两种耐Ag+和SDS木聚糖酶制造技术

本发明专利技术涉及两种耐Ag+和SDS木聚糖酶，属于生物技术领域。该两种耐Ag+和SDS木聚糖酶从保藏号为：CCTCC?NO.?M?2012556的链单孢放线菌属菌株（Streptomonospora?sp.）YIM?90494发酵液中产生，其分子量分别为18KDa、?50KDa；酶活反应最适温度均为55℃，最适反应pH值均为7.5，在pH4.0-11.0范围内酶活稳定，且Ag+?和SDS对两种酶具有激活作用。本发明专利技术提供的两种耐Ag+和SDS木聚糖酶在造纸、洗涤剂、环保、食品、医药、能源转化、饲料工业中将具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

:本专利技术涉及两种耐Ag+和SDS木聚糖酶，属于生物

技术介绍
:木聚糖是植物半纤维素的重要组成之一，大约占植物总糖的1/3，是自然界中仅次于纤维素的第二大最丰富的可再生物质资源。广义的木聚糖酶是指能够降解半纤维素木聚糖一组酶的总称，包括内切β_1，4-木聚糖酶、外切β-1，4_木聚糖酶、木聚糖酶，还包括a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、乙酰木聚糖脂酶、苯酚酸脂酶，其中以β-1,4-木聚糖酶和木聚糖酶最为重要。β-1,4-木聚糖酶是降解半纤维素最主要的酶，该酶以内切方式作用于木聚糖主链内部的β_ 1，4-木糖苷键，使木聚糖降解为短链的低聚木糖，并有少量木糖生成；β_木聚糖酶则作用于短链的低聚木糖，通过催化低聚木糖的末端来释放木糖残基，二者共同作用能将木聚糖降解成单糖。木聚糖酶能够从微生物、植物和动物中获得，其中微生物是木聚糖酶的主要来源。目前，已报道的分泌木聚糖酶的微生物有丝状真菌、芽孢杆菌属、曲霉属、木霉属、链霉菌属、放线菌和其他一些微生物，如放线菌主要有Streptomyces lividans、Thermobifidafusca 等；细菌主要有 Bacillus subtilis、Pseudomonas fluorescents 等；真菌主要有Aspergillus niger、Aspergillus nidulans、Cryptococcus sp.S_2、Trichoderma reese1、Penicillium sp.40。目前国内外对木聚糖酶的研究已比较深入,包括菌种的筛选、产酶的诱导、酶的分离纯化及易源表达、酶学性质研究等。由于极端微生物在某些苛刻条件下(如高温、偏酸、偏碱、高盐等)生长稳定性好，并且在工业生产中与来自普通环境微生物相比不易被污染。因此近些年来，来自极端环境如嗜热、嗜酸、嗜碱等特殊生境微生物引起越来越多的关注，而且研究的也已经较多。但是对嗜盐这一特殊生境的微生物的研究相对还比较少，目前已经报道的仅有Halorhabdusutahensis (Wain0 and Ingvorsen 2003)、halophilic strain CL8 (ffejse et al.2003)、Nesterenkonia sp.(Govender et al 2009)、 Glaciecola mesophila KMM 241 (Guo etal 2009) Bacillus sp.NTU-06 (Wang et al.2010) > Chromohalobacter sp.TPSV 101(Prakasha et al.2012) >Bacillus halodurans PPKS-2 (Prakash et al.2012)。对嗜盐微生物的研究，不仅在学术上能够解释酶耐受盐的机制原理也为在分子水平上克隆新酶提供了理论和材料，而且由于嗜盐微生物产生的木聚糖酶具有耐受高盐、不易污染、能耐受较广的PH(6.0-10.0)范围，并且在温度高于60°C仍保持较高的酶活力，因此在含盐量高的工业生产及污水处理方面有着广泛的潜在应用价值。不同来源微生物的木聚糖酶在分子量、等电点、pH耐受、温度耐受等方面差异各不相同。一般而言，分子量在8KDa 145KDa、等电点为3 10之间均有分布。细菌和真菌来源的木聚糖酶，其最适作用温度一般在40°C 60°C，多数细菌和放线菌所产木聚糖酶的最适反应温度在50°C 60°C。不同微生物来源的木聚糖酶有比较广泛的pH值范围，pH值为.3.0 10.0时基本都是稳定的，其最适作用pH值为4.0 7.0。一般来说，真菌来源的木聚糖酶属于酸性木聚糖酶，最适pH值为4.0 6.0，细菌和放线菌木聚糖酶属中性或碱性木聚糖酶，其最适pH值为6.0 8.0。