特应性皮炎标记物及其利用技术制造技术

本发明专利技术以探索可成为特应性皮炎疾病标记物的物质为目的，涉及包括测定皮肤细胞及/或皮肤组织中特定蛋白质的表达及/或其基因表达的判定特应性皮炎的方法，所述方法中，所述特定蛋白质伴随特应性皮炎的炎症其表达发生改变或因特应性皮炎起因的程度其表达发生改变。本发明专利技术还提供用于判定特应性皮炎的炎症程度或特应性皮炎发病的危险度的试剂盒及鉴定具有治疗及/或预防特应性皮炎作用的物质的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及特应性皮炎标记物及其利用技术。
技术介绍
特应性皮炎因遗传因素、环境因素等多种因素而引发疾病，其机理尚不明确。目前因特应性皮炎主要通过肉眼观察进行诊断，在临床医学上带有主观意识，因此缺乏客观性。特别是在特应性皮炎中，要判断决定治疗方法的皮疹的严重度是非常难的课题。还因为社会上对常用于特应性皮炎治疗的巨大支柱类固醇外用剂的忌讳潮流日趋强烈，所以希望有适合的治疗方法及合适的药量。因此，探索作为病情恶化、改善指标、治疗效果的表现的可将特应性皮炎严重度分类的特应性皮炎标记物是十分重要的课题。目前,特应性皮炎标记物使用IgE。但是,显示IgE的抗体效价上升的疾病除特应性皮炎以外，还有支气管哮喘、肝硬化等，所以即使IgE的抗体值呈现高值，也未必就一定与特应性皮炎有关。最近有一新见解，指出因SCCAl在特应性皮炎患者的皮肤、血液中表达增高，所以可作为新型生物标记物(非专利文献I)。还有关于NGF、P物质(Substance P)、IL-16等作为特应性皮炎患者的血清标记物非常有效的报道(非专利文献2及3)。此外还有使用特应性皮炎的炎症部位和非炎症部位的皮肤，对特应性皮炎的生物标记物进行全面调查的方法。例如，基于使用DNA微阵列的基因表达分析，鉴定特应性皮炎关连基因的疾病标记物已申请了专利(专利文献I及2)。另外，还有如下报道，培养从特应性皮炎患者的皮肤组织中获取的表皮角化细胞、纤维芽细胞后，从细胞中提取蛋白质，通过二维电泳分离后，用质谱仪鉴定特应性皮炎标记物(非专利文献4及5)。但是，至今为止还没有使用特应性皮炎模型小鼠皮肤组织中的蛋白质进行蛋白质组分析的先例。且对人体的特应性皮炎进行的蛋白质组分析，是从皮肤采集细胞，在初代培养后进行蛋白质组分析，所以很难说能立即反映人体的特应性皮炎的状况。专利文献1:日本特开2005-110602号公报专利文献2:国际公开第W O 01-065259号pamphlet非专利文献1: Clin.Exp.Allergy2005 ; 35:1327-1333非专利文献2: Br.J.Dermatol.2002Jul; 147 (I):71-79非专利文献3:Br.J.Dermatol.2006Jun; 154 (6): 1112-1117非专利文献 4: Proteomics2004,4，3446-3455非专利文献 5:Proteomics2006，6，1362-1370
技术实现思路
本专利技术的目的是提供作为特应性皮炎的客观性标记物而在诊断及治疗中有效的物质。且本专利技术的目的还是提供利用特应性皮炎标记物，筛选对特应性皮炎的预防或治疗有效的成分的方法。本专利技术者对特应性皮炎模型小鼠(NC/Nga小鼠)涂布半抗原，人为诱发特应性皮炎。同时进行已知抑制特应性皮炎的乳铁蛋白处理来抑制炎症。使用此时的皮肤组织测定因特应性皮炎发病而发生变化的蛋白质。分析方法为使用二维电泳(2-DE)和质谱(MS)进行蛋白质组分析，对于经鉴定的蛋白质进一步用免疫印迹法确认其变化。其结果，作为伴随特应性皮炎发病其表达增加的蛋白质，鉴定出FABP-5、载脂蛋白Al (Apolipoprotein Al)、波形蛋白(Vimentin)、Rho GDI等。另外,作为伴随特应性皮炎的炎症其表达减少的蛋白质，鉴定出半乳糖凝集素-1、-3、-4、-7、-8 (Galectin-1、-3、-4、-7、-8)等的半乳糖凝集素(Galectin)类、为细胞骨架蛋白的结蛋白(Desmin)、膜突蛋白(Moesin)、埃兹蛋白(Ezrin)、根蛋白(Radixin)、还有膜联蛋白II (Annexin II)、烯醇酶I (Enolasel)、FABP-4、PARK7、HSP70、HSP90等。