本发明专利技术公开了一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物及其应用，其中，miRNA标志物为has-miR-197。该miRNA标志物在制备食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒方面的应用。一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物的引物在制备食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒方面的应用。一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物的引物的食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒。本发明专利技术方法简单、操作方便，筛选得到的has-miR-197可辅助判断食管癌患者的预后或死亡风险，推动了食管癌诊治方面的发展。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物，同时还涉及该标志物的应用，属于基因工程及肿瘤学领域。
技术介绍
食管癌(Esophageal carcinoma, EC)是常见的消化道恶性肿瘤，占消化系统各部位肿瘤死亡的第二位，全世界毎年死于此病达30万人，其中中国毎年平均死亡约15万人，是世界上食管癌发病率最高的国家。尽管近年来在食管癌的化疗、放疗以及同期放化疗等方面取得了较大进展，但至今外科手术仍是食管癌最主要的治疗手段。但治疗效果不理想，5年生存率仅为30%左右，死亡的主要原因为术后复发和转移，尤其是食管癌患者术后早期淋巴结转移。目前国内外报道其术后早期复发和转移率(术后I年内)可达约20-50%不等，这对患者及外科医师的信心均是沉重打击，部分患者甚至对外科手术疗效产生疑问。食管癌患者的自然病程或者称生存期约为6-12月，术后I年内出现早期复发和转移，意味着手术的失败，或者说对这些患者采取放化疗更有益。影响食管癌预后的因素很多，目前判断食管癌预后的主要方法还是传统的TumorNodemetastasis(TNM)分期方法。食管癌的临床诊治过程中，经典的 !病理分期系统对于不同病理分期预后判断起着重要作用，但对于临床工作中遇到的病理分期相同而预后差异明显的情况无法解释，而且缺乏对术后出现早期复发的判断作用。目前，临床工作者正在进ー步完善 M分期系统以评估预后。与此同时，基础医务工作者也从肿瘤异质性方面不同来考虑，寻找新的判断预后的分子指标，作为TNM病理分期系统的有益补充。食管癌的发生、发展过程中涉及多个癌基因、抑癌基因的突变，产生各种酶学的改变，表现为多基因、多因素、多步骤的协同作用。对于食管癌诊断和预后有关的分子生物学标志物的研究已成为研究重点。 目前食管癌肿瘤分子标记物的研究和报告较多，除传统意义的肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌相关抗原(SCC)、细胞角化素蛋白片段19 (CYFRA21 -1)、p53蛋白抗体(p53-Ab)等以外，目前研究中热点分子标记物EGFR (表皮生长因子受体)、CycIinDl(细胞周期蛋白Dl)、C0X-2 (环氧化酶2)、PCNA (增殖细胞核抗原)、VEGF (血管内皮细胞生长因子)等都对食管癌预后判断有一定的临床意义，但以上分子标记物主要集中于对不同肿瘤病理分期的研究，以及对淋巴结转移、肿瘤浸润深度等单个因素的影响，缺乏对相同病理分期、同一术者、相同术式、相同术后治疗方案而预后不同分子标记物的研究，缺乏对食管癌术后出现早期复发和转移的研究，缺少特异性和灵敏性高的分子标记物来预测食管癌的发生、发展和预后，而且食管癌变和发展过程是多基因改变的结果，其分子生物学变化并不完全相同，联合分子标记物检测有助于提高判断预后的敏感性。microRNAs (miRNAs)是ー类长度为二十几个核苷酸的内源性非编码调控RNA，通过序列特异性翻译抑制或mRNA裂解来调控基因表达，參与细胞发育、増殖、分化、凋亡等一系列重要生物学进程。近期的研究发现，miRNA具有癌基因和抑癌基因的作用，在肿瘤的发生和发展中起着重要的作用。如能筛选出食管癌术后早期复发及预后特异或异常表达的miRNA作为生物标志物，并研制相应的疾病进展监測、辅助诊断试剂盒，对我们食管癌的诊治现状必将是一次有力的推动，尤其对ー些患者避免不必要的外科手术有着重要的意义。此外，这些异常表达的miRNA对于食管癌细胞迁移、转移能力的影响等，还有助于发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物。为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物，所述miRNA标志物为has-miR-197。所述miRNA 标志物的引物如 SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:5 和 SEQ ID N0:6 所示。本专利技术的目的还在于提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物在制备食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒方面的应用。