予⑶3 ζ信号传导结构域的CARs相比， CD28:CD3(CARs 已提高存活（Savoldo et al.，2011，J Clin Invest 121:1822-1825)。 然而，本领域仍然存在更好地改进允许广泛T细胞增殖的CARs构建的需要。本发 明满足本领域中的该需要。
技术实现思路
本专利技术提供编码嵌合抗原受体（CAR)的分离的核酸序列，其中CAR包括抗原结合 结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和CD3 ζ信号传导结构域，并且另外 其中当CAR转导进Τ细胞时，CAR对以下中的至少一个有贡献：转导的Τ细胞的不依赖抗原 的活化增加、转导的T细胞的平均细胞体积（MCV)增加、转导的T细胞的细胞群体扩张增 力口、转导的T细胞的增殖增加、转导的T细胞的子代数目增加、效应器细胞因子分泌增加、粒 酶的表达持续、转导的T细胞群体的体外持久性增加、或转导的T细胞群体的体内持久性增 加。 在一个实施方式中，铰链结构域是IgG4铰链结构域。 在一个实施方式中，抗原结合结构域是抗cMet结合结构域，铰链结构域是IgG4， 跨膜结构域是CD28跨膜结构域，和共刺激信号传导区是CD28信号传导区。在一个实施方 式中，CAR包括SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。 在一个实施方式中，抗原结合结构域是抗间皮蛋白结合结构域，铰链结构域是 IgG4铰链结构域，跨膜结构域是CD28跨膜结构域，和共刺激信号传导区是CD28信号传导 区。在一个实施方式中，CAR包括SEQ ID N0:2的氨基酸序列。 在一个实施方式中，抗原结合结构域是抗CD19结合结构域，铰链结构域是IgG4铰 链结构域，跨膜结构域是CD28跨膜结构域，和共刺激信号传导区是CD28信号传导区。在一 个实施方式中，CAR包括SEQ ID N0:3的氨基酸序列。 在一个实施方式中，抗原结合结构域是抗体或其抗原结合片段。 本专利技术还提供包括编码嵌合抗原受体（CAR)的核酸序列的T细胞，CAR包括抗原 结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和CD3(信号传导结构域，其中 当CAR转导进T细胞时，CAR对以下中的至少一个有贡献：转导的T细胞的不依赖抗原的活 化增加、转导的T细胞的平均细胞体积（MCV)增加、转导的T细胞的细胞群体扩张增加、转 导的T细胞的增殖增加、效应器细胞因子分泌增加、粒酶的表达持续、转本文档来自技高网...
【技术保护点】
编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸序列，其中所述CAR包括抗原结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域，并且进一步其中当所述CAR转导进T细胞时，所述CAR对以下中的至少一个有贡献：所述转导的T细胞的不依赖抗原的活化增加、所述转导的T细胞的平均细胞体积(MCV)增加、所述转导的T细胞的细胞群体扩张增加、所述转导的T细胞的增殖增加、所述转导的T细胞的子代数目增加、效应器细胞因子分泌增加、粒酶的表达持续、所述转导的T细胞群体的体外持久性增加、或所述转导的T细胞群体的体内持久性增加。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·J·弗莱高尔特，Y·赵，J·苏古勒，C·H·琼，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US
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