这些蛋白质的大多数在进行半抗原处理后再进行乳铁蛋白处理时显示出相反的变化，表明特应性皮炎有无发病与表达的增减有良好的相关性。而且，为分析如前所述发现的特应性皮炎标记物与人体特应性皮炎炎症程度之间的相关性，从特应性皮炎发病者及健康的志愿者身上使用可非侵袭地、安全、简便地采集角质层的角质测试仪(checker)采集角质层，从中提取蛋白质,通过Western印迹法测定特应性皮炎标记物的表达。其结果，证实了伴随特应性皮炎炎症程度的增加，血清白蛋白(Serum albumin)、免疫球蛋白 G(Immunoglobulin G)、膜联蛋白 II (Annexin II)、载脂蛋白Al (Apolipoprotein Al)、FABP_5、烯醇酶 I (Enolasel)、半乳糖凝集素-7 (Galectin-7)的表达也增加。另外，作为伴随特应性皮炎炎症程度的增加其表达减少的蛋白质，鉴定出精氨酸酶 I (Arginase I)、尿卩密唳 DNA 糖基化酶(Uracil-DNA glycosylase)。本专利技术的主要内容如下。1.判定特应性皮炎的方法，其包括测定皮肤细胞及/或皮肤组织中下述特定蛋白质的表达及/或其基因表达，所述方法中，所述特定蛋白质伴随特应性皮炎的炎症其表达发生改变。特定蛋白质有以下23种:(I)从半乳糖凝集素-1 (Galectin-1)、半乳糖凝集素_3 (Galectin-3)、半乳糖凝集素-4(Galectin_4)、半乳糖凝集素_7 (Galectin-7)、半乳糖凝集素_8 (Galectin_8)所组成的Galectin组中选择的蛋白质，(2)从HSP70、HSP90所组成的HSP组中选择的蛋白质，(3)从波形蛋白(Vimentin)、Rho⑶1、结蛋白(Desmin)、膜突蛋白(Moesin)、埃兹蛋白(Ezrin)、根蛋白(Radixin)所组成的细胞骨架蛋白组中选择的蛋白质，(4)从FABP-4、FABP-5所组成的FABP组中选择的蛋白质，(5)此外还有血清白蛋白(Serum albumin)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G)、膜联蛋白 II (Annexin II)、载脂蛋白 Al (Apolipoprotein Al)、烯醇酶 I (Enolase I)、PARK7、精氨酸酶 I (Arginase I)、尿卩密唳 DNA 糖基化酶(Uracil DNA glycosylase)。2.1.中所述的方法，其中，皮肤细胞及/或皮肤组织是用角质测试仪采集的皮肤的角质层。3.1.中所述的方法，其在蛋白质水平上测定特定蛋白质的表达。4.1.中所述的方法，其在RNA水平上测定特定蛋白质的基因表达。5.用于判定特应性皮炎的试剂盒，其包含对于皮肤细胞及/或皮肤组织中的下述特定蛋白质，测定伴随特应性皮炎的炎症其表达发生改变的所述特定蛋白质的表达的试剂。特定蛋白质有以下23种:(I)从半乳糖凝集素-1 (Galectin-1)、半乳糖凝集素_3 (Galectin-3)、半乳糖凝集素-4(Galectin_4)、半乳糖凝集素_7 (Galectin-7)、半乳糖凝集素_8 (Galectin_8)所组成的Galectin组中选择的蛋白质，(2)从HSP70、HSP90所组成的HSP组中选择的蛋白质，(3)从波形蛋白(Vimentin)、Rho⑶1、结蛋白(Desmin)、膜突蛋白(Moesin)、埃兹蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
可特异性识别伴随特应性皮炎的炎症其表达发生改变的特定蛋白质的抗体在制备诊断或检测特应性皮炎的制剂中的应用，所述特定蛋白质包含PARK7。

【技术特征摘要】
2005.10.21 JP 2005-3064981.可特异性识别伴随特应性皮炎的炎症其表达发生改变的特定蛋白质的抗体在制备诊断或检测特应性皮炎的制剂中的应用，所述特定蛋白质包含PAR...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫田智，宫崎香，安田知永，岩松明彦，池泽善郎，相原道子，森山佳谷乃，
申请(专利权)人：株式会社芳珂，宫崎香，池泽善郎，相原道子，森山佳谷乃，
类型：发明
国别省市：