在单路或多路测定法中用于检测人细小病毒核酸和用于检测甲型肝炎病毒核酸的组合物和方法技术

本发明专利技术公开了对人细小病毒基因组DNA特异性的核酸寡聚物。还公开了一种用于在生物标本中扩增和检测人细小病毒基因型1、2和3的核酸的测定法。还公开了用于在人生物标本中扩增和检测人细小病毒基因型1、2和3的基因组DNA的存在的组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在单路或多路测定法中用于检测人细小病毒核酸和用于检测甲型肝炎病毒核酸的组合物和方法相关专利申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§ 119要求2011年7月15日提交的美国专利申请N0.61/508，597的优先权，将该专利申请的全部内容以引用的方式并入本文。
本专利技术涉及用于检测人传染性病原体的诊断方法和组合物，并且具体地讲涉及用于体外检测人细小病毒基因型1、2和3和/或甲型肝炎病毒的核酸的方法和组合物。
技术介绍
多种治疗性蛋白质，包括凝血因子、免疫球蛋白(IVIG)以及白蛋白，是由如基立福(Grifols)、百特(Baxter)以及CSL之类的公司从人血浆中纯化而来的。检验细小病毒B19和HAV是重要的，因为它们是无包膜病毒，这使得这些病毒在纯化(分级分离)过程期间抗灭活。允许相对低水平的B19存在于血浆级分中(现行规定要求在可含有4，000至5，000个单独的血浆单位的制造池中低于10，000IU)。与其冒险集合成一个大型制造池而然后发现其污染有B19，通常用血浆分级分离器来筛选较小的池来鉴定含有高滴度B19的单独的血浆单位。目前不存在关于HAV的规 定，但一般也执行检验，因为这样做已经变成一个行业标准。人细小病毒(红细胞病毒属(Erythrovirus))是一种血源性无包膜病毒，其具有约5.5kb的单链DNA(ssDNA)基因组(Shade等人，1986，J.Virol.(《病毒学杂志》)58(3):921-936 ;Brown 等人，1997，Ann.Rev.Med.(《医学年评》)48:59-67)。单独的病毒粒子含有一个拷贝的基因组的正链或负链，以大致相等数目表现。该ssDNA基因组具有形成约350nt的5’和3’发夹的反向末端重复序列，所述反向末端重复序列为病毒复制所必需。该基因组在正链上包括两个开放阅读框，其编码结构蛋白(VPl和VP2)和非结构蛋白(NSl)。曾经认为人细小病毒是高度保守的，遗传多样性小于2%。然而，近来已发现人红细胞病毒属分离株(最初称为V9)与B19相比在基因组序列方面具有大于11%的趋异性，其中最惊人的DNA不相似性>20%，是在p6启动子区域内观察到的。该V9分离株也被测定具有大于11%的临床存在率。现在人红细胞病毒属群体被分成三个不同的病毒基因型:基因型1(B19)、基因型2 (A6样和LaLi样)以及基因型3 (V9样)。(Servant等人，2002，J.Virol.(《病毒学杂志》)76(18):9124-34 ;Ekman等人，2007，J.Virol.(《病毒学杂志》)81 (13):6927-35)。Servant等人将基因型I称为对应于细小病毒B19的病毒并将基因型2和3称为对应于细小病毒V9相关病毒的病毒。Ekman等人将基因型1_3称为都对应于细小病毒B19。本文为方便起见,将基因型1、2和3称为细小病毒基因型1、2和3或人细小病毒基因型1、2和3。不能精确检测所有细小病毒基因型的核酸检测测定法会导致许多血浆池仍污染有人细小病毒。因此，需要一种可检测人细小病毒基因型1、2和3的核酸检验。人细小病毒感染可通过呼吸道传播或通过受感染的血液或血液制品而发生。受感染的个体可能不表现出症状，或具有传染性红斑(erythema infectiosum)症状,该症状包括轻度流感样症状、皮疹(“第五病”)、短暂性关节炎样关节疼痛(关节病)、溶血性贫血患者中的再生障碍性危象、持续性细小病毒感染以及约10%的由于胎儿死亡而造成的早期流产。因此，不能检测汇集的血浆样本中的细小病毒或不能诊断感染具有严重的后果。此外，需要检测测定法提供检测灵敏性，该灵敏性使得能检测如可能在感染早期或在稀释或汇集的样本中出现的低滴度的病毒。可检测适当水平的污染的细小病毒核酸检测测定法可有助于在使用前从血液供给处移除受感染的捐献单位或受污染批次的汇集血浆。许多免疫诊断方法可检测个体的血清或血浆中存在的抗细小病毒抗体(IgM或IgG)(例如参见 Wolf 等人的 PCT N0.W096/09391 和 Hedman 等人的 PCT N0.W096/27799)。这些方法在检测近来或当前的感染时具有局限性，因为它们依赖于检测身体对传染性病原体的响应。在感染后病毒血症的快速增加导致个体的血液中存在高水平的细小病毒而无相应的可检测水平的抗细小病毒抗体(参见例如Brentano等人的美国专利N0.7，094, 541的实例4)。因此，基于免疫学的检测测定法容易出现假阴性结果。