本发明专利技术提供了一种合成L-谷氨酰基-γ-D-谷氨酸的新方法及其在合成(2R)-((4S)-羧基-4-(4,N-(((6S)-2-(羟基甲基)-4-氧代-3,4,7,8-四氢-3H-环戊二烯并[g]喹唑啉-6-基)-N-(丙-2-炔基)氨基)苯甲酰胺基)丁酰胺基)戊二酸1中的用途。还提供了一种有效的分离和纯化上述酸的三钠盐2的方法，该三钠盐2呈适合长期储存和用于肠胃外剂型的形式。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供了一种合成L-谷氨酰基-γ-D-谷氨酸的新方法及其在合成(2R)-((4S)-羧基-4-(4,N-(((6S)-2-(羟基甲基)-4-氧代-3,4,7,8-四氢-3H-环戊二烯并喹唑啉-6-基)-N-(丙-2-炔基)氨基)苯甲酰胺基)丁酰胺基)戊二酸1中的用途。还提供了一种有效的分离和纯化上述酸的三钠盐2的方法，该三钠盐2呈适合长期储存和用于肠胃外剂型的形式。【专利说明】有效的肽偶联及其在环戊二烯并喹唑啉三钠盐的合成和分离中的用途
本专利技术涉及(R)-2-((S)-4-氨基-4-羧基丁酰胺基)戊二酸(L-谷氨酰基-Y -D-谷氨酸，L-Glu- y -D-Glu)的合成，及其在合成中的用途，尤其是在合成(2，R) - ((4，S)-羧基-4- (4，N- (((6S) -2-(羟基甲基)_4_ 氧代-3，4，7，8-四氢-3H-环戊二烯并喹唑啉-6-基)-N-(丙-2-炔基)氨基)苯甲酰胺基)丁酰胺基)_戊二酸中的用途，以及上述酸的三钠盐的分离和纯化。
技术介绍
为更充分地描述和公开本专利技术以及其所属的
，此处引用了多篇专利和公开。这些参考文献中的每一篇均在此整体引入作为本文内容的参考，如同每一篇单独的引文均具体地、单独地指出引入作为参考。在整个本说明书中，包括其后的权利要求，除非上下文另有所指，“包含”及其变型“包括”和“含有”，应当理解为意味着包括所述的整数或步骤或者整数组或步骤组，但不排除任何其它整数或步骤或者整数组或步骤组。必须指出，如本说明书和所附权利要求使用的，单数形式“一种”、“一个”和“该”包括复数对象，除非上下文明确的另有指定。因此，例如，提及“一种药用载体”包括两种或多种该载体的混合物，等。此处范围经常表示为从“约”某一具体值，和/或至“约”另一具体值。当范围如此表达时，另一实施方案包括从一个具体值和/或至另一具体值。类似地，数值通过使用先行词“约”表示为近似值时，应理解为该具体值形成另一实施方案。当方法或过程在本文表示为步骤的列表或顺序(包括数字编号、字母编号，或项目符号编号的步骤的列表)时，列表中步骤呈现的顺序并不意味着该方法中这些步骤有任何特殊的顺序或时限，除非特殊顺序是要求的或明确说明的。因此，除非另有规定，每种公开方法的步骤可以任何合理的顺序进行，如本领域技术人员所明确的，即任何适合达到该方法所陈述的目的和产物的顺序。而且，除非明确的说明，本方法中不排除存在附加的步骤。该新的胸苷酸合成酶抑制剂(2，R) - ((4，S)-羧基-4- (4，N- (((6S) -2-(羟基甲基)-4_氧代_3，4，7，8-四氢-3!1-环戊二烯并喹唑啉-6-基)-N-(丙-2-炔基)氨基)苯甲酰胺基)丁酰胺基)戊二酸1，作为其三钠盐也称为CB300945、BCG945或0NX-0801)是胸苷酸合成酶很有效的抑制剂，对该酶的IC5(I为3nM。不像大多数胸苷酸合成酶抑制剂如甲氨蝶(呤和培美曲塞)，2的活化或细胞滞留不需要聚谷氨酰化(polyglutamoylation),而且它并不是聚谷氨酰化合成酶的底物。此外,2不是普遍表达的Ki>250 μ Μ的还原性叶酸载体蛋白(reduced folatecarrier protein, RFCP)的底物，并且不能轻易地穿过正常的细胞膜。然而，它以很高的亚纳摩尔级亲和力(ΚΑ5ηΜ)与叶酸受体a (FRa)结合，并且可通过该受体以适当的速率转运至细胞中，即使2的血清水平非常低。一旦进入细胞，2抑制胸苷酸合成酶并且随着其慢慢地降解和从细胞中排出，它对胸苷酸合成酶产生长效的抑制作用。这造成DNA加工错误，而启动了修复周期，而由于缺乏三磷酸胸苷掺入到DNA中，该修复最终是无效的。这导致了凋亡DNA损伤反应和细胞死亡。