气相色谱-质谱检测细胞内有机酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种气相色谱-质谱检测细胞内有机酸的方法，属于生物化学检验测定技术领域。本发明专利技术检测方法步骤包括：（1）取发酵液，高速离心，分别收集细胞和细胞外液；（2）细胞内代谢物样品制备，将收集的菌体用生理盐水清洗，冷甲醇溶解后超声破碎，低温萃取，离心收集萃取上清液，加入内标物，低温真空烘干；（3）样品衍生，加入糖衍生剂、氨基酸衍生剂；（4）气相色谱-质谱分析和数据采集。本发明专利技术具有样品处理简单，操作简便，检测有机酸时间短，灵敏度高，检测结果重复性高，可实现多个样品制备等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化学检验测定
，特别是涉及一种气相色谱-质谱检测细胞内中有机酸的方法。
技术介绍
在利用气相色谱-质谱检测有机酸代谢物方面，目前已有相关技术报道，如专利201210046953.2，公布了一种气相色谱一质谱检测尿有机酸的方法，包括如下步骤:(I)对待检尿液样本完成尿酶处理；(2)加入内标品，采用冷冻乙醇进行沉淀蛋白的处理，将样本吹干；(3)对上述样本进行甲基硅烷化衍生处理；(4)采用上述1-3的步骤处理标准有机酸，得到标准有机酸样本；(5)采用气相色谱一质谱联用仪对标准有机酸样本和待检尿液样本进行检测；(6)以标准有机酸样本的检测结果作为参比曲线，用常规算法对待检尿液样本的有机酸进行定量。该专利专利技术主要应用领域为尿样检测，且该检测方法仅局限于有机酸代谢物的检测。对于微生物胞内、胞外代谢物的检测研究，可以揭示微生物在发酵条件下的代谢规律，尤其是发酵条件对于微生物目标产物的影响规律。掌握微生物的代谢规律可以不仅有利的促进目标产物的产量提升，而且可确定菌体内的代谢通量分布，进而利用基因工程手段实现菌体内代谢途径的优化与重构，实现目标产物高效生物合成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种气相色谱‑质谱检测细胞内有机酸的方法，其特征在于，检测方法步骤包括：（1）取发酵液，高速离心，分别收集菌体和上清液Ⅰ；（2）细胞内代谢物样品制备：取步骤1）得到的菌体，用生理盐水清洗2~3次，冷甲醇溶解后超声破碎至细胞裂解，得到裂解液，低温萃取裂解液，离心收集50~200ul萃取后裂解上清液Ⅱ，加入内标物核糖醇溶液，裂解上清液Ⅱ体积与内标物核糖醇重量比例为50~200ul:20μg，室温真空烘干，得到细胞内代谢物样品Ⅰ；（3）样品衍生：在步骤2）得到的样品Ⅰ中，分别加入50~150ul糖衍生剂，恒温放置3~6h，再分别加入50~150ul氨基酸衍生剂，恒温放置过夜，衍生完毕，离心衍生后的样...

【技术特征摘要】
1.一种气相色谱-质谱检测细胞内有机酸的方法，其特征在于，检测方法步骤包括: (1)取发酵液，高速离心，分别收集菌体和上清液I; (2)细胞内代谢物样品制备:取步骤I)得到的菌体，用生理盐水清洗2~3次，冷甲醇溶解后超声破碎至细胞裂解，得到裂解液，低温萃取裂解液，离心收集5(T200ul萃取后裂解上清液II，加入内标物核糖醇溶液，裂解上清液II体积与内标物核糖醇重量比例为5(T200ul: 20 μ g，室温真空烘干，得到细胞内代谢物样品I ; (3)样品衍生:在步骤2)得到的样品I中，分别加入50-l50ul糖衍生剂，恒温放置3-6h，再分别加入5(Tl50ul氨基酸衍生剂，恒温放置过夜，衍生完毕，离心衍生后的样品I，收集上清得到待测胞内样品I ; (4)利用气相色谱-质谱对步骤3)得到的待测胞内样品I，进行分析和数据采集。2.根据权利要求1所述的一种气相色谱-质谱检测细胞内有机酸的方法，其特征在于，所述菌体其取样量为用冷甲醇溶解后生物量干重达0.2-1.0g/ml ;所述的冷甲醇为经过冷浴槽预冷至-40°C ;所述低温萃取为-40°C至-50°C下萃取2~7h。3.根据权利要求1或2所述的一种气相色谱-质谱检测细胞内有机酸的方法，其特征在于，所述糖衍生剂为0.1-0.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈东，梁远雄，
申请(专利权)人：柳州联海科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45