此外，病毒血症经常被迅速清除，然而人可能会在不存在这些感染性粒子的情况下仍保持抗体阳性，因此产生假阳性结果。多达90%的成年人对细小病毒呈血清阳性，这使得精确地免疫学检测近来或当前的感染存在困难。其他类似的测定法通过检测结合于纯化的细胞受体的病毒或空病毒衣壳来检测细小病毒的存在(Young等人的美国专利5，449，608)，这些基于免疫的测定法遭遇类似的问题。DNA杂交和扩增方法也已经用于检测人细小病毒，但这些检验一般是只针对基因型I的检测。然而，美国和欧洲管理机构已经发布标准，规定用于制造抗D免疫球蛋白和其他血浆衍生物的血浆池可含有不超过10，000IU/ml (在欧洲为IOIU/微升)的任何人细小病毒。如上文所论述的，治疗性血浆池和诊断检验同样需要可靠地鉴定人细小病毒类型1、2和3。因此，本领域中需要可用于人细小病毒类型1、2和3的体外核酸检测的组合物、试剂盒以及方法。甲型肝炎病毒(HAV)为一种形式的肝炎的病原体，该种肝炎可在不到两个月内产生包括发热、疲乏、恶心、腹痛、腹泻、食欲不振以及黄疸在内的症状。在HAV感染者中，约10%至15%在感染后六至九个月内具有长期或复发的症状。在有症状感染和无症状感染之后，基于个体内产生抗HAV免疫球蛋白G(IgG)而对HAV具免疫性。尽管自20世纪90年代末以来在已广泛使用HAV疫苗接种的世界上部分地区的HAV感染发生率已急剧降低，但在存在不良卫生状况(即使暂时地，例如在地震后)的非免疫群体中可能出现HAV感染的流行病(每100,000个人口 >700例，并且对于生活在高甲型肝炎比率的地区的儿童来说,该比率增加至每100，000个人口 >20例)。传染也可能由接触受HAV污染的血清或血液制品而产生。甚至在美国，每年有约100个人死于因甲型肝炎引起的急性肝功能衰竭(死亡率为约0.015%)。即使在非致命性甲型肝炎病例中，与HAV感染相关的费用也相当大，包括由患者住院、门诊以及误工时所产生的费用。 HAV为含有具有约7.5kb的有义单链RNA基因组的27_nm RNA病毒(细小核糖核酸病毒)。该病毒在急性感染期内于肝脏中复制，于胆汁中排泄并且在于粪便中排出(例如，高达每毫升108个病毒)。在症状出现前的潜伏期通常为两至六周。已在全世界范围内发现单一血清型的HAV。通过症状或其他临床特征(例如，血清转氨酶水平升高)不能将甲型肝炎的诊断与其他类型的病毒性肝炎相区分。通常，通过提供存在抗HAV免疫球蛋白(Ig)的阳性结果的血清学检验来证实甲型肝炎诊断。抗HAV IgM—般在症状发作前的五至十天存在并且六个月后在大部分患者中不可检测，而抗HAV I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测样本中人细小病毒靶核酸和甲型肝炎病毒(HAV)靶核酸中的至少一者的寡聚物组合，所述寡聚物组合包含：(I)用于扩增人细小病毒核酸靶区域的第一扩增寡聚物和第二扩增寡聚物，其中(a)所述第一细小病毒扩增寡聚物包含第一靶标杂交序列，所述第一靶标杂交序列为SEQ ID NO:181的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:179或SEQ ID NO:180的序列；以及(b)所述第二细小病毒扩增寡聚物包含选自如下的第二靶标杂交序列：(i)为SEQ ID NO:189的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO:188的序列的序列；和(ii)为SEQ ID NO:193的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO:192的序列的序列；和/或(II)用于扩增HAV核酸靶区域的第一扩增寡聚物和第二扩增寡聚物，其中(a)所述第一HAV扩增寡聚物包含第一靶标杂交序列，所述第一靶标杂交序列为SEQ ID NO:174的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO:173的序列；以及(b)所述第二HAV扩增寡聚物包含第二靶标杂交序列，所述第二靶标杂交序列为SEQ ID NO:177的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO:175的序列。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.15 US 61/508,5971.