利用硅胶色谱柱测定棉籽糖含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用硅胶色谱柱测定棉籽糖含量的方法，该方法的测定步骤为：（1）用有机胺类物质作为硅胶表面氨基的改善剂，将其加入到流动相中，活化处理硅胶色谱柱；（2）用活化好的硅胶色谱柱对检测样品的提取液进行色谱分离，色谱分离时的流动相中添加有有机胺类物质；（3）经色谱柱分离的各组分进入蒸发光散射检测器中进行检测，即可得到检测样品中的棉籽糖含量。本方法采用动态氨基修饰法对硅胶柱进行氨基修饰，然后利用高效液相色谱配合蒸发光散射检测器进行棉籽糖的检测，充分利用了硅胶色谱柱，不必购买昂贵的糖分析柱，而且检测结果准确，检出限低，具有分离度和灵敏度高，适应性强，而且成本低廉的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种测定食品、饮料中棉籽糖含量的方法，尤其是一种。
技术介绍
棉籽糖是一种由三个单糖(果糖、葡萄糖、半乳糖)组成的新型功能性低聚糖。是除蔗糖以外，在自然界分布最广的一种低聚糖。棉籽糖也被称为蜜三糖、棉实糖、桉糖，是一种微生物和酶不能合成的功能性低聚糖，目前主要从棉籽柏和甜菜糖蜜中提取。由于棉籽糖能够顺利的通过胃肠道而不被吸收，是人体肠道中双歧杆菌等益生菌的增殖因子，可以促进钙原子的吸收，从而增强了人体免疫力，而且其还能够抑制肠内腐败产物、改善排便功能、防止便秘及增强机体免疫力、抵抗肿瘤等，因此其越来越受到人们的重视。目前对于棉籽糖的检测方法有比色法、薄层色谱法和高效液相色谱法等。但是由于比色法和薄层色谱法检测定性能力差，易受杂质成分的干扰而导致检测不准，通用的高效液相色谱法多使用寿命较短的氨基柱或者是昂贵的多糖分析柱，使用成本高，不利于广大食品企业的推广。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种定性效果强、定量准确的测定棉籽糖含量的方法。为解决上述技术问题，本专利技术的测定步骤为(1)用有机胺类物质作为硅胶表面氨基的改善剂，将其加入到流动相中，活化处理硅胶色谱柱；(2)用活化好的硅胶色谱柱对检测样品的提取液进行色谱分离，色谱分离时的流动相中添加有有机胺类物质；(3)经色谱柱分离的各组分进入蒸发光散射检测器中进行检测，即可得到检测样品中的棉籽糖含量。本专利技术所述步骤(I)和(2 )中的有机胺类物质均为乙二胺；所述步骤(I)和(2 )中的流动相均为乙腈水。所述乙腈水的体积比均为乙腈水=2.6:1。所述步骤(I)中乙二胺在流动相中的体积分数为O. 3% ;所述步骤(2)中乙二胺在流动相中的体积分数为O. 03%。本专利技术所述步骤(I)中活化时流动相的冲洗体积为100个柱体积。所述步骤(2) 中流动相的流速为I. OmL/min。本专利技术所述步骤(3)中蒸发光散射检测器的参数为漂移管温度为85°C，气体流速为2. 2L/min，模式为不分流模式。所述步骤(3)检测时采用外标法定量。本专利技术所述硅胶色谱柱的规格为15Qmm*4. 6mm ,粒径 5 Mm。本专利技术所述步骤(2)中提取液是将检测样品用水超声提取，然后过滤而得。所述提取时检测样品与水的质量体积比为1:25，超声时间为15 25min，采用O. 45 |Jm滤膜过滤。采用上述技术方案所产生的有益效果在于本专利技术采用动态氨基修饰法对硅胶柱进行氨基修饰，然后利用高效液相色谱配合蒸发光散射检测器进行棉籽糖的检测，充分利用了硅胶色谱柱，不必购买昂贵的糖分析柱，而且检测结果准确，检出限低，具有分离度和灵敏度高，适应性强，而且成本低廉的特点。本专利技术定性效果强，定量准确，检出限可低至10mg/L，可准确地测定食品、饮料等中的棉籽糖含量；本专利技术检测效果好，可有效避免峰拖尾现象，分析方法准确快速，干扰小。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。图I是本专利技术棉籽糖标准品的液相色谱图；图2是本专利技术检测样品的液相色谱谱图。具体实施方式实施例本采用下述测定步骤。试验条件高效液相色谱仪，配备蒸发光散射检测器；所用试剂均为色谱纯，色谱柱选择规格为15Qmm*4a 6mm、粒径5 ,的硅胶柱；流动相为乙腈水，流动相体积比乙腈 水=2. 6:1 ;蒸发光散射检测器的漂移管温度85°C，气体流速2. 2L/min，不分流模式；进样量为20 μ L ;系统记录色谱，以保留时间定性，以峰面积作为信号响应值，对棉籽糖进行定量分析。