【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
;更具体地,本专利技术涉及过表达单一 MicroRNA成熟体序列的新方法。
技术介绍
microRNA是一类长约22个碱基的、广泛存在于动植物体内的内源非编码RNA[1]。近10年来,随着对microRNA研究的不断深入,科学家们已经发现microRNA虽然不编码蛋白,但是,它们可以通过碱基互补配对的方式来识别与之相对应的靶mRNA,通过抑制翻译或是促使靶mRNA降解的方式影响基因表达[2]。microRNA能够参与诸如生长发育、免疫防御等许多生理过程,并且microRNA的调节异常可以参与到多个疾病的病理过程[3,4]。所以,microRNA作为一种新发现的基因表达调控分子有着重要的功能。过表达所要研究的目的基因,并观察其产生的表型,是探索基因功能的一个不可或缺的方法。对于microRNA,过表达的方式目前主要有:转染人工合成的microRNA类似物或microRNA莖环前体;克隆基因组中的microRNA编码序列到过表达载体中再转染细胞。人工合成的类似物或是前体虽然可以特异性地提高细胞中的某个microRNA的表达,但是,它只能实现瞬时表达,随着细胞的增殖,其过表达水平会被稀释,难以应用到需要长时间稳定表达的研究,更难以实现体内研究。通过质粒过表达的方式,尤其是通过病毒载体进行的过表达,可以实现稳定过表达,并且转染容易,能实现体内功能的研究。但是,目前的microRNA过表达质粒的构建,依赖于克隆基因组中的microRNA编码序列(通常将pre-miciORNA的全部序列同其上下游各一、两百个碱基一并克隆)。每个microR ...
【技术保护点】
一种表达单一microRNA成熟体的方法,其特征在于,所述方法包括:(1)提供一种表达构建物,所述的表达构建物含有以下结构:5’Seq正向‑Y‑Seq反向3’ (I);其中,Seq反向为该单一microRNA成熟体相应的DNA序列;Seq正向为与Seq反向互补的序列;Y为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列,并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补;式I所示的结构可形成如下所示的二级结构:其中,“|”表示在Seq正向和Seq反向中,相应的核苷酸是配对的,在Seq正向和Seq反向之间形成氢键;表示在Seq正向和Seq反向中,相应的核苷酸不配对;并且,“|”和的分布构成了Seq反向与Seq正向的互补;(2)将(1)的表达构建物转化细胞,从而表达单一microRNA成熟体。FDA0000108196100000011.tif,FDA0000108196100000012.tif,FDA0000108196100000013.tif
【技术特征摘要】
1.一种表达单一 microRNA成熟体的方法,其特征在于,所述方法包括: (1)提供一种表达构建物,所述的表达构建物含有以下结构: 5’ Seq 正向-Y-Seq 反向 3’ (I); 其中,Seqfi自为该单一 microRNA成熟体相应的DNA序列!Seq1自为与Seqfi自互补的序列;Y为位于Seq1自和Seq反自之间的间隔序列,并且所述间隔序列与Seq1自和Seqfi自不互补;式I所示的结构可形成如下所示的二级结构:2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,式I所示的结构进入细胞并被胞内加工后,基于Seq&@结构表达所述的单一 microRNA成熟体,基于Seqirt结构表达与另一 microRNA成熟体不同的RNA,其不具备另一 microRNA成熟体的活性。3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,式(II)中,以Seqi@为参照,“I”存在于与该Seqirt序列的特定位点上,该特定位点对应于所述另一microRNA成熟体发挥活性的关键位点。4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,式(II)中,以Seq1^1为参照,“j”存在于该序列的5’端第2-10位;且“ j”存在的个数为0-5个。5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的Seqtt具有SEQID NO:2所示的核苷酸序列;和/或 所述的Seqfi自具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;和/或 所述的Y具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,式(I)结构的序列选自: SEQ ID NO:4中第8-6...
【专利技术属性】
技术研发人员:沈南,曲波,
申请(专利权)人:中国科学院上海生命科学研究院,
类型:发明
国别省市:上海;31
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