一种用于检测样本中人细小病毒靶核酸和甲型肝炎病毒(HAV)靶核酸中的至少一者的寡聚物组合，所述寡聚物组合包含: (I)用于扩增人细小病毒核酸靶区域的第一扩增寡聚物和第二扩增寡聚物，其中 (a)所述第一细小病毒扩增寡聚物包含第一靶标杂交序列，所述第一靶标杂交序列为SEQ ID NO: 181的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 179 或 SEQ ID NO: 180 的序列；以及 (b)所述第二细小病毒扩增寡聚物包含选自如下的第二靶标杂交序列: (i)为SEQID NO: 189的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQID NO: 188的序列的序列；和 (ii)为SEQID NO: 193的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQID NO: 192的序列的序列； 和/或 (II)用于扩增HAV核酸靶区域的第一扩增寡聚物和第二扩增寡聚物，其中 (a)所述第一HAV扩增寡聚物包含第一靶标杂交序列，所述第一靶标杂交序列为SEQID NO: 174的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 173的序列；以及 (b)所述第二HAV扩增 寡聚物包含第二靶标杂交序列，所述第二靶标杂交序列为SEQID NO: 177的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 175的序列。2.根据权利要求1所述的寡聚物组合，其中所述寡聚物组合包含(I)的所述第一细小病毒扩增寡聚物和所述第二细小病毒扩增寡聚物。3.根据权利要求2所述的寡聚物组合，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 182的序列中并且至少包括SEQ ID NO: 179的序列。4.根据权利要求3所述的寡聚物组合，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 183或SEQ ID NO: 117的序列。5.根据权利要求4所述的寡聚物组合，其中(I)(a)的所述第一靶标杂交序列具有选自SEQ ID NO:75-80 的序列。6.根据权利要求2所述的寡聚物组合，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID N0:184的序列中。7.根据权利要求6所述的寡聚物组合，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列选自 SEQ ID NO:81-84。8.根据权利要求2所述的寡聚物组合，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 185的序列中并且至少包括SEQ ID NO: 180的序列。9.根据权利要求8所述的寡聚物组合，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列选自 SEQ ID NO:82-84。10.根据权利要求2至9中任一项所述的寡聚物组合，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 187的序列中并且至少包括SEQ ID NO: 188的序列。11.根据权利要求10所述的寡聚物组合，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 186的序列。12.根据权利要求11所述的寡聚物组合，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列选自 SEQ ID NO: 108-113。13.根据权利要求2至9中任一项所述的寡聚物组合，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 191的序列中。14.根据权利要求13所述的寡聚物组合，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 190的序列。15.根据权利要求14所述的寡聚物组合，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列选自 SEQ ID NO: 118-121。16.根据权利要求2至15中任一项所述的寡聚物组合，其中所述第二细小病毒扩增寡聚物为还包含位于所述祀标杂交序列的5’的启动子序列的启动子引物或启动子提供者。17.根据权利要求16所述的寡聚物组合，其中所述启动子序列为T7启动子序列。18.根据权利要求17所述的寡聚物组合，其中所述17启动子序列具有SEQID NO: 196中示出的序列。19.根据权利要求18所述的寡聚物组合，其中所述第二细小病毒扩增寡聚物具有选自SEQ ID NO:88-93 和 98-101 的序列。20.