与样品相关的多核苷酸的鉴定制造技术

一种包含多核苷酸的组合物，其中所述多核苷酸包含第一区域和第二区域，其中所述第一区域包含表达的B细胞可变免疫球蛋白区域，所述第二区域包含至少一个识别区域，且其中所述第一区域与所述第二区域偶联。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本文公开了用于测序、分析和利用样品如单一样品的组合物和方法。本文还公开了用于将来自样品的两个或更多个序列匹配在一起的组合物和方法。本文还公开了用于表达和筛选目标分子的组合物和方法。【专利说明】与样品相关的多核苷酸的鉴定相关申请的交叉引用本申请与2011年4月28日提交的美国临时专利申请61/517，976号、2011年8月24日提交的美国临时专利申请61/575，652号、2012年2月16日提交的美国临时专利申请61/599,870号和2012年3月8日提交的美国临时专利申请61/608，571号有关，其公开内容为所有目的通过引用并入本文。有关联邦赞助研究或开发的声明本专利技术是利用由美国国立卫生研究院国家心肺和血液研究中心给予的N01-HV-28183NHLBI蛋白质组学中心和N01-HV-00242蛋白质组学中心的政府支持而完成的。政府在本专利技术中具有某些权利。序列表本申请包含“冗长”的序列表，其通过⑶-R提交以代替打印的纸件，且通过引用全部并入本文中。刻录于2012年4月25目的所述CD-R分别标记为“CRF”、“Copyl-SEQUENCELISTING PART，，、“Copy2-SEQUENCE LISTING PART” 和 “Copy3_SEQUENCE LISTING PART”，且各包含名称为20786PCT_CRF_Sequencelising.EXE的单一自解压文件(138，571，776字节)，其随之包含名称为20786PCT_CRF_Sequencelisting.TXT的一个未压缩的ASCII文本文件(795，566，080 字节)。
技术介绍
从人类来源产生治疗性的单克隆抗体是生物学和技术方面的挑战。迄今为止，已经描述了几种方法，包括产生人杂交瘤、使用表达人免疫球蛋白的转基因小鼠和使用人免疫球蛋白噬菌体展示文库。人杂交瘤可能难以产生，因为人骨髓瘤融合伴体与其小鼠对应物不同，它在产生杂交瘤方面是无效的。人杂交瘤还具有在持续的培养后自发丧失所表达的抗体基因的倾向。埃-巴二氏病毒(EBV)转化使B细胞永生化，但所有EBV-转化的B细胞中仅极少的部分是亲和力成熟的或识别靶抗原。杂交瘤的产生通常包括大量的筛选以获得治疗性单克隆抗体。当前被美国FDA批准的治疗性单克隆抗体中没有一种是通过人杂交瘤的生成或B细胞的EBV-转化而产生的，这也证明了这些方法所面临的技术难题和挑战。人抗体序列的噬菌体展示文库代表了用于产生治疗性人单克隆抗体的另一种方法。这一方法利用重组DNA技术以随机地共同表达人抗体重链和轻链序列以使得能够筛选结合靶抗原的组合。但是，这一策略没有产生亲和力成熟的抗体，且以这种方式产生的抗体经常以低亲和力和亲抗原性与抗原结合。然后需要后续的突变和选择/筛选步骤以产生高亲和力的抗体。 产生治疗性人单克隆抗体的另一种方式是通过产生或利用具有人抗体谱(antibody repertoire)的转基因小鼠。当免疫时，这种小鼠产生祀向于免疫的抗原的抗体，且随后可以产生杂交瘤以用于产生治疗性人单克隆抗体。这种转基因小鼠是专有的且通常不可用于产生人抗体。因此本专利技术认识到对于例如可产生大量的亲和力成熟的人抗体的组合物、试剂盒和方法的需要，从而避免了繁重和耗时的抗体人源化的需要或进行大量筛选的需要。本文描述的组合物、试剂盒和方法满足了这一需要。另外，本文描述的组合物、方便和方法可广泛地应用于人抗体领域之外且可以用于多种不同的应用中，包括例如，将源自于单一样品和存在于多核苷酸文库中的两个或更多个目标多核苷酸匹配在一起。专利技术概述本文公开了包含多核苷酸的组合物，其中所述多核苷酸包含第一区域和第二区域，其中所述第一区域包含表达的B细胞可变免疫球蛋白区域和所述第二区域包含至少一个识别区域，且其中所述第一区域与所述第二区域偶联。在一些方面，所述可变免疫球蛋白区域包含从直径大于或等于8 U m的活化人B细胞分离的1gG免疫球蛋白核苷酸序列的VDJ区域，且其中所述免疫球蛋白区域的5’端与所述识别区域的3’端偶联。在一些方面，所述组合物包括在克隆家族(clonal family)中。在一些方面,所述免疫球蛋白区域从B细胞分离,且其中所述B细胞是活化B细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离，且其中所述B细胞是浆母细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离，且其中所述B细胞是单一 B细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离,且其中所述B细胞是单一活化B细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离，且其中所述B细胞是位于受试者的血液中的单一活化B细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离，且其中所述B细胞是人活化B细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离，且其中所述B细胞是记忆B细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离，且其中所述B细胞是浆细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从B细胞分离，且其中所述B细胞是抗原特异性B细胞。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从哺乳动物B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从人B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从小鼠B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从来自于患有关注的疾病或病症的受试者的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从来自于正从关注的疾病或病症恢复或已从关注的疾病或病症恢复的受试者的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从来自于施用至少一种目标抗原的受试者的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从来自于施用至少一种目标抗原和佐剂的受试者的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从位于受试者的血液中的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从位于受试者的骨髓中的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从位于受试者的脾中的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从位于受试者的至少一个淋巴结中的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从位于受试者的淋巴组织中的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从位于受试者的肠中的B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从直径为约8-20 的活化B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从直径为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或大于20 iim的活化B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从面积为约 60、70、80、90、100、120、130、140、150、200、250、300、350 或大于 350 u m2 的活化 B 细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从体积为约250、268、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000或大于4000 ii m3的活化B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从直径尺寸比对照静息B细胞的中值直径大10%或更大的活化B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从直径尺寸比对照静息B细胞的中值直径大15%或更大的活化B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从直径尺寸比对照静息B细胞的中值直径大20%或更大的活化B细胞分离。在一些方面，所述免疫球蛋白区域从能够分泌免疫球蛋白的活化B细胞分离。在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含多核苷酸的组合物，其中所述多核苷酸包含第一区域和第二区域，其中所述第一区域包含表达的B细胞可变免疫球蛋白区域，所述第二区域包含至少一个识别区域，且其中所述第一区域与所述第二区域偶联。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·H·罗宾森，陈衍璁，J·索科洛芙，
申请(专利权)人：小利兰斯坦福大学托管委员会，美国退伍军人事务部，
类型：
国别省市：