本发明专利技术公开了一种靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物及其制备方法，其特征是：药物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌单克隆抗体（BDI-1）和丝裂霉素(MMC)，其合成方法是用戊二醛为交联固化剂，把丝裂霉素分子与牛血白蛋白分子结合，制成粒径为280～350纳米的白蛋白载丝裂霉素（MMC-NS）纳米微球，然后用异型双功能连接剂N-琥珀酰亚胺基-3-（2-毗啶基二琉）丙酸酯（SPDP）使白蛋白载丝裂霉素分子连接上吡啶二硫基基团（PDP），得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP与BDI-1-SH分子反应，得到分子中含有抗人膀胱癌抗体、白蛋白分子和丝裂霉素的药物，即靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物，英文缩写为BDI-1-MMC-NS。本发明专利技术的药物对膀胱癌有很强的靶向性，对膀胱癌的杀伤力强，而对正常组织细胞作用较小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，具体说是一种分子中含有抗人膀胱癌单克隆抗体、白蛋白和丝裂霉素的药物及其制备方法。
技术介绍
膀胱癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人们的生命和健康，其中90%以上是尿路上皮癌(移行)细胞癌(transitional cell carcinoma, TCC),其中约10%最终发展为肌层浸润性或转移性膀胱癌，远期疗效不佳，由于其较高的发病率及复发率，膀胱灌注化疗对于非肌层浸润性膀胱是主要治疗方法之一。目前膀胱灌注化疗药物有丝裂霉素(简称MMC)、喜树碱、吡柔吡星、表柔比星及柔红霉素等多种。膀胱癌高复发率原因之一是对抗癌药物耐药性的产生，体外实验证实这些药物对癌细胞有明显杀伤作用，但由于其选择性太差，在杀伤癌细胞的同时也杀伤大量的正常细胞，且其有效剂量与毒性剂量往往很接近，容易出现并发症，影响病人的生活质量，如何实现化疗药物对肿瘤细胞的特异性杀伤成为提高药物治疗效果的可能途径。靶向药物的出现，大大降低了药物的副作用。所谓靶向药物治疗就是使药物瞄准肿瘤部位，在局部保存相对高的浓度，延长药物的时间，提高对肿瘤的杀伤力，而对正常组织细胞作用较小。丝裂霉素是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种广谱抗肿瘤抗生素，对多种癌症有抗癌作用，其作用原理可使细胞的DNA解聚，同时阻碍DNA的复制，从而抑制肿瘤细胞分裂。丝裂霉素为细胞周期非特异性药物，其抗肿瘤谱较广，作用迅速，但治疗指数不高，毒性较大。因此通过对丝裂霉素进行改性，制成靶向药物来降低它的副作用，成为研究的热点
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，通过乳化热固化法用戊二醛为交联固化剂，把丝裂霉素分子载在白蛋白分子上，制备成280 350nm白蛋白载丝裂霉素(MMC-NS)纳米微球，然后用异型双功能连接剂N-琥珀酰亚胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯(STOP)使白蛋白载丝裂霉素分子连接上吡啶二硫基基团，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP与BD1-1-SH分子反应，得到具有靶向性和缓释功能的抗膀胱癌药物，本专利技术的抗膀胱癌药物对膀胱癌有特异靶向性，降低了丝裂霉素的副作用，药物对肿瘤细胞杀伤力强，药效持久，且对正常组织细胞作用小。本专利技术的技术方案如下 ，其特征是药物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌单克隆抗体(BD1-1)和丝裂霉素(MMC)，合成方法是用戊二醛为交联固化剂，把丝裂霉素分子与牛血白蛋白分子结合，制成粒径为280 350纳米的白蛋白载丝裂霉素(MMC-NS)纳米微球，然后用异型双功能连接剂N-琥珀酰亚胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯使白蛋白载丝裂霉素分子连接上吡啶二硫基基团，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP与BD1-1-SH分子反应，得到分子中含有抗人膀胱癌单克隆抗体、白蛋白分子和丝裂霉素的药物，即靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物，英文缩写为BD1-1-MMC-NS。