根据权利要求2至19中任一项所述的寡聚物组合，还包含 (III)用于扩增所述 人细小病毒核酸靶区域的第三扩增寡聚物和第四扩增寡聚物，其中 (a)所述第三细小病毒扩增寡聚物包含第三靶标杂交序列，所述第三靶标杂交序列具有SEQ ID NO: 181的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ IDNO: 117、SEQ ID NO: 179 或 SEQ ID NO: 180 的序列；以及 (b)所述第四细小病毒扩增寡聚物包含选自如下的第四靶标杂交序列: (i)为SEQID NO: 189的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQID NO: 188的序列的序列；和 (ii)为SEQID NO: 193的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQID NO: 192的序列的序列； 其中(III) (a)的所述第三靶标杂交序列不同于(I) (a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列；并且 其中(III) (b)的所述第四靶标杂交序列不同于(I) (b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列。21.根据权利要求20所述的寡聚物组合，其中所述第三细小病毒扩增寡聚物为如权利要求3至9中任一项关于所述第一细小病毒扩增寡聚物所述的寡聚物。22.根据权利要求20或21所述的寡聚物组合，其中所述第四细小病毒扩增寡聚物为如权利要求10至19中任一项关于所述第二细小病毒扩增寡聚物所述的寡聚物。23.根据权利要求2至22中任一项所述的寡聚物组合，还包含至少一种细小病毒特异性捕集探针寡聚物，所述细小病毒特异性捕集探针寡聚物包含共价连接至与固定化探针结合的序列或部分的靶标杂交序列，其中所述靶标杂交序列选自SEQ ID NO: 132-135。24.根据权利要求23所述的寡聚物组合，其中所述细小病毒特异性捕集探针寡聚物具有选自SEQ ID NO: 128-131的序列。25.根据权利要求2至24中任一项所述的寡聚物组合，还包含置换体寡聚物，所述置换体寡聚物包含被构造用于与所述第一细小病毒扩增寡聚物或所述第二细小病毒扩增寡聚物上游的所述细小病毒靶核酸杂交的靶标杂交序列。26.根据权利要求2至25中任一项所述的寡聚物组合，还包含至少一种细小病毒特异性检测探针寡聚物，所述细小病毒特异性检测探针寡聚物包含长度为约14至约40个核苷酸并且被构造用于与SEQ ID NO: 199内所含的从大约核苷酸位置2921至大约核苷酸位置2966、或从大约核苷酸位置2921至大约核苷酸位置3067的祀序列特异性杂交的祀标杂交序列。27.根据权利要求26所述的寡聚物组合，其中所述细小病毒特异性检测探针靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 194或195的序列中。28.根据权利要求27所述的寡聚物组合，其中所述细小病毒特异性检测探针靶标杂交序列选自 SEQ ID NO: 137-169。29.根据权利要求1至22中任一项所述的寡聚物组合，其中所述寡聚物组合包含(II)的所述第一 HAV扩增寡聚物和所述第二 HAV扩增寡聚物。30.根据权利要求29所述的寡聚物组合，其中(II)(a)的所述第一靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 172的序列中。31.根据权利要求30所述的寡聚物组合，其中(II)(a)的所述第一靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 170 的序列。32.根据权利要求31所述的寡聚物组合，其中(II)(a)的所述第一 HAV靶标杂交序列选自 SEQ ID NO: 1-6 和 11。33.根据权利要求30所述的寡聚物组合，其中(II)(a)的所述第一 HAV靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 171的序列。34.根据权利要求33所述的寡聚物组合，其中(II)(a)的所述第一 HAV靶标杂交序列选自 SEQ ID NO: 1-6。35.根据权利要求29至34中任一项所述的寡聚物组合，其中(II)(b)的所述第二 HAV靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 176的序列中。36.根据权利要求35所述的寡聚物组合，其中(II)(b)的所述第二 HAV靶标杂交序列选自 SEQ ID NO:29-38 和 45。37.根据权利要求29至36中任一项所述的寡聚物组合，其中所述第二HAV扩增寡聚物为还包含位于所述祀标杂交序列的5’的启动子序列的启动子引物或启动子提供者。38.根据权利要求37所述的寡聚物组合，其中所述启动子序列为T7启动子序列。39.根据权利要求38所述的寡聚物组合，其中所述17启动子序列具有SEQID NO: 196中示出的序列。40.根据权利要求39所述的寡聚物组合，其中所述第二HAV扩增寡聚物具有选自SEQID NO: 12-21 和 28 的序列。41.