一种培养坐骨神经许旺细胞的方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学领域，涉及一种培养成年小鼠坐骨神经许旺细胞的方法。本发明专利技术还包括经过纯化过程获得更高的纯度的许旺细胞的方法。获得的许旺细胞纯度达到91％，再纯化后其纯度高达98％，结果表明，由于体外的预变性促进了许旺细胞的增殖从而抑制了成纤维的增值，能获得有较高的纯度的许旺细胞。本发明专利技术方法通过体外预变性的坐骨神经培养及纯化步骤，能简单、有效的获取大量、高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供了丰富、优质的许旺细胞，可用于在组织工程中作为神经种子细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞生物学领域，涉及，具体涉及一种通过体外预变性的坐骨神经培养及纯化许旺细胞的方法。
技术介绍
研究报道，组织工程化人工神经的发展为周围神经损伤修复提供了一种新的途径，其中，许旺细胞(Schwann cell, SC)作为组织工程化人工神经的种子细胞，在周围神经损伤的修复中发挥了重要作用。所述许旺细胞的存在为神经轴突的再生提供了良好的微环境，其通过分泌相应的神经生长因子及细胞外基质引导轴突向远端生长；但由于SC是一种终末期细胞，直接取材进行许旺细胞培养，细胞很难贴壁，扩增差，很难得到高纯度及大量的SC，因此，限制了人工神经在临床上的应用。目前，国内外许多学者研究将干细胞向类许旺细胞诱导来解决此难题，但存在诱导率低、诱导条件撤离后再次向干细胞形态转归及致瘤性等缺点，因此限制了其进一步的应用。·解决上述问题的根本是获得大量的高纯度的增值能力强的许旺细胞，而实现这一目的的较佳途径就是进行许旺细胞尤其是成年体的许旺细胞体外培养，从而扩增获得足够量的细胞满足人工神经的需要。但成年许旺细胞作为一种终末细胞，其增殖能力差，很难在体外培养、扩增。目前有研究表明，SC在生长发育的不同阶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养成年小鼠坐骨神经许旺细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将获取的神经段分别置于DMEM+10％FBS、许旺细胞培养液(SCCM)中，5％CO2，37℃培养箱中，孵育，进行预变性，每隔3天换液一次；(2)一周后吸除培养液，剪碎处理上述神经段，用3？20倍组织量的质量体积比为0.05～0.3％的消化酶溶液消化神经组织碎块45～90分钟；(3)将步骤(2)得到的混悬液用吸管反复吹打3～5分钟，获得解离的细胞；(4)对步骤(3)解离的细胞在600？1500g离心3？10分钟，弃上清，得到细胞团块；(5)用许旺细胞培养液(SCCM)重悬步骤(4)得到的细胞，以1x104？5x104个/c...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓盼，沈尊理，秦金保，金羽青，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：