利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒制造技术

利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒。其试剂盒含有金鱼卵黄脂磷蛋白纯品与鼠抗金鱼卵黄脂磷蛋白多克隆抗体。其制备方法为首先纯化出金鱼卵黄脂磷蛋白，通过免疫小鼠制备鼠抗金鱼卵黄脂磷蛋白多克隆抗血清，进一步纯化获得鼠抗金鱼卵黄脂磷蛋白多克隆抗体。本发明专利技术的试剂盒可以用于环境雌激素类物质的筛选以及水环境受环境雌激素污染状况的检测，能够灵敏、方便的定性检测鱼类血液、整体匀浆液、体表粘液、肝脏组织及肝细胞培养液中的卵黄原蛋白，该试剂盒不仅可以用于鲤科鱼类卵黄原蛋白定性检测，对种缘关系较远的鱼类卵黄原蛋白具有同样的检测敏感度。因为该试剂盒最大的优势在于具有非常广泛的应用范围，并且最低检出限可达100ng/ml。

【技术实现步骤摘要】
利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒
本专利技术属于生态检测领域，具体涉及一种利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒，及其制备方法与应用。
技术介绍
近年来，环境雌激素对野生动物和人类生殖系统的影响受到了广泛关注。为了减少环境雌激素对生物体及人类的危害，建立快捷有效的筛选方法，从环境污染物中筛选出具有环境雌激素效应的化学物质，已成为当前研究的热点。美国、欧盟和日本相继建立起以鱼类为模式生物的环境雌激素筛选评价体系，其中卵黄原蛋白(Vitellogenin, Vtg)作为重要的生物筛选指标，已经得到广泛应用。卵黄原蛋白是卵黄蛋白的前体，是一种大分子量的糖磷脂蛋白。卵黄形成期，卵黄原蛋白在雌激素的刺激下由肝脏产生，随血液循环进入卵巢，被卵巢吸收后，在组织蛋白酶 D的作用下，分解成卵黄脂磷蛋白、卵黄高磷蛋白和β 组分，大量储存于卵巢中，为卵细胞和早期胚胎的发育提供营养与免疫保护。通常，卵黄原蛋白只能在卵黄形成期的雌鱼体内检测到，但是，雄鱼和幼鱼体内也含有卵黄原蛋白基因，在环境雌激素的诱导下，也能合成和分泌卵黄原蛋白。因此，卵黄原蛋白是环境雌激素筛选的特异性生物标志本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒，包括一个盒体，该盒体内装有：1)PVDF膜2张；2)阴性对照血浆1支；3)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗1支；4)封闭液、洗涤液、显色液各1支，所述的洗涤液为TBST；封闭液为含5%脱脂奶粉的TBST；显色液为含0.06%(m/V)3’?二氨基联苯胺(DAB)的10mM?Tris?HCl；其特征在于它还装有5)金鱼卵黄脂磷蛋白纯品1支；6)鼠抗金鱼卵黄脂磷蛋白多克隆抗体1支。

【技术特征摘要】
1.一种利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒，包括一个盒体，该盒体内装有1)PVDF膜2张；2)阴性对照血浆I支；3)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗I支；4)封闭液、洗涤液、显色液各I支，所述的洗涤液为TBST ;封闭液为含5%脱脂奶粉的TBST ;显色液为含0.06%(m/V) 3’-二氨基联苯胺(DAB)的IOmM Tris-HCl ;其特征在于它还装有5)金鱼卵黄脂磷蛋白纯品I支；6)鼠抗金鱼卵黄脂磷蛋白多克隆抗体I支。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的金鱼卵黄脂磷蛋白纯品为100 u g/ml的金鱼卵黄脂磷蛋白溶液。3.如权利要求1所述的利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒，其特征在于所述的金鱼卵黄脂磷蛋白纯品的制备方法如下 取卵黄形成后期的雌性金鱼卵巢组织，去除结缔组织，收集鱼卵，加入3倍体积4°C预冷的匀浆缓冲液混合，在冰浴条件下用玻璃匀浆器匀浆，4°C，IOOOOg离心20分钟，收集上清液；向上清液中缓缓加入(NH4)2SO4粉末至70%的饱和度，盐析过液；10小时后，在4°C下，以8000g离心10分钟，弃去上清，将沉淀重新溶解于25mM Tris-HCl (内含0. 07M NaCl,PH7. 5)，获得卵匀浆提取液； 取Iml卵匀浆提取液加入S^hacryl S-300层析柱，用含0. 07M NaCl的25mM Tris-HCl (pH7. 5)洗脱，收集含有金鱼卵黄脂磷蛋白的样品用于离子交换层析(DEAE-Sepharose Fast Flow)，用分别含 0. 07M、0. 1M、0. 2M、0. 3M和1. OM NaCl 的 Tris-HCl缓冲液(25mM，pH7. 5)进行不连续洗脱，收集0. 2M脱组分，签定为金鱼卵黄脂磷蛋白纯品。4.如权利要求3所述的利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒，其特征在于所述的鼠抗金鱼卵黄脂磷蛋白多克隆抗体的制备方法如下 采用腹腔注...

【专利技术属性】
技术研发人员：汝少国，王军，王蔚，田华，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：