一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌及其应用，该菌株为对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌YZ037，该菌株已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC?No.7624。该枯草芽孢杆菌YZ037对罗非鱼源无乳链球菌有拮抗作用。所述的枯草芽孢杆菌可作为水产饲料的添加剂的应用，将该枯草芽孢杆菌添加到罗非鱼饲料中制成一种微生物饲料，用该微生物饲料喂养罗非鱼后能有效的预防罗非鱼链球菌病的发生。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌及其应用，该菌株为对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌YZ037，该菌株已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC?No.7624。该枯草芽孢杆菌YZ037对罗非鱼源无乳链球菌有拮抗作用。所述的枯草芽孢杆菌可作为水产饲料的添加剂的应用，将该枯草芽孢杆菌添加到罗非鱼饲料中制成一种微生物饲料，用该微生物饲料喂养罗非鱼后能有效的预防罗非鱼链球菌病的发生。【专利说明】一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及一株对无乳链球菌，特别是一种对罗非鱼源无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌及其应用，属于微生物
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技术介绍
罗非鱼是全球主要经济鱼类之一，具有生长快、抗病力与抗逆性强、肉质好、繁殖力强、适应性广以及群体产量高等一系列优点，现已成为南方各省出口型养殖规模最大的鱼类，产量占全世界的50%，罗非鱼产业对于增加就业机会、提高农民收入都有十分重要的意义。然而近年来，由于高密度饲养，种群退化，加上养殖水质、环境及气候恶化，各类病害时常大面积爆发，严重影响了罗非鱼产业的健康发展。2009年以来，国内主要的罗非鱼养殖区每年均爆发了非常严重的罗非鱼流行病，患病罗非鱼在水面离群独游，游姿失衡，眼球突出，被养殖户形象的称为“突眼病”。该病发病率一般达20%~30%，死亡率在80%以上。病原分析表明引起罗非鱼“突眼病”的病原为链球菌，主要为海豚链球菌 {Streptococcusiniae)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。据统计，近几年因链球菌病导致罗非鱼产业的损失超过20亿元，如何防治罗非鱼链球菌病已成为鱼农和渔业管理部门最为关注的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是:提供一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌，该菌株对罗非鱼源无乳链球菌有拮抗作用，将该菌应用于罗非鱼养殖，可明显降低罗非鱼链球菌病的发病率。解决上述技术问题的技术方案是:一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) YZ037，该菌株已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC N0.7624，保藏日期为2013年5月16日，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号。本专利技术的进一步技术方案是:所述的枯草芽孢杆菌在拮抗无乳链球菌中的应用。所述的枯草芽孢杆菌在拮抗罗非鱼源无乳链球菌中的应用。所述的枯草芽孢杆菌在制备预防罗非鱼链球菌病的微生物菌剂的应用。所述的枯草芽孢杆菌在制备水产饲料的应用。所述的枯草芽孢杆菌在制备水产饲料添加剂的应用。所述的枯草芽孢杆菌在制备罗非鱼饲料添加剂的应用。所述的枯草芽孢杆菌在制备罗非鱼饲料的应用，将所述的枯草芽孢杆菌添加到罗非鱼饲料中制成一种微生物饲料，用该微生物饲料喂养罗非鱼后能有效的预防罗非鱼链球菌病的发生。所述的罗非鱼饲料，其特征在于:每吨饲料中枯草芽孢杆菌的添加量为0.5X1013-2.5 X IO13 CFU。由于采用上述技术方案，本专利技术之一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌，具有以下有益效果:本专利技术所述的枯草芽孢杆菌为对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌YZ037，该菌株能抑制无乳链球菌的生长，且该菌株易于在罗非鱼肠道内定植，所以将该菌株添加到罗非鱼饲料中制成一种微生物饲料，用该微生物饲料喂养罗非鱼后能有效的预防罗非鱼链球菌病的发生。