本专利技术所采用的技术方案还在于提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物在制备食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒方面的应用。所述试剂盒包括has-miR-197的引物、聚合酶链反应试剂、U6snRNA内參引物及荧光染料 SYBR-Greenl。 本专利技术的目的还在于提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物的引物在制备食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒方面的应用。本专利技术所采用的技术方案还在于提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物的引物在制备食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒方面的应用。本专利技术的目的还在于提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物的引物的食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒。本专利技术所采用的技术方案还在于提供一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物的引物的食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒。利用本试剂盒中提供的试剂，结合常用的RNA提取试剂和通用的miRNA逆转录试齐U，可以特异地检测组织中has-miR-197的表达量，有效地用于临床食管癌的辅助诊断。本专利技术has-miR-197的筛选方法，包括以下步骤:1、选择相同病理分期、同一术者、相同术式、相同术后治疗方案却有着截然不同预后结果的典型样本，同时选取病理分期相同距离肿瘤组织边缘8cm以外的正常食管粘膜作为对照品；2、提取样本和对照品的RNA ；3、对总RNA通过逆转录得到cDNA ； 4、cDNA进行预扩增；5、将预扩增产物进行实时荧光RT-PCR扩增，筛选表达存在明显差异的miRNA，进行miRNA的表达统计分析，筛选得到与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物。本专利技术选取食管癌术后复发时间及预后差异较大的肿瘤样本及其正常食管组织作为对照，通过提取RNA，逆转录、实时荧光定量RT-PCR筛选表达存在明显差异的miRNA，进行miRNA的表达统计分析，筛选得到has-miR-197。本专利技术方法简单、操作方便，筛选得到的has-miR-197可辅助判断食管癌患者的预后或死亡风险，推动了食管癌诊治方面的发展。采用本专利技术制备的miRNA试剂盒，不仅稳定，检测方便，且定量准确，大大提高疾病诊断的敏感性和特异性，将此试剂盒投入实践，可以帮助诊断和更有效的个体化治疗。附图说明图1为has-miR-197在病理分期相同而预后差异食管癌患者表达RT-PCR扩增曲线；图2为has-miR-197表达量与食管癌预后的危险度评分方法分析图。具体实施例方式实施例1、样本的选择选取新乡医学院第一附属医院2006-2007年收治的病理分期相同，预后生存明显差异的2例石蜡标本，这2例标本均为原发病灶的首次手术切除肿瘤样本制作的石蜡标本。同时分别选取距离此2例石蜡样本肿瘤组织边缘8cm以外的正常食管粘膜作为对照。2例病例，术前经全身物理体格检查及影像学诊断无远处转移，术前未接受放射治疗或化学治疗等，均采用食管癌切除+胸腹ニ野淋巴结清扫木，颈部手工吻合，术后化疗2次，术后病理学检查提示食管中段高分化鳞癌，溃本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物，其特征在于，所述miRNA标志物为has?miR?197。
【技术特征摘要】
1.一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物，其特征在于，所述miRNA标志物为 has-miR-197。2.根据权利要求1所述的一种与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物，其特征在于,所述miRNA标志物的引物如SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:6所示。3.—种如权利要求1所述的与食管癌术后早期复发及预后相关的miRNA标志物在制备食管癌术后早期复发及预后辅助诊断试剂盒方面的应用。4.根据权利要求3所述的与食管癌...
【专利技术属性】
技术研发人员：王天云，赵宝生，刘尚国，杨晓煜，秦秀广，李汉臣，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：
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