这是胸苷酸合成酶抑制剂通常的作用方式，临床经验表明胸苷酸合成酶抑制剂对人类肿瘤有强烈的细胞毒作用，但是由于相当广谱的毒性，其使用受到了限制；靶组织，特别是骨髓，受到该药物细胞毒性的严重影响。目前这代胸苷酸合成酶抑制剂是普遍表达的RFCP的良好底物，可很好的分布到大多数组织，而2仅仅有效地分布到表达或优选过表达FRa的组织中。相对地很少有组织内源性表达FRa，即使在适中水平。大多数组织在细胞远极面以极化方式表达FRa，意味着细胞面向循环内皮一面没有运载体。这样的结果是，即使在这些组织中，之的穿透也往往是非常无效的。这意味着血浆中高循环水平的2导致相当低的全身毒性。如果对于肿瘤同样如此，也可以预期其产生低抗肿瘤疗效。然而,有些种类的肿瘤组织倾向于过表达FRa。作为肿瘤细胞，它们已经失去极性并在近极面和远极面均表达FRa。因此，这些肿瘤组织有着异常的倾向，能够在细胞中聚集非常大量的、细胞毒性的2的剂量，而血浆药物水平足够低，只有非常小的毒性作用。这导致在过表达肿瘤类型中，之的治疗指数提闻。有些肿瘤类型过表达FR α，最显著的是卵巢癌，其中90%最常见的肿瘤类型，粘液型卵巢癌，过表达FRa。因此4是一种非常有吸引力的化疗药物，用于治疗FRa过表达的癌症，特别是卵巢癌，然而并不限于那一种肿瘤类型，其中子宫癌、间皮瘤和肾癌均有高百分比的FRa过表达。化合物I和I以及若干相似同源物，在W02003/020748中被公开，尽管是作为在6位的非对映异构体1:1的混合物。【权利要求】1.一种合成L-Glu-Y-D-Glu 二妝的方法,其包括以下步骤: a)活化N-α O-双保护的L-Glu衍生物的Y -羧酸； b)甲硅烷基化D-谷氨酸；和 c)将步骤a)产生的活化的羧酸衍生物与步骤b)的甲硅烷基化产物反应以生成被保护的 L-Glu-Y-D-Glu 物质。2.根据权利要求1的方法，其中在步骤a)中，活化包括将N-α O-双保护的L-Glu衍生物转化成活化的衍生物，例如混合酸酐。3.根据权利要求2的方法，其中活化包括用氯甲酸烷基酯和叔胺碱处理N-αO-双保护的L-Glu衍生物。4.根据权利要求3的方法，其中氯甲酸酯是氯甲酸异丁酯。5.根据权利要求2至4的方法，其中缓慢加入N-α O-双保护的L-Glu衍生物至氯甲酸烷基酯和叔胺碱的低温溶液中。6.根据权利要求5的方法，其中氯甲酸烷基酯和叔胺碱的溶液的温度为-10°C至-50°C，优选约-30°C。7.根据权利要求3至6 任一项的方法，其中叔胺碱为N-甲基吗啉。8.根据权利要求1至7任一项的方法，其中N-α O-双保护的L-Glu衍生物为N-苄氧基擬基_L_谷氨酸-α -节酯。9.根据上述权利要求任一项的方法，其中在步骤b)中，甲硅烷基化包括用甲硅烷基化剂处理D-谷氨酸。10.根据权利要求9的方法，其中甲硅烷基化剂为O，N-二-(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA)。11.根据上述权利要求任一项的方法，其中在步骤b)中，D-谷氨酸被若干当量的甲硅烷基化剂溶解；和步骤c)中，将该溶液加入来自步骤a)的羧酸衍生物的冷溶液，以形成被保护的L-Glu- Y -D-Glu物质的甲硅烷基酯化溶液。12.根据权利要求11的方法，其中Ν-αO-双保护的L-Glu衍生物为N-苄氧基羰基-L-谷氨酸-α -苄酯且产物为2R- (N- (S) _4_ (苄氧基羰基)_4_苄氧羰基本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种合成L‑Glu‑γ‑D‑Glu二肽的方法，其包括以下步骤：a)活化N‑αO‑双保护的L‑Glu衍生物的γ‑羧酸；b)甲硅烷基化D‑谷氨酸；和c)将步骤a)产生的活化的羧酸衍生物与步骤b)的甲硅烷基化产物反应以生成被保护的L‑Glu‑γ‑D‑Glu物质。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：JA克申，AJ布里奇斯，MD乔巴尔，SM达尔齐尔，TE杰克斯，AS汤普森，JR泽勒，
申请(专利权)人：奥尼克斯医药品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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