工业上，木聚糖酶作为生物试剂在食品饮料、饲料、造纸、医药、能源、生物转化等工业中具有重要作用。如专利号为CN102732496A公开了一种木聚糖酶，在面包烘烤中有很明显的应用效果；CN102640858A公开了一种含有木聚糖酶的多功效复合酶制剂，能提高饲料的消化率和转化率，减低霉素和毒素的有害作用，提高动物抗病能力。木聚糖酶已经广泛的应用于造纸业，其重要性主要在于能部分取代有毒的化学物质(例如氯及含氯化合物)的使用，减轻对环境的污染，也能够缩短纸浆的处理时间，改善漂白效果。但由于目前大多数微生物产生的木聚糖酶存在着稳定性差、产量低、工业应用成本高等缺陷，限制了它的工业化应用，因而，对木聚糖酶的开发与研究就显得十分必要了
技术实现思路
:本专利技术的目的在于提供两种耐Ag+和SDS木聚糖酶。本专利技术米用的链单抱菌属 Μ 90494CStreptomonospora sp.YIM 90494),于 2012年12月28日保存于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址:中国武汉武汉大学，邮编430072，保藏号:CCTCC N0.M 2012556。本专利技术的两种耐Ag+和SDS木聚糖酶用保藏号为:CCTCC N0.M 2012556的链单孢菌属 Μ 90494 (Streptomonospora sp.YIM 90494)经大量发酵、70% 硫酸铵沉淀、Hiprep26/60层析柱> Hiprep QXL 26/60层析柱、Hipr印FF 26/60层析柱四步纯化步骤得到，其分子量分别为18KDa、50KDa ;酶活反应最适温度均为55°C，最适反应pH值均为7.5，在PH4.0-11.0范围内酶活稳定，且Ag+和SDS对两种酶具有激活作用。本专利技术的两种耐Ag+和SDS的木聚糖酶经如下分离纯化方法得到: 1.粗酶液的制备:将Streptomonospora sp.YIM 90494接入液体 Μ 38#培养基中，在37°C的条件下振荡培养4-5天作为种子液，以10%菌液转接于液体发酵培养基中，在37°C培养15天，将发酵液离心，取上清，滤纸过滤，得粗酶液；2.在粗酶液中加硫酸铵至70%饱和度，4°C放置过夜；1200rpm/min离心30min取沉淀，溶解在pH8.0、50mM Tris-HCl缓冲液中；3.将酶液1200rpm/min离心IOmin,收集上清，上样于已平衡好的Hiprep 26/60层析柱、强阴离子柱Hiprep QXL 26/60层析柱、弱阴离子柱Hiprep FF 26/60层析柱,收集有木聚糖活性的透过峰部分；4.将两种有活性的酶液于pH8.0、50mM Tris-HCl缓冲液中透析过夜并离心取上清，分别上样于用pH8.0、50mM Tris-HCl缓冲液平衡好的Hipr印QXL 26/60层析柱，用pH8.0,0.5M硫酸铵的50mM Tris-HCl缓冲液洗脱，收集木聚糖有活性的透过部分；5.将两种有活性的酶液于pH9.0、50mM Tris-HCl缓冲液中透析过夜并离心取上清，分别上样于用pH9.0、50mM Tris-HCl缓冲液平衡好的Hipr印FF 26/60层析柱，用pH9.0,0.5M硫酸铵的50mM Tris-HCl缓冲液洗脱，收集木聚糖有活性的透过部分，即为纯酶液；在步骤I)中的所说的发酵培养基的组成:NaCl100g Yeast extrac本文档来自技高网...

【技术保护点】
两种耐Ag+和SDS木聚糖酶，其特征在于该两种耐Ag+和SDS木聚糖酶从保藏号为：CCTCC?NO.?M?2012556的链单孢放线菌属菌株（Streptomonospora?sp.）YIM?90494发酵液中产生，其分子量分别为18KDa、?50KDa；酶活反应最适温度均为55℃，最适反应pH值均为7.5，在pH4.0?11.0范围内酶活稳定，且Ag+?和SDS对两种酶具有激活作用。

【技术特征摘要】
1.两种耐Ag+和SDS木聚糖酶，其特征在于该两种耐Ag+和SDS木聚糖酶从保藏号为:CCTCC N0.M 2012556 的链单孢放线菌属菌株(Sti^ptomonospora sp.)YIM 9...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文均，任万增，杨心意，张峰，唐蜀昆，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：