根据权利要求29至40中任一项所述的寡聚物组合，还包含 (IV)用于扩增HAV核酸靶区域的第三扩增寡聚物和第四扩增寡聚物，其中 (a)所述第三HAV扩增寡聚物包含第三靶标杂交序列，所述第三靶标杂交序列为SEQID NO: 174的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 173的序列；以及 (b)所述第四HAV扩增寡聚物包含第四靶标杂交序列，所述第四靶标杂交序列为SEQID NO: 177的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 175的序列； 其中(IV) (a)的所述第三靶标杂交序列不同于(II) (a)的所述第一 HAV靶标杂交序列；并且 其中(IV) (b)的所述第四靶标杂交序列不同于(II) (b)的所述第二 HAV靶标杂交序列。42.根据权利要求41所述的寡聚物组合，其中所述第三HAV扩增寡聚物为如权利要求30至34中任一项关于所述第一 HAV扩增寡聚物所述的寡聚物。43.根据权利要求41或42所述的寡聚物组合，其中所述第四HAV扩增寡聚物为如权利要求35至40中关于所述第二 HAV扩增寡聚物所述的寡聚物。44.根据权利要求29至43中任一项所述的寡聚物组合，还包含至少一种HAV特异性捕集探针寡聚物，所述HAV特异性捕集探针寡聚物包含共价连接至与固定化探针结合的序列或部分的靶标杂交序列，其中所述靶标杂交序列选自SEQ ID NO:52-57。45.根据权利要求44所述的寡聚物组合，其中所述HAV特异性捕集探针寡聚物具有选自 SEQ ID NO:46-51 的序列。46.根据权利要求29至45中任一项所述的寡聚物组合，还包含置换体寡聚物，所述置换体寡聚物包含被构造用于与所述第一 HAV扩增寡聚物或所述第二 HAV扩增寡聚物上游的所述HAV靶核酸杂交的靶标杂交序列。47.根据权利要求29至46中任一项所述的寡聚物组合，还包含至少一种HAV特异性检测探针寡聚物，所述HAV特异性检测探针寡聚物包含长度为约14至约40个核苷酸并且被构造用于与SEQ ID NO: 198内所含的从大约核苷酸位置5965至大约核苷酸位置6028的靶序列特异性杂交的靶标杂交序列。48.根据权利要求47所述的寡聚物组合，其中所述HAV特异性检测探针靶标杂交序列包含于SEQ ID NO:178的序列中。49.根据权利要求48所述的寡聚物组合，其中所述HAV特异性检测探针靶标杂交序列选自 SEQ ID NO:58-74。50.一种试剂盒，包含根据权利要求1至49中任一项所述的寡聚物组合。51.一种反应混合物,包含根据权利要求1至49中任一项所述的寡聚物组合。52.一种用于检测样本中人细小病毒靶核酸和甲型肝炎病毒(HAV)靶核酸中的至少一者的方法，所述方法包括: (A)提供样本，其中所述样本疑似含有人细小病毒和HAV中的至少一者； (B)使所述样本与用于扩增人细小病毒核酸靶区域和HAV核酸靶区域中的至少一者的寡聚物组合接触，所述寡聚物组合包含: (I)对于所述细小病毒靶区域，(a)第一细小病毒扩增寡聚 物，其包含第一靶标杂交序列，所述第一靶标杂交序列为SEQ ID NO:181的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 179或SEQID NO: 180的序列；和(b)第二细小病毒扩增寡聚物包含选自如下的第二靶标杂交序列:(i)具有SEQ IDNO: 189的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ IDNO: 188的序列的序列；和(ii)具有SEQ ID NO: 193的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 192的序列的序列； 和/或 (II)对于所述HAV靶区域，(a)第一 HAV扩增寡聚物，其包含第一靶标杂交序列，所述第一靶标杂交序列为SEQ ID NO: 174的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 173的序列；和(b)第二 HAV扩增寡聚物包含第二靶标杂交序列，所述第二靶标杂交序列为SEQ ID NO: 177的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 175 的序列； (C)执行体外核酸扩增反应，其中所述样本中存在的任何细小病毒和/或HAV靶核酸被用作产生细小病毒和/或HAV扩增产物的模板；以及 (D)检测所述细小病毒和/或所述HAV扩增产物的存在或不存在， 从而指示所述样本中细小病毒和/或HAV的存在或不存在。53.根据权利要求52所述的方法，其中所述方法是用于检测所述人细小病毒靶核酸并且使所述样本与(I)的所述第一细小病毒扩增寡聚物和所述第二细小病毒扩增寡聚物接触。54.根据权利要求53所述的方法，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 182的序列中并且至少包括SEQ ID NO: 117或SEQ ID NO: 179的序列。