本发明专利技术提供了一种齿瓣石斛的鉴定方法，该方法由以下步骤组成：首先取待测药材细粉加入80%的甲醇溶液进行提取，所得提取物进行脱脂纯化后加入80%的甲醇溶液溶解作为供试品溶液，然后按以下方法进行高效液相色谱检测：按进样量为5～20μl对以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱进样，控制柱温20～40℃，接着用由A相和B相组成的流动相以0.8～1.2ml/min的流速并按表1的程序进行梯度洗脱，同时采用检测波长为340nm的紫外光检测洗脱液，获得所测药材的高效液相图谱，该高效液相图谱具有表2所示的特征峰。本发明专利技术方法不但具有样品制备方法简便、稳定、重复性好等优点，而且还解决了现有技术不能将杯鞘石斛与齿瓣石斛分开的技术难题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体涉及采用柱色谱法鉴定中药材齿瓣石斛。
技术介绍
石斛属(Dendrobium)是兰科植物中的第二大属，我国有76种(74个种,2个变种)，主要分布于华南及西南地区，有近40种可作药用。石斛为名贵中药材，在我国使用历史悠久，药用始载于《神农本草经》，列为上品，“味甘，平。主伤中，除痹，下气，补五脏，虚劳羸弱，强阴。久服厚肠胃，轻身延年”。具有益胃生津，滋阴清热的功效，主治热病伤津，胃痛干呕，肺燥干咳，腰膝软弱等症(国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草，第八册.上海上海科学技术出版社，1999. 711.)。现代药理实验证明，它们具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抗血小板聚集、扩张血管、降低血糖等多种活性(郁美娟，孟庆华，黄德音，等.石斛属植物有效成分及药理作用研究.中成药，2003，25 (11 ):918-921. 林萍，毕志明，徐红，等.石斛属植物药理活性研究进展.中草药，2003，34 (11):附19-22.)。齿瓣石斛(Dendrobium devonianum Paxt.)为近年开发应用的药用石斛佳品,俗称紫皮石斛、紫皮兰、小黄草等，主要分布于我国云南、广西、贵州等省，緬甸、越南、老挝、泰国也有较多分布。齿瓣石斛主要用其当年生的幼嫩茎加工生产紫皮枫斗、紫皮芽。由于铁皮石斛资源的枯竭，齿瓣石斛作为铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimuraet Migo)的替代资源开始在市场上大量流通，其价格和质量仅次于铁皮石斛(明兴加，张明，陶文静.名贵中药齿瓣石斛的开发前景.重庆中草药研究，2006，(2) :51-54.)。由于齿瓣石斛的资源比铁皮石斛丰富，栽培较铁皮石斛容易，产量较高，因此近年来齿瓣石斛的种植发展较快。齿瓣石斛的质重、富光泽、黏性强等优良的品质，被人们视为替代铁皮枫斗的药材珍品，销往国内外，由齿瓣石斛加工成的紫皮枫斗、紫皮芽的产量远远超过铁皮枫斗，已成为品质佳的石斛主流产品(李满飞，徐国钧，徐珞珊，等.商品石斛的调查及鉴定(II ).中草药，1991，22 (4) :173-176,180. 包雪声，顺庆生，叶愈青，等.石斛类药材枫斗的历史及现状.中药材，1999,22(10) :540-542.)。据调查市场上由齿瓣石斛加工而成的紫皮枫斗的价格和质量仅次于铁皮石斛(明兴加，张明，陶文静.名贵中药齿瓣石斛的开发前景.重庆中草药研究，2006，(2) :51-54.)，但由于市场上铁皮枫斗价格昂贵，数量稀少，因此市场有以紫皮枫斗代之的现象；由于从外观性状不易区分齿瓣石斛和铁皮石斛，因此在相当程度上造成了市场的混乱与不规范。齿瓣石斛与铁皮石斛的生药学性状与显微特征，虽有一定的区别.海峡药学，2011，23 (4):52-53.]，但依靠经典的鉴别方法仍难以准确地进行种间鉴别。采用rDNA ITS序列数据库可完成铁皮石斛、齿瓣石斛、兜唇石斛等多种鲜品(无花、无叶状态下)的鉴别.药学学报，2002，37(7):567-573.]，采用PCR技术能鉴别紫皮枫斗.药学学报，2002，37 (11) =897-901.]，但绝大多数药检部门尚不具备DNA、PCR测序条件，依靠DNA序列、PCR技术分析鉴别石斛种类的实用性受到很大限制。鉴于指纹图谱在药材质量控制上的优势，白音博士采用以甲醇(A) -/JC(B)为流动相，采用HPLC法结合聚类分析的方法对42种石斛进行了鉴别.北京中医药大学博士学位论文，2007年]，结果显示，白音博士的方法能够鉴别翘梗石斛等40种石斛，但仍然没有将杯鞘石斛与齿瓣石斛分开。综上所述，寻求具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，该方法所得到的图谱不仅基线稳定，色谱峰分离度好，而且不需要复杂的聚类分析。 本专利技术实现上述目的技术方案如下所述，该方法由以下步骤组成( I)取待测药材细粉，加入10 30倍(质量体积倍)量体积浓度为80%的甲醇溶液，超声提取I 3次,每次30 50min,滤过,合并滤液,减压蒸干,残洛用沸点为60 90°C的石油醚浸泡两次，每次2 5ml，每次浸泡2min，倾去石油醚液，残渣加体积浓度为80%的甲醇溶液溶解，并使得每Iml药液中含相当于O. 5 2. Og齿瓣石斛细粉，摇匀，取上清液用O. 