下面，结合说明书附图和具体实施例对本专利技术之一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌及其应用的技术特征作进一步的说明。【专利附图】【附图说明】 图1:为枯草芽孢杆菌的YZ03716S rDNA进化树分析图。图2:为枯草芽孢杆菌YZ037对无乳链球菌的拮抗作用实验结果图，图2中，a为本专利技术所述的枯草芽孢杆菌YZ037，b和c为实验过程中筛选到的另外2 株对无乳链球菌有拮抗作用的细菌。【具体实施方式】一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌，该菌株为对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌YZ037，该菌株已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC 7624。所述的枯草芽孢杆菌为对罗非鱼源无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌YZ037。一株对无乳链球菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌的应用，所述的枯草芽孢杆菌可用于制备水产饲料或水产饲料添加剂，特别适合用于制备罗非鱼饲料、罗非鱼饲料添加剂或能预防罗非鱼链球菌病的微生物菌剂。将所述的枯草芽孢杆菌添加到罗非鱼饲料中制成一种微生物饲料，用该微生物饲料喂养罗非鱼后能有效的预防罗非鱼链球菌病的发生。下面将更详细的说明本专利技术的内容:1.筛选具有无乳链球菌拮抗作用的微生物，具体操作如下:(I)用接种针挑取无乳链球菌在血平板上划一条直线进行接种。(2)在已爆发罗非鱼链球菌病的养殖塘中挑选未患病的健康罗非鱼，解剖该罗非鱼，将接种针在酒精灯火焰上灼烧灭菌后，插入该罗非鱼肠道中，轻微搅动3-5次，在垂直于步骤(1)中的无乳链球菌接种线的方向上划一直线接种罗非鱼肠道中的混合微生物，使肠道微生物穿过无乳链球菌。(3)接种完成后，于30°C培养24 h。培养结束后，观察划线接种交叉部位微生物的生长情况，选取出对无乳链球菌有拮抗作用的混合微生物用于下一步分离。(4)用接种针挑取步骤(3)中选取的对无乳链球菌有拮抗作用的混合微生物，划线接种于预先涂布了无乳链球菌的血平板，于30°C培养24 h。(5)通过步骤(4)的划线培养，混合微生物得到分离。挑选对无乳链球菌具有拮抗作用的单菌落进行反复划线培养，直至纯化，即可得到具有无乳链球菌拮抗作用的微生物。2.微生物16s rDNA序列分析将上述得到的纯化后的细菌接种于LB (Luria-Bertani)液体培养基中，于温度为30°C条件下培养24h。以菌液作为PCR (polymerase chain reaction)模板,采用引物27F: (5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3)和引物 1492R: (5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3)扩增细菌的 16S rDNA。PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳进行胶回收，回收产物经TA克隆后转化到JM109大肠杆菌感受态细胞中，涂布于含有50 ii g/ml氨节青霉素的LB固体培养基上,于37°C培养 12h，所得阳性克隆，经质粒提取和PCR验证后送至上海英俊生物技术有限公司进行序列测定。将序列提交至 GenBank 数据库进行 BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)分析，采用MEGA5软件将同源性相近的序列构建进化树。BLAST显示菌株的16S rDNA基因与枯草芽孢杆菌的16S rDNA基因具有高度同源性，进化树分析表明YZ037与枯草芽孢杆菌具有最近的亲缘关系(参见图1)。因此，我们初步认为所分离得到的对无乳链球菌有拮抗作用微生物为枯草芽孢杆菌。该枯草芽孢杆菌YZ037的16s rDNA序列已提交至GenBank数据库，accession number KF006991。3.微生物生理生化鉴定:参照《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠等，科学出版社，2001)中所述的枯草芽孢杆菌生理生化指标，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis）YZ037，该菌株已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC?No.?7624。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黎娅，黄稀，易弋，杨军，罗福广，黄杰，
申请(专利权)人：广西科技大学，柳州市鱼家乐饲料有限公司，
类型：发明
国别省市：