本发明专利技术公开了一种靶向肝脏的caspase-1抑制剂，由人乙型肝炎病毒Pre-S1肽通过柔性接头与caspase-1抑制剂连接而成，Pre-S1肽由Pre-S1蛋白的第1-50位氨基酸组成，caspase-1抑制剂由YVAD四肽的三分子聚合物通过柔性接头与VAD三肽的三分子聚合物连接而成；该制剂利用特异性靶向肝脏的载体Pre-S1肽将caspase-1抑制剂特异性靶向肝细胞，既有利于通过终止肝细胞内的caspase-1活化来阻断由损伤肝细胞释放的内源性危险信号导致的肝内持续性慢性炎症，进而阻断肝细胞的继发性损伤，也有利于减少caspase-1广泛抑制可能导致的机体不良反应，从而对肝细胞起到特异有效的保护，可用于制备由损伤肝细胞释放的内源性危险信号导致的肝内慢性炎症的治疗药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种酶抑制剂及其在医药领域中的用途。
技术介绍
以慢性肝炎为主要原因导致的慢性肝损伤是我国的重大健康问题，也是当前世界卫生组织公布的人类主要死亡病因之一。慢性肝脏炎症一旦启动，难以终止，进一步造成肝硬化、肝功能衰竭、肝癌的发生，称为“慢性肝病三步曲”；并且，肝细胞的损伤也难以终止，被喻为“永不愈合的创伤”。既往研究认为，病毒在肝内的活动是肝内炎症持续存在的重要原因，所以抗病毒治疗是目前治疗慢性乙肝最常采用的方式。但研究发现，即使是有效抑制了病毒复制，也难以终止慢性乙肝进展到肝硬化/肝功能衰竭的恶性病程，而这恰恰是慢性乙肝的主要危害。目前临床尚无能够阻断慢性肝炎恶性进展的有效治疗策略和治疗药物。炎症体(inf Iammasome )在炎症应答和免疫调控中具有重要作用，通过感知各种内源性和外源性的危险信号，活化以caspase-1为主的激酶，促进IL-I P的分泌，启动炎症应答，生理状况下，清除感染和死亡细胞，维持机体内环境稳态，也有报道caspase-1的异常活化与多种自身免疫病或自身炎症性疾病相关。
技术实现思路
根据专利技术人和其他研究人员的最新研究结果，炎症体与慢性肝损伤包括慢性乙肝病毒感染相关的慢性肝炎密切相关。专利技术人的研究结果显示慢性乙肝的炎症持续原因并不仅仅包括乙肝病毒的活动，也能由损伤肝细胞特别是凋亡肝细胞释放的内源性危险信号引起；这些内源性危险信号以损伤肝细胞释放的ATP为代表，通过活化炎症体，导致肝内慢性炎症和慢性损伤。同时，专利技术人在肝细胞等组织细胞中的研究也发现，肝细胞(一种非免疫细胞)中也存在caspase-1的应答机制，肝内微环境中常见的内源性危险信号(如HMGB1、尿酸、ATP等)能够有效启动肝细胞内caspase-1的活化，进而促进炎症应答。因此，阻断肝细胞内caspase-1的活化有可能阻断由损伤肝细胞释放的内源性危险信号导致的肝内慢性炎症，进而阻断肝细胞的继发性损伤和慢性肝炎的恶性进展。有鉴于此,本专利技术的目的之一在于研制一种祀向肝脏的caspase-1抑制剂，并考察其是否可以通过终止肝细胞内的caspase-1活化来阻断由损伤肝细胞释放的内源性危险信号导致的肝内慢性炎症，进而阻断肝细胞的继发性损伤，同时避免caspase-1广泛抑制可能引起的机体不良反应，最终实现对肝细胞特异有效的保护；目的之二在于提供所述革巴向肝脏的caspase-1抑制剂在制药领域中的用途。经过研究，本专利技术提供如下技术方案 I.祀向肝脏的caspase-1抑制剂，由人乙型肝炎病毒Pre-Sl肽通过柔性接头与caspase-1抑制剂连接而成,所述Pre-Sl肽由Pre-Sl蛋白的第1_50位氨基酸组成,所述caspase-1 抑制剂由 YVAD (Tyr-Val-Ala-Asp)四妝的三分子聚合物即 Tyr-Val-Ala-Asp-Tyr-Val-Ala-Asp-Tyr- Val-Ala-Asp 通过柔性接头与 VAD (Val-Ala-Asp)三肽的三分子聚合物即 Val-Ala-Asp-Val-Ala- Asp-Val-Ala-Asp 连接而成。进一步,所述祀向肝脏的caspase-1抑制剂由SEQ ID No. I所示的氨基酸序列组成，即所述Pre-Sl肽与caspase-1抑制剂之间的柔性接头以及YVAD肽三分子聚合物与VAD肽三分子聚合物之间的柔性接头均由3个甘氨酸组成。2.所述靶向肝脏的caspase-1抑制剂在制备由损伤肝细胞释放的内源性危险信号导致的肝内慢性炎症的治疗药物中的用途。本专利技术的有益效果在于本专利技术利用特异性靶向肝脏的载体Pre-Sl肽与caspase-1抑制剂连接,制得了一种祀向肝脏的caspase-1抑制剂,并对其药理活性进行了实验研究。