一种提高苯系物细胞传感器检测效果的固定化方法技术

本发明专利技术涉及一种提高苯系物细胞传感器检测效果的固定化方法，属于微生物固定化和污染物检测技术领域。该方法以海藻酸钙为包埋介质，对苯系物细胞传感器Pseudomonas?fluorescens?A506(pTS)进行固定化处理，从而提高细胞传感器的检测效果。方法过程包括：(1)细胞传感器的生长至指数生长末期；(2)细胞传感器的离心并用磷酸缓冲液重悬；(3)用海藻酸钠溶液将细胞传感器混匀，并逐滴加入2％CaCl2溶液中低速搅拌，固化2h形成颗粒；(4)向含有苯系污染物样品中加入固定化颗粒，运行一定时间后对荧光信号进行检测。该方法得到的固定化细胞传感器，单位体积荧光信号相对与游离细胞提升至游离细胞的2.23倍，同时将细胞浓度控制在游离细胞的4.5％。通过极少的细胞得到了比游离细胞更高的单位体积荧光信号，更有利于细胞传感器对苯系物染污的检测。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用海藻酸钙固定化处理提高苯系物细胞传感器荧光假单胞菌(pseudomonas?fluorescens)A506(pTS)检测效果的方法，其特征在于，通过固定化处理，提高了细胞传感器单位体积荧光信号和单个细胞荧光信号强度；具体步骤如下：(1)细胞传感器准备：细胞传感器接种于已灭菌的LB培养基中，并在摇床中以30℃、200rpm的条件过夜生长，直到细胞进入指数生长末期(OD600＝2.400)；(2)细胞传感器洗涤：取生长好的菌液20mL在4℃下离心，转速4000r/min，离心10min。去掉上清液后用用灭菌的磷酸缓冲液((NH)2HPO43.0g/L，KH2PO41.2g/L，NaCl5.0g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L)洗涤、重悬；重复重悬、离心2次后，菌体用5mL磷酸缓冲液重悬；(3)细胞传感器固定化：在5mL菌液中加入等体积已灭菌的海藻酸钠(4％)溶液；充分混合后，在距离CaCl2(2％)溶液液面10crm以上的位置，通过针头逐滴加入CaCl2溶液中并形成球状颗粒；使用磁力搅拌器对CaCl2溶液进行低速搅拌2h，之后含有细胞传感器的固定化颗粒用已灭菌的生理盐水洗涤，并保存于冰箱4℃中待用；(4)信号检测：将50个含有细胞传感器的固定化颗粒加入到50mL含有苯系物染污的培养基中，在以30℃、200rpm的条件下运行；之后取4个固定化颗粒置于96孔板中，通过全波长扫描式多功能酶标仪对荧光信号进行扫描，完成检测。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：庄国强，唐阔，马安周，庄绪亮，白志辉，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：