45 μ m微孔滤膜过滤得供试品溶液；(2)然后，将供试品溶液按以下方法进行高效液相色谱检测按进样量为5 20 μ I对以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的规格是柱长为25cm、内径为4. 6mm和粒径为5 μ m的色谱柱进样，控制柱温20 40°C，接着用由A相和B相组成的流动相以O. 8 I. 2ml/min的流速并按下表I的程序进行梯度洗脱，同时采用检测波长为340nm的紫外光检测洗脱液，获得所测药材的高效液相图谱，该高效液相图谱具有以下特征峰I号峰，保留时间RT为56. 01 ±0. 97min，相对峰面积为10. 45%±2. 52% ；2号峰，保留时间RT为62. 91 ± I. 20min，相对峰面积为15. 41%±3· 62% ；3号峰，保留时间RT为64. 54±1· 23min，相对峰面积为10. 44%±2. 60% ；4号峰，保留时间RT为65. 78±1· 17min，相对峰面积为12. 33±1· 92% ；5号峰，保留时间RT为71. 17±0· 84min，相对峰面积为14. 78%±3. 25% ；6号峰，保留时间RT为73. 60±0· 67min，相对峰面积为12. 15%±4. 10% ；7号峰，保留时间RT为74. 44±0· 69min，相对峰面积为24. 44%±6. 52% ；表I洗脱程序表权利要求1.，该方法由以下步骤组成 (1)取待测药材细粉，加入10 30倍量体积浓度为80%的甲醇溶液，超声提取I 3次，每次30 50min，滤过，合并滤液，减压蒸干，残渣用沸点为60 90°C的石油醚浸泡两次，每次2 5ml，每次浸泡2min，倾去石油醚液，残渣加体积浓度为80%的甲醇溶液溶解，并使得每Iml药液中含相当于O. 5 2. Og齿瓣石斛细粉，摇匀，取上清液用O. 45 μ m微孔滤膜过滤得供试品溶液； (2)然后，将供试品溶液按以下方法进行高效液相色谱检测 按进样量为5 20 μ I对以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的规格是柱长为25cm、内径为4. 6mm和粒径为5 μ m的色谱柱进样，控制柱温20 40°C，接着用由A相和B相组成的流动相以O. 8 I. 2ml/min的流速并按下表I的程序进行梯度洗脱，同时采用检测波长为340nm的紫外光检测洗脱液，获得所测药材的高效液相图谱，该高效液相图谱具有以下特征峰 I号峰，保留时间RT为56. 01 ±0. 97min，相对峰面积为10. 45%±2. 52% ； 2号峰，保留时间RT为62. 91 ± I. 20min，相对峰面积为15. 41%±3· 62% ； 3号峰，保留时间RT为64. 54±1· 23min，相对峰面积为10. 44%±2. 60% ； 4号峰，保留时间RT为65. 78±1· 17min，相对峰面积为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种齿瓣石斛的鉴定方法，该方法由以下步骤组成：（1）取待测药材细粉，加入10～30倍量体积浓度为80%的甲醇溶液，超声提取1～3次，每次30～50min，滤过，合并滤液，减压蒸干，残渣用沸点为60～90℃的石油醚浸泡两次，每次2～5ml，每次浸泡2min，倾去石油醚液，残渣加体积浓度为80%的甲醇溶液溶解，并使得每1ml药液中含相当于0.5～2.0g齿瓣石斛细粉，摇匀，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤得供试品溶液；（2）然后，将供试品溶液按以下方法进行高效液相色谱检测：按进样量为5～20μl对以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的规格是柱长为25cm、内径为4.6mm和粒径为5μm的色谱柱进样，控制柱温20～40℃，接着用由A相和B相组成的流动相以0.8～1.2ml/min的流速并按下表1的程序进行梯度洗脱，同时采用检测波长为340nm的紫外光检测洗脱液，获得所测药材的高效液相图谱，该高效液相图谱具有以下特征峰：1号峰，保留时间RT为56.01±0.97min，相对峰面积为10.45%±2.52%；2号峰，保留时间RT为62.91±1.20min，相对峰面积为15.41%±3.62%；3号峰，保留时间RT为64.54±1.23min，相对峰面积为10.44%±2.60%；4号峰，保留时间RT为65.78±1.17min，相对峰面积为12.33±1.92%；5号峰，保留时间RT为71.17±0.84min，相对峰面积为14.78%±3.25%；6号峰，保留时间RT为73.60±0.67min，相对峰面积为12.15%±4.10%；7号峰，保留时间RT为74.44±0.69min，相对峰面积为24.44%±6.52%；表1其中，所述流动相的A相是乙腈；所述流动相的B相是体积浓度为0.1%～0.3%的甲酸溶液。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄月纯，魏刚，杨丽娥，刘东辉，
申请(专利权)人：广州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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