(I)配制含体积分数O. 3%乙二胺的乙腈/水(体积比2. 6:1)溶液300mL，超声脱气、冲洗活化色谱柱，流速从O. 3mL/min逐渐增大至lmL/min，总共冲洗100个柱体积，再以含体积分数O. 03%乙二胺的乙腈/水(体积比2.6:1)作为流动相平衡色谱柱，流速I. OmL/ min。(2)准确称取棉籽糖标准品lOOmg，转移至50mL容量瓶中，用水溶解后定容，得到浓度约为2000mg/L的标准储备溶液，置于冰箱中避光保存。使用前用水稀释成O. 05,0. I、 O. 3,0. 5、0. 7和lmg/mL系列标准溶液。按上述试验条件高效液相色谱配合蒸发光散射检测器进行检测，液相色谱图见图I ;标准品进样做标准曲线进行分析，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标做图进行分析或者以峰面积和浓度的双对数进行作图分析，见表I。权利要求1.一种，其特征在于，该方法的测定步骤为(1)用有机胺类物质作为硅胶表面氨基的改善剂，将其加入到流动相中，活化处理硅胶色谱柱；(2)用活化好的硅胶色谱柱对检测样品的提取液进行色谱分离，色谱分离时的流动相中添加有有机胺类物质；(3)经色谱柱分离的各组分进入蒸发光散射检测器中进行检测，即可得到检测样品中的棉籽糖含量。2.根据权利要求I所述的，其特征在于所述步骤(I)和(2)中的有机胺类物质均为乙二胺；所述步骤(I)和(2)中的流动相均为乙腈水。3.根据权利要求2所述的，其特征在于所述乙腈水的体积比均为乙腈水=2.6:1。4.根据权利要求2所述的，其特征在于所述步骤(I)中乙二胺在流动相中的体积分数为O. 3% ;所述步骤(2)中乙二胺在流动相中的体积分数为O. 03%。5.根据权利要求2所述的，其特征在于所述步骤(I)中活化时流动相的冲洗体积为100个柱体积。6.根据权利要求2所述的，其特征在于所述步骤(2)中流动相的流速为I. OmL/min。7.根据权利要求I一 5任意一项所述的，其特征在于所述步骤(3)中蒸发光散射检测器的参数为漂移管温度为85°C，气体流速为2. 2L/ min,模式为不分流模式。8.根据权利要求I一 5任意一项所述的，其特征在于所述娃胶色谱柱的规格为150mm*4. 6mm,粒径5 μ m。9.根据权利要求I一 5任意一项所述的，其特征在于所述步骤(2)中提取液是将检测样品用水超声提取，然后过滤而得。10.根据权利要求9所述的，其特征在于所述提取时检测样品与水的质量体积比为1:25，超声时间为15 25min，采用O. 45 μ m滤膜过滤。全文摘要本专利技术公开了一种，该方法的测定步骤为(1)用有机胺类物质作为硅胶表面氨基的改善剂，将其加入到流动相中，活化处理硅胶色谱柱；(2)用活化好的硅胶色谱柱对检测样品的提取液进行色谱分离，色谱分离时的流动相中添加有有机胺类物质；(3)经色谱柱分离的各组分进入蒸发光散射检测器中进行检测，即可得到检测样品中的棉籽糖含量。本方法采用动态氨基修饰法对硅胶柱进行氨基修饰，然后利用高效液相色谱配合蒸发光散射检测器进行棉籽糖的检测，充分利用了硅胶色谱柱，不必购买昂贵的糖分析柱，而且检测结果准确，检出限低，具有分离度和灵敏度高，适应性强，而且成本低廉的特点。文档编号G01N30/02GK102937628SQ20121042194公开日2013年2月20日 申请日期2012年10月30日 优先权日2012年10月30日专利技术者王磊, 温盼来, 张伟, 杨清山, 张永哲 申请人:晨光生物科技集团股份有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用硅胶色谱柱测定棉籽糖含量的方法，其特征在于，该方法的测定步骤为：（1）用有机胺类物质作为硅胶表面氨基的改善剂，将其加入到流动相中，活化处理硅胶色谱柱；（2）用活化好的硅胶色谱柱对检测样品的提取液进行色谱分离，色谱分离时的流动相中添加有有机胺类物质；（3）经色谱柱分离的各组分进入蒸发光散射检测器中进行检测，即可得到检测样品中的棉籽糖含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，温盼来，张伟，杨清山，张永哲，
申请(专利权)人：晨光生物科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：