所述的白蛋白载丝裂霉素(MMC-NS)纳米微球的制备方法为 (al)用生理盐水溶解牛血白蛋白，配置成每毫升含O. 15 O. 25g的牛血白蛋白溶液，用牛血白蛋白溶液溶解丝裂霉素，配置成每毫升含O. 06 O.1OmgMMC的MMC牛血白蛋白溶液； (a2 )按照体积比，环己烷乳化剂MMC牛血白蛋白溶液为100:3. O 4. O: O. 5，把物料放入反应器中，用搅拌器搅拌均匀；用功率为200 400W的超声波乳化15min，加入戊二醛饱和甲苯溶液，加入量按照环己烷的体积计算，环己烷戊二醛饱和甲苯溶液为100:2，在20 40°C下搅拌反应2h，反应完成后把反应器内的所有物料放入离心机，在2000 4000r/min的转速下离心2min,弃去沉积的大微球,然后在500 800r/min转速下离心3min，得到所需要的纳米微球，用环己烷洗涤纳米微球，洗涤后的纳米微球加入丙酮和乙醇胺，常温搅拌lh，过滤，所得固体用异丙醇洗涤，再用丙酮洗涤，最后用冻干机冻干，得到MMC-NS冻干粉，粒径为280 350nm。所述的MMC-NS-PDP的制备方法为 (bl)用O.Olmol/L的无菌PBS缓冲溶液(即磷酸盐缓冲溶液)溶解MMC-NS，使每毫升含MMC-NS 2 3mg，与SPDP无水乙醇溶液混合，常温搅拌反应30min，投料摩尔比为SPDP:MMC-NS=20:1 ;用离心机离心，得到沉淀； (b2)用O. 01mol/L的无菌PBS缓冲溶液与沉淀混合均匀，用离心机离心，得到沉淀；(b3)重复步骤(b2)三次，以除去多余的SPDP，得到纯净的MMC-NS-PDP，用0. 02 mo I /L无菌PBS缓冲液溶解，配置成2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液。`所述的BD1-1-SH为BD1-1与SPDP反应，BD1-1分子引入吡啶二硫基(PDP)，得到BD1-1-PDP，然后用二硫苏糖醇(DTT)还原得到巯基，即为BD1-1-SH。所述的靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物(BD1-1-MMC-NS)的其制备方法，步骤为用0. 02 mo I / L无菌PBS缓冲液溶解BD1-1-SH，配置成每毫升含Img的BD1-1-SH，等体积加入b3步骤得到的2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液，在4 10°C下搅拌16 20h，然后在10000 15000r/min下离心30s 15min,取沉淀用0. 02 mo I / L无菌PBS离心洗漆3 4次，得到的沉淀物即为BD1-1-MMC-NS。所述的乳化剂为span40、span60、span80、span83和span85中的一种或它们的组合物。本专利技术的优点是1.本专利技术采用乳化热好固化法，同时使用超声乳化技术，得到的白蛋白载丝裂霉素粒径为280 350nm，纳米微球大小均匀，分散性好，表面光滑，对药物的靶向特异性有非常积极的作用。2.本专利技术通过丝裂霉素与白蛋白偶联固化，把丝裂霉素载在白蛋白上，使丝裂霉素缓慢释放，使药物的作用时间延长，减少副作用。3.本专利技术用抗人膀胱癌单克隆抗体(BD1-1)与白蛋白载丝裂霉素偶联制成靶向药物，使制成的药物对肿瘤细胞的选择性更强，绝大部分药物只靶向结合膀胱癌细胞，释放出丝裂霉素，杀死癌细胞，而不损害正常的膀胱粘膜细胞。附图说明图1为单个MMC-NS药物放大20万倍的扫描电镜 图2为形状规则、分散性良好的MMC-NS药物放大15万倍扫描电镜 图3为MMC-NS药物的粒径分布图，纳米微球的粒径测试结果粒径=314. 18±31· 093nm ； 图4为MMC-NS纳米微球与EJ人膀胱癌细胞图，从图中看出，MMC-NS很少与EJ人膀胱癌细胞结合，扫描电镜可见肿瘤细胞表面有丰富的突起和微绒毛； 图5为靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物(BD1-1-MMC-NS)与EJ人膀胱癌细胞结合图，从图中看出，BD1-1-MMC-NS与EJ人膀胱癌细胞结合得很好，BD1-1-MMC-NS把肿瘤细胞大部分覆盖了，扫描电镜可见肿瘤细胞表面突起和微绒毛明显减少，说明BD1-1-MMC-NS对肿瘤细胞有非常好的杀伤力。具体实施例方式实施例1 本专利技术的靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物的制备包括如下步骤 a.白蛋白载丝裂霉素(MMC-NS)纳米微本文档来自技高网...