55.根据权利要求54所述的方法，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 183的序列。56.根据权利要求55所述的方法，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列具有选自SEQ ID NO:75-80的序列。57.根据权利要求53所述的方法，其中⑴(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 184的序列中。58.根据权利要求57所述的方法，其中(I)(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列选自SEQ ID NO:81-84。59.根据权利要求53所述的方法，其中⑴(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 185的序列中并且至少包括SEQ ID NO: 180的序列。60.根据权利要求59所述的方法，其中⑴(a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列选自SEQ ID NO:82-84。61.根据权利要求53至60中任一项所述的方法，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 187的序列中并且至少包括SEQ ID NO: 188的序列。62.根据权利要求61所述的方法，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 186的序列。63.根据权利要求62所述的方法，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列选自SEQ ID NO:108-113。64.根据权利要求53至60中任一项所述的方法，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列包含于SEQ ID NO: 191的序列中。65.根据权利要求64所述的方法，其中⑴(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列至少包括SEQ ID NO: 190的序列。66.根据权利要求65所述的方法，其中(I)(b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列选自SEQ ID NO:118-121。67.根据权利要求53至66中任一项所述的方法，其中所述第二细小病毒扩增寡聚物为还包含位于所述祀标杂交序列的5’的启动子序列的启动子引物或启动子提供者。68.根据权利要求67所述的方法，其中所述启动子序列为T7启动子序列。69.根据权利要求68所述的方法，其中所述17启动子序列具有SEQID NO: 196中示出的序列。70.根据权利要求69所述的方法，其中所述第二细小病毒扩增寡聚物具有选自SEQIDNO:88-93 和 98-101 的序列。71.根据权利要求53至70中任一项所述的方法，其中步骤(B)还包括使所述样本与以下接触: (III)用于扩增所述人细小病毒核酸靶区域的第三扩增寡聚物和第四扩增寡聚物，其中(a)所述第三细小病毒扩增寡聚物包含第三靶标杂交序列，所述第三靶标杂交序列为SEQ ID NO: 181的序列中所含的约14至约27个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 179 或 SEQ ID NO: 180 的序列；以及 (b)所述第四细小病毒扩增寡聚物包含选自如下的第四靶标杂交序列:(i)为SEQ IDNO: 189的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 188的序列的序列；和(ii)为SEQ ID NO: 193的序列中所含的约14至约30个连续核苷酸并且至少包括SEQ ID NO: 192的序列的序列； 其中(III) (a)的所述第三靶标杂交序列不同于(I) (a)的所述第一细小病毒靶标杂交序列；并且 其中(III) (b)的所述第四靶标杂交序列不同于(I) (b)的所述第二细小病毒靶标杂交序列。72.根据权利要求71所述的方法，其中所述第三细小病毒扩增寡聚物为如权利要求54至60中任一项关于所述第一细小病毒扩增寡聚物所述的寡聚物。73.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述第四细小病毒扩增寡聚物为如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：K高，JM林南，KC诺顿，PC戈顿，D多，TN勒，
申请(专利权)人：简探针公司，
类型：发明
国别省市：美国;US