本发明专利技术公开了黄芪总甙在制备抑制肝星状细胞迁移的药物中的应用。本发明专利技术设计了以PDGF诱导的人肝星状细胞株(LX-2)迁移的筛选平台，发现10-4mol/L～10-7mol/L的黄芪总甙均可抑制PDGF诱导的肝星状细胞(HSC)的迁移。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属中药领域，具体涉及黄芪总甙在制备抑制肝星状细胞迁移的药物中的应用。
技术介绍
黄芪总甙又名黄芪总苷，是黄芪中提取出来的主要成分，含黄酮类成分毛蕊异黄酮(calycosin)、3_轻基-9,10-二甲氧基紫檀烧,还含黄苗阜式1、V、III (astragaloside1、V、III)。有抗病毒(II型人疱疹病毒、乙肝病毒)、保肝、抑制肝癌细胞株的增殖和诱导其凋亡、改善心脏功能、抗炎镇痛等作用。黄芪总甙的动物实验研究表明，能明显抑制中性粒细胞的增生和降低炎症关节局部的细胞因子，如白细胞介素-1和一氧化氮的水平，减轻一氧化氮引起的软骨细胞凋亡等，而且毒性低，副作用小。黄芪总甙的基本生物学作用为免疫调节，这方面的工作除完成一般免疫指标的测定外，还进行了有关作用机制的研究，包括对T细胞、B细胞、杀伤细胞、肿瘤坏死因子、白细胞介素、过氧化物、一氧化氮等细胞及体液因子的作用，结果表明黄芪总甙为一优秀的免疫调节剂，某些方面超过人参皂甙，在此基础上完成或正在进行与某些疾病有关的药效学试验例如关节炎完成14个模型的研究，结果表明黄芪总甙与同类西药比，不仅有抗炎镇痛作用，而且黄芪总甙治疗风湿性、类风湿性关节炎具有疗效好、起效快、不良反应少等优点。柏长青等研究发现黄芪、党参提取物浓度达到40 % (V/V)能够抑制NC1-H446诱导的血管内皮细胞(ECV-304)迁移，并且具有显著的量效关系。各种肝脏疾病，如慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎，酒精性或非酒精性脂肪性肝病，自身免疫性肝病，药物性肝病，慢性血吸虫病以及一些代谢性或先天性慢性肝病都可通过肝纤维化发展成肝硬化。肝星状细胞Ofepatic Stellate Cell，HSC)在肝纤维化的发生发展中起着关键作用。在肝脏炎症状态下，HSC经多种细胞因子如血小板衍生生长因子(TOGF)和转化生长因子β UTGF-β I)的激活，活 化为肌成纤维细胞并大量增殖，表达α-平滑肌肌动蛋白、合成分泌大量细胞外基质，细胞可以收缩，亦可从Disse腔内向肝细胞坏死区域迁移聚集。肝纤维化进程中，HSC所表现出的迁移特性，可导致炎症区域活化的HSC数目增多，而加重病灶局部的纤维化程度，促使疾病进展。所以，如能抑制HSC在肝损伤时向炎症区域迁移，就可能干扰或减轻肝纤维化的进程，达到抗肝纤维化的目的。而HSC的迁移受到多种细胞因子和细胞外基质成分的调控，如，H)GF、TGF-13 I等；其中TOGF是最强的促进HSC增殖迁移的刺激因子。为此，本专利技术设计了以TOGF诱导的人肝星状细胞株(LX-2)迁移的筛选平台，筛选出黄芪总甙抑制HSC迁移的适宜浓度及其最佳的工作浓度。目前，对黄芪总甙在抑制肝星状细胞迁移中的作用尚未见相关报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于提供黄芪总甙的新用途。为解决上述技术问题，本专利技术提供黄芪总甙在制备抑制肝星状细胞迁移的药物中的应用。所述黄芪总甙抑制肝星状细胞迁移的有效浓度为10_4mol/L 10_7mol/L，优选为106mol/L。本专利技术设计了以TOGF诱导的人肝星状细胞株(LX-2)迁移的筛选平台，筛选出黄芪总甙抑制HSC迁移的适宜浓度及其最佳的工作浓度。实验证明10_4mOl/L、10_5mOl/L、l(T6mol/L和l(T7mol/L 4个浓度梯度的黄芪总甙均可抑制TOGF诱导的LX-2迁移。l(T4mol/L组、10_5mol/L组、10_6mol/L组抑制作用相似无统计学差异，lO^mol/L抑制作用较弱且与其它3组间有显著差异(P均< O. 05)。在与迁移同等条件下培养细胞时发现，10_4mOl/L组部分胞体回缩成卵圆形，其余3组较正常组细胞形态无任何改变。