玉米事件DP-004114-3及其检测方法技术

本发明专利技术提供了涉及转基因抗昆虫性玉米植物的DNA组合物。也提供了基于插入玉米基因组中的重组构建体的DNA序列和在插入位点侧翼的DNA序列检测玉米DP-004114-3事件的存在的测定法。提供了在实施所述测定法中有用的试剂盒和条件。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的实施方式涉及植物分子生物学领域，本专利技术的实施方式具体地涉及用于向植物赋予昆虫抗性的DNA构建体。本专利技术的实施方式更具体地涉及抗昆虫性玉米植物事件DP-004114-3并且涉及用于检测样品及其组合物中玉米事件DP-004114-3的存在的测定法。
技术介绍
本专利技术的实施方式涉及抗昆虫性玉米(玉蜀黍(Zea mays))植物DP-004114-3,也称作“玉米系DP-004114-3”、“玉米事件DP-004114-3”和“4114玉米”，并且涉及玉米植物DP-004114-3的DNA植物表达构建体和在玉米植物DP-004114-3及其子代中检测转基因/·侧翼插入区域。玉米是一种重要作物并且是世界许多地区的主要食物来源。尽管采用了诸如化学杀虫剂之类的保护性措施，然而由害虫造成的损害仍是世界范围玉米作物损耗的主要因素。有鉴于此，已经将抗昆虫性基因工程化至作物如玉米中，以控制昆虫损害并降低对传统化学杀虫剂的需要。已经用于产生转基因抗昆虫性作物的一组基因是来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) (Bt)的δ-内毒素类。δ -内毒素已经成功地表达于农作植物如棉属植物、马铃薯、稻、向日葵以及玉米中，并且已经证明提供了优异的病害昆虫控制作用。(Perlak, F. J 等人，(1990) Bio/Technology 8 :939-943 ；Perlak, F. J.等人，(1993)Plant Mol. Biol. 22 :313-321 ；Fujimoto,H.等人，(1993) Bio/Technology 11 :1151-1155 ；Tu 等人，(2000) Nature Biotechnology 18 :1101-1104 ;PCT 公开 WO 01/13731 ;和 Bing，J. ff.等人，(2000) Efficacy of Cry IF Transgenic Maize, 14th Biennial InternationalPlant Resistance to Insects Workshop, Fort Collins, CO)。已知外来基因在植物中的表达受它们在植物基因组中的位置影响，这可能归因于染色质结构(例如，异染色质)或转录调节元件(例如，增强子)密切接近于整合位点(Weising等人，(1988) Ann. Rev. Genet. 22 :421-477)。与此同时，转基因在基因组中不同位置处的存在将以不同方式影响植物的总体表型。出于这个原因，经常需要筛选大量事件，以鉴定出以导入的相关基因的最佳表达为特征的事件。例如，已经在植物及在其他生物体中观察到，在事件之间可能存在导入基因的表达水平的巨大差异。在表达的空间或时刻模式方面也可以存在差异，例如，转基因在多种植物组织中相对表达方面的差异，这可能不对应于从存在于导入的基因构建体中的转录调节元件所预期的模式。出于这个原因，常见的是产生数百至数千个不同事件，并从这些事件中筛选出具有合乎需要的转基因表达水平和用于商业目的模式的单一事件。利用常规育种方法，具有合乎需要的转基因表达水平或模式的事件可用于将转基因通过有性远交渐掺至其他遗传背景中。此类杂交的子代维持原始转化体的转基因表达特征。使用这种策略以在充分适应于局部生长条件的众多品种中确保可靠的基因表达。如能够检测特定事件的存在以确定有性杂交体的子代是否含相关的转基因，将是有利的。此外，用于检测特定事件的方法将有助于例如符合要求销售前批准和标注源自重组作物植物的食品的法规，或用于环境监测、在田间监测作物的性状、或监测源自作物收获物的产品、以及用于确保各方主体遵守法规条款或合同条款。可以通过本领域已知的任何核酸检测方法，包括、但不限于聚合酶链反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交法，来检测转基因的存在。这些检测方法通常集中于频繁使用的遗传元件，如启动子、终止子、标记基因等，因为对于许多DNA构建体而言，编码区是可互换的。因此，此类方法可能无法用于区分不同的事件，尤其是使用相同DNA构建体或十分相似的构建体所产生的那些事件，除非已知与插入的异源DNA相邻的侧翼DNA的DNA序列。例如，美国专利No 6，395，485中描述了一种用于检测原种事件GAT-ZMl的事件特异性PCR测定法。因此，期望拥有一种用于鉴定事件DP-004114-3的简单而又有甄别性的方法。
技术实现思路
本专利技术的实施方式涉及用于产生和选择抗昆虫性单子叶农作植物的方法。更具体 地，提供了一种在植物细胞和植物中表达时赋予抗昆虫性的DNA构建体。根据本专利技术的一个方面，提供了一种能够导入宿主细胞中并且在其中复制的DNA构建体，所述DNA构建体在植物细胞和植物中表达时赋予所述植物细胞和植物抗昆虫性。玉米事件DP-004114-3由农杆菌介导的质粒PHP27118转化产生。该事件含有crylF，cry34Abl、cry35Abl和pat基因盒，它们赋予针对某些鳞翅目(Iepidopteran)和鞘翅目(coleopteran)害虫的抵抗性以及对膦丝菌素耐受性。具体而言，第一盒含有截短形式的来自苏云金芽孢杆菌鲇泽变种(Bacillusthuringiensis var. aizawai)的crylF基因。crylF基因的插入赋予针对鳞翅目害虫损害的抗性。CrylF蛋白(SEQ ID NO I)由605个氨基酸组成并且具有大约68kDa的分子量。crylF基因的表达受玉米多聚遍在蛋白启动子控制(Christensen等人，(1992)Plant Mol.Biol. 118(4) :675-89),从而提供CrylF蛋白在玉米中的组成型表达。该区域还包括与天然多聚遍在蛋白启动子相连的5'非翻译区(UTR)和内含子。crylF基因的终止子是来自根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) Ti 质粒 pTil5955 的开放读框 25 (0RF 25)的聚(A)添加信号(Barker 等人，(1983)Plant Mol. Biol. 2 :335-350)。第二盒含有从苏云金芽孢杆菌菌株PS149BS149B1分离的cry34Abl基因(美国专利 No. 6，127，180 ；No. 6，624，145 和 No. 6，340，593)。Cry34Abl 蛋白(SEQ ID NO 2)的长度是123个氨基酸并且具有大约14kDa的分子量。cry34Ab I基因的表达受带有5' UTR和内含子的玉米多聚遍在蛋白启动子的第二副本控制(Christensen等人，1992,上文)。cry34Abl基因的终止子是 PinII 终止子(Keil 等人，(1986)Nucleic Acids Res. 14 :5641-5650 ;An等人，(1989)Plant Cell I :115-22)。第三基因盒含有cry35Abl基因，其也从苏云金芽孢杆菌菌株PS149BS149B1分离而得(美国专利 No. 6，083，499 ；No. 6，548，291 和 No. 6，340，593)。Cry35Abl 蛋白(SEQ IDNO 3)具有383个氨基酸的长度和大约44kDa的分子量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·迪恩，A·L·卢，T·M·诺瓦茨基，D·S·努贝尔，J·C·雷吉斯特三世，C·J·塞隆奇，M·A·P·维拉内罗，J·K·杨，C·X·仲，E·克罗盖，
申请(专利权)人：先锋国际良种公司，纳幕尔杜邦公司，
类型：
国别省市：