研究结果显示，该靶向肝脏的caspase-1抑制剂能够特异有效地被原代肝细胞 摄取，能够有效抑制由内源性危险信号ATP启动的原代肝细胞内caspase-1的活化，减少促炎症细胞因子IL-I P的产生，并能够有效阻断由内源性危险信号ATP启动的原代肝细胞的死亡，从而初步证实了可以通过阻断肝细胞内caspase-1的活化来阻断由损伤肝细胞释放的内源性危险信号导致的肝内持续性慢性炎症，进而阻断肝细胞的继发性损伤，这是治疗慢性肝炎的一种创新性策略，可能阻断慢性肝炎的恶性进展，将是目前常规临床治疗方式的重要且必要的补充。将caspase-1抑制剂特异性靶向肝脏，不仅有利于终止肝细胞内的caspase-1活化，而且有利于减少全身系统性的caspase-1抑制可能导致的严重的内环境紊乱和免疫缺陷等不良反应，从而实现对肝细胞特异有效的保护。因此，本专利技术的靶向肝脏的caspase-1抑制剂可用于制备由损伤肝细胞释放的内源性危险信号导致的肝内慢性炎症的治疗药物，在终止包括慢性乙肝在内的各种慢性肝炎病程进展方面具有潜在、良好的应用前景。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作进一步描述，其中 图I为流式细胞仪检测原代肝细胞对靶向肝脏的caspase-1抑制剂的摄取比例，其中a表示阴性对照(荧光标记的无关七肽)，b表示荧光标记的靶向肝脏的caspase-1抑制剂，c表示突光标记的caspase-1抑制剂。图2为蛋白免疫印迹检测靶向肝脏的caspase-1抑制剂对内源性危险信号ATP启动的原代肝细胞内caspase-1活化的影响,其中I表示未干预的正常肝细胞,显示有大量的caspase-1活化后产生的plO亚单位,2、3、4分别表不祀向肝脏的caspase-1抑制剂5 ii M、20iiM、40iiM 处理组。图3为ELISA实验检测靶向肝脏的caspase-1抑制剂对内源性危险信号ATP启动原代肝细胞内Caspase-I活化后产生IL_1 ^能力的影响。图4为乳酸脱氢酶释放实验检测靶向肝脏的caspase-1抑制剂对内源性危险信号ATP启动的原代肝细胞死亡的影响。图3和图4中“block”表不革巴向肝脏的caspase-1抑制剂。具体实施方式以下将参照附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。一、革巴向肝脏的caspase-1抑制剂的制备 设计并委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成氨基酸序列如SEQ ID No. I所示的靶向肝脏的caspase-1抑制剂。在SEQ ID No. I所示序列中，第1_50位氨基酸为来源于乙型肝炎病毒株FMC#97的Pre-Sl蛋白的第1_50位氨基酸序列，第51-53位氨基酸为柔性接头，第54-65位氨基酸为YVAD (Tyr-Val-Ala-Asp)四肽的三分子聚合物，第66-68位氨基酸为柔性接头，第69-77位氨基酸为VAD (Val-Ala-Asp)三肽的三分子聚合物。同时,合成缺少祀向载体的caspase-1抑制剂作为对照，即从SEQ ID No. I所示序 列中去除第1-53位氨基酸。二、祀向肝脏的caspase-1抑制剂的活性检测 I、人原代肝细胞的培养 取非HBV相关的肝癌患者外科手术肿瘤切除的无相邻的正常组织，按文献方法(Methods for pr本文档来自技高网...
【技术保护点】
靶向肝脏的caspase?1抑制剂，其特征在于，由人乙型肝炎病毒Pre?S1肽通过柔性接头与caspase?1抑制剂连接而成，所述Pre?S1肽由Pre?S1蛋白的第1?50位氨基酸组成，所述caspase?1抑制剂由YVAD四肽的三分子聚合物即Tyr?Val?Ala?Asp?Tyr?Val?Ala?Asp?Tyr?Val?Ala?Asp通过柔性接头与VAD三肽的三分子聚合物即Val?Ala?Asp?Val?Ala?Asp?Val?Ala?Asp连接而成。
【技术特征摘要】
1.革巴向肝脏的caspase-1抑制剂,其特征在于，由人乙型肝炎病毒Pre-Sl肽通过柔性接头与caspase-Ι抑制剂连接而成,所述Pre-Sl肽由Pre-Sl蛋白的第1_50位氨基酸组成， 所述caspase-Ι抑制剂由YVAD四妝的三分子聚合物即Tyr-Val-Ala-Asp-Tyr-Val-Ala-As p-Tyr-Val-Ala-Asp通过柔性接头与VAD三肽的三分子...
【专利技术属性】
技术研发人员：王靖雪，吴玉章，刘钱，刘宏利，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：
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