遵从药物筛选原则，排除10_4mol/L黄芪总甙，选择有统计学差异中的低浓度者，即抑制迁移效率最佳者；因此，选择黄苗总式最佳药物浓度为ΙθΛιοΙ/L。从而本专利技术验证了 ΙθΛιοΙ/L l(T7mol/L的黄苗总甙均可抑制TOGF诱导的肝星状细胞(HSC)的迁移，从而可干扰或减轻肝纤维化的进程，达 到抗肝纤维化的效果，即本专利技术验证了黄芪总甙可用于制备抑制肝星状细胞迁移的药物。附图说明图1是本专利技术试验例中细胞迁移杯(Transwell)的示意图；细胞迁移杯为一个可放置在孔板里的小杯子，其关键部分就是杯底层一张半透膜(一般是聚碳酸酯膜)此膜有密度均一的许多微孔，孔径为8. O μ m。将Transwell放入24孔培养板中形成Transwell与培养板的双腔系统，Transwell内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以半透膜相隔。将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，上层中的细胞亦可迁移至下层，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。图2是本专利技术试验例中不同浓度黄芪总甙对LX-2迁移和形态学的影响示意图；图2A表示对TOGF诱导的人LX-2迁移的抑制(苏木素染色，X 200)；图2B表示对LX-2形态的影响，X 200。具体实施例方式以下通过试验例对本专利技术黄芪总甙的药理活性试验及结果作进一步的阐述试验例一、材料与方法(一)材料黄苗总式Astragaloside,分子式(C41H68O51),分子量785,纯度彡95% (by高效液相色谱法HPLC)，购自于南京泽朗医药科技有限公司。人肝星状细胞株LX-2，其制备方法为约15g重正常人肝脏组织先后经链酶蛋白酶和胶原酶消化后，由8. 2% Nycodenz离心分离得肝星状细胞(HSC)。细胞用含10%胎牛血清的M199培养液培养。当细胞长满培养皿后，用胰蛋白酶和EDTA消化传代，每7_10传代一次。当HSC培养传到4代，将SV40T-抗原DNA转染入HSC，获得细胞株LX-1。该细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养7代后，与原代细胞相比形态发生明显变化，增殖加快。LX-2是以含I %胎牛血清的DMEM培养液培养半年后筛选得到的耐低血清(2%胎牛血清)培养的细胞株(具体参见L Xu, A Y Hui,E Albanis,M J Arthur, S M 0’Byrne,WS Blaner,PMukherjee,S L Friedman,F J Eng. Human hepatic stellate cell lines,LX-1and LX-2 new tools for analysis of hepatic fibrosis Gut 2005;54:142-151·)。0. 1% I 型胶原溶液(Col I，lot 107K2331)(美国 sigma 公司)。PDGF(血小板衍生生长因子)，分子量12. 4kDa, Cat. No. 220BB，纯度> 97% (SDSPAGE)购于 R&D Systems, Inc。( 二 )方法1.黄芪总甙浓度配制黄芪总甙取20mg。黄芪总甙溶于2. 5ml DMSO (二甲基亚砜)中，成10_2mol/L储存液。将上述黄芪总甙储存液均分别经0. 45 μ m滤膜过滤除菌，以含3 % FBS的DMEM培养基依次稀释为 l(T4mol/L，l(T5mol/L，l(T6mol/L，l(T7mol/L 共 4本文档来自技高网...
【技术保护点】
黄芪总甙在制备抑制肝星状细胞迁移的药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐列明，张展，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属曙光医院，
类型：发明
国别省市：
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