一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法技术

本发明专利技术公开了一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法。本发明专利技术所述方法是通过DNA结合蛋白在低严谨杂交条件下能增强双链DNA结合的稳定性，在高严谨洗脱条件下能够稳定的以双链形式存在而不被洗脱的原理，用来检测DNA结合蛋白。本发明专利技术所述方法是一种检测DNA结合蛋白表达和活化水平的新方法，具有高灵敏度、低费用、不需要使用核酸酶和针对DNA结合蛋白的特异性抗体的优点，既解决了以往检测方法中需要核酸酶和特异性抗体的问题，又能保证检测灵敏度，还可以对尚未有特异性抗体的DNA结合蛋白进行检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白工程
，具体涉及一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法。
技术介绍
DNA binding protein (全文中统称为“DNA结合蛋白”)是指含有DNA结合结构域，可与单链或双链DNA特异性或普遍结合的一类蛋白。转录因子是序列特异性DNA结合蛋白，含有一个或多个DNA结合结构域(DBDs)，可与特异的DNA序列结合进而调控遗传信息的转录表达，控制细胞通过细胞周期，分化以及对外界环境的应答。转录因子是基因表达调控通路及网络的枢纽，许多疾病都与转录因子的异常表达及活化存在密切的关系。因此，有关检测分析转录因子表达及活化程度的方法技术研究一直是生物科学研究的热点和重点。目前，已经建立多种基于DNA与蛋白质之间的相互作用来检测转录因子表达及活化程度的检测分析方法。最经典的是1981年Garner，M. M.专利技术的凝胶迁移阻滞实验，即EMSA (Electrophoresis Mobility Shift Assay)。该技术最初用于研究 DNA 结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于所述方法是根据当DNA结合蛋白存在时，在高严谨洗脱条件下能增强双链DNA结合的稳定性而不被洗脱的原理，设计两条核酸序列，一条核酸序列是固定探针，含有DNA结合蛋白特异结合的核酸序列，该序列末端依据微孔板表面的化学基团进行相应的化学修饰，以便连接固定到微孔板表面；另一条核酸序列是显色探针，是与固定探针不完全互补的核酸序列，其末端依据显色系统进行相应的修饰，以便检测分析；显色探针与含DNA结合蛋白的细胞全蛋白或核蛋白抽提物与微孔板共孵育时，在高严谨洗脱条件下能够形成稳定双链而不被洗脱下来，通过末端修饰标记进行显色时...

【技术特征摘要】
1.一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于所述方法是根据当DNA结合蛋白存在吋，在高严谨洗脱条件下能增强双链DNA结合的稳定性而不被洗脱的原理，设计两条核酸序列，一条核酸序列是固定探针，含有DNA结合蛋白特异结合的核酸序列，该序列末端依据微孔板表面的化学基团进行相应的化学修饰，以便连接固定到微孔板表面；另一条核酸序列是显色探针，是与固定探针不完全互补的核酸序列，其末端依据显色系统进行相应的修饰，以便检测分析；显色探针与含DNA结合蛋白的细胞全蛋白或核蛋白抽提物与微孔板共孵育时，在高严谨洗脱条件下能够形成稳定双链而不被洗脱下来，通过末端修饰标记进行显色时有颜色显示；若不含有DNA结合蛋白，显色探针在高严谨洗脱条件下将会被洗脱下来，显色时将无颜色显示。2.根据权利要求1所述的基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于所述方法包括如下步骤 (1)准备核酸分子，包括固定探针和显色探针，均为单链核酸； (2)将固定探针连接固定到微孔板内； (3)将DNA结合蛋白和显色探针与微孔板共孵育； (4)高严谨洗脱，除去未稳定结合的核酸分子； (5)显色系统进行显色，...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾令文，方志远，张文娟，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：