【技术保护点】
靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物的制备方法，其特征是：药物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌单克隆抗体（BDI?1）和丝裂霉素（MMC），合成方法是用戊二醛为交联固化剂，把丝裂霉素分子与牛血白蛋白分子结合，制成粒径为280～350纳米的白蛋白载丝裂霉素（MMC?NS）纳米微球，然后用异型双功能连接剂N?琥珀酰亚胺基?3?（2?毗啶基二琉）丙酸酯使白蛋白载丝裂霉素分子连接上吡啶二硫基基团，得到MMC?NS?PDP分子，最后MMC?NS?PDP与BDI?1?SH分子反应，得到分子中含有抗人膀胱癌单克隆抗体、白蛋白分子和丝裂霉素的药物，即靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物，英文缩写为BDI?1?MMC?NS。
【技术特征摘要】
1.靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物的制备方法，其特征是药物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌单克隆抗体(BD1-1)和丝裂霉素(MMC)，合成方法是用戊二醛为交联固化剂，把丝裂霉素分子与牛血白蛋白分子结合，制成粒径为280 350纳米的白蛋白载丝裂霉素(MMC-NS)纳米微球，然后用异型双功能连接剂N-琥珀酰亚胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯使白蛋白载丝裂霉素分子连接上吡啶二硫基基团，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP与BD1-1-SH分子反应，得到分子中含有抗人膀胱癌单克隆抗体、白蛋白分子和丝裂霉素的药物，即靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物，英文缩写为BD1-1-MMC-NS。2.根据权利要求1所述的靶向抗膀胱癌白蛋白载丝裂霉素药物的制备方法，其特征在所述的白蛋白载丝裂霉素(MMC-NS)纳米微球的制备方法为(1)用生理盐水溶解牛血白蛋白，配置成每毫升含O.15 O. 25g的牛血白蛋白溶液，用牛血白蛋白溶液溶解丝裂霉素，配置成每毫升含O. 06 O.1OmgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；(2)按照体积比，环己烷乳化剂MMC牛血白蛋白溶液为100:3.O 4.0:0. 5，放入反应器中，用搅拌器搅拌均匀；用功率为200 400W的超声波乳化15min，加入戊二醛饱和甲苯溶液，加入量按环己烷的体积比计算，环己烷戊二醛饱和甲苯溶液100:2，在20 40°C下搅拌反应2h，反应完成后的所有物料放入离心机，在2000 4000r/min的转速下离心2min,弃去沉积的大微球,然后在500 800r/min转速下离心3min,得到所需要的纳米微球，用环己烷洗涤纳米微球，洗涤后的纳米微球加入丙酮和乙醇胺，常温搅拌lh，过滤，所得固体用异丙醇洗涤，再用丙酮洗涤，最后用冻干机冻干，得到MMC-NS冻干粉，粒径为280 350nmo3...
【专利技术属性】
技术研发人员：李云龙，周红华，
申请(专利权)人：李云龙，周红华，
类型：发明
国别省市：
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