本发明专利技术涉及一种检测奶粉中β-内酰胺类抗生素的前处理方法，前处理方法包括沉淀蛋白、固相萃取、氮气吹干、无抗生素液态奶回溶过程。待测奶粉经过特定的前处理，其中的β-内酰胺类抗生素得到浓缩和净化，且由于选用无抗生素液态奶回溶，使处理后的样本适用于微生物试剂盒检测。本发明专利技术还提供了一种将待测奶粉使用上述方法前处理后，使用微生物试剂盒检测其中β-内酰胺类抗生素的检测方法。待测奶粉经过上述方法进行前处理后，可用于β-内酰胺类抗生素的微生物试剂盒检测，且有效降低微生物试剂盒检测的检出限，提高检测的灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于抗生素检测的前处理方法及使用其的检测方法，特别适用于检测奶粉中的β-内酰胺类抗生素。
技术介绍
目前国内外关于奶粉中抗生素的检测方法主要包括液相色谱-质谱法、质谱法和微生物抑制法。微生物抑制法检测抗生素时，常用利普斯50试剂盒(ECLIPSE50)和戴尔沃SP-NT试剂盒(Delvotest SP-NT)进行抗生素检测。其优点能够快速检测且不依赖昂贵的检测仪器。使用微生物试剂盒检测奶粉抗生素时，需先向奶粉样本中加水，将其稀释成复原乳，再用试剂盒检测。利用前述方法使用利普斯50试剂盒检测奶粉中青霉素的检出限为24-32 μ g/kg，利用前述方法使用戴尔沃SP-NT试剂盒检测奶粉中青霉素的检出限为16-24yg/kg。检出限较高，不适用于对灵敏度要求更高的检测。并且由于其样本前处理过程中保留了奶粉中存在的所有抗生素，无法单独检测其中β_内酰胺类抗生素的含量。在国家标准GB-T 21315-2007《动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法》及GB-T 22975-2008《牛奶和奶粉中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林和双氯西林残留量的测定》中，均提到用液相色谱-质谱或质谱法检测牛奶或奶粉中内酰胺类抗生素的方法。检测前牛奶或奶粉的前处理方法均包括沉淀蛋白和固相萃取过程，用以提取和净化样本中的β_内酰胺类抗生素，GB-T21315-2007中的前处理方法还可以对样本中的β _内酰胺类抗生素起到浓缩作用，但经前处理后的样本用于抗生素的微生物试剂盒检测时，空白样本显示阳性，检测结果无意义。专利技术内容本专利技术的目的是专利技术一种奶粉的前处理方法，待测奶粉经过这种方法进行前处理后可使其中含有的β_内酰胺类抗生素得到有效的净化和浓缩，适用于β_内酰胺类抗生素的微生物试剂盒检测。本专利技术的另一目的是专利技术一种奶粉中β_内酰胺类抗生素的检测方法，先对待测奶粉进行前处理，再用微生物试剂盒进行检测。这种检测方法与传统微生物试剂盒检测方法相比，能够单独检测奶粉中β_内酰胺类抗生素，且具有较高的灵敏度。本专利技术提供了一种检测奶粉中β_内酰胺类抗生素的前处理方法，包括如下步骤向待测奶粉中加水并混匀，用乙腈-水溶液提取后，旋转蒸发去除乙腈，得到无乙腈上清液；在无乙腈上清液中加入磷酸盐缓冲液，混匀后过HLB固相萃取柱净化，得到洗脱液；用氮气吹干洗脱液，得到沉淀物；将处理每克待测奶粉产生的沉淀物溶解在O. 5或ImL无抗生素液态奶中，制得待测奶粉的待检测液。在前处理方法的一种示意性实施方式中，其中，乙腈-水溶液中乙腈与水的体积 比为3:1。在前处理方法的一种示意性实施方式中，其中，提取的过程中，离心转速为5000r/min,离心时间为 8min。本专利技术还提供了一种奶粉中内酰胺类抗生素的检测方法，包括如下步骤向待测奶粉中加水并混匀，用乙腈-水溶液提取后，旋转蒸发去除乙腈，得到无乙腈上清液；在无乙腈上清液中加入磷酸盐缓冲液，混匀后过HLB固相萃取柱净化，得到洗脱液；用氮气吹干洗脱液，得到沉淀物；将处理每克待测奶粉产生的沉淀物溶解在O. 5mL无抗生素液态奶中，制待测奶粉的待检测液；以及用利普斯50试剂盒对待检测液进行检测。本专利技术又提供了一种奶粉中β-内酰胺类抗生素的检测方法，包括如下步骤向待测奶粉中加水并混匀，用乙腈-水溶液提取后，旋转蒸发去除乙腈，得到无乙腈上清液；在无乙腈上清液中加入磷酸盐缓冲液，混匀后过HLB固相萃取柱净化，得到洗脱液；用氮气吹干洗脱液，得到沉淀物；将处理每克待测奶粉产生的沉淀物溶解在ImL无抗生素液态奶中，制得待测奶粉的待检测液；和用戴尔沃SP-NT试剂盒对待检测液进行检测。本专利技术的检测奶粉中β -内酰胺类抗生素的前处理方法中，待测奶粉通过沉淀蛋白、固相萃取、氮气吹干及无抗生素液态奶回溶的过程，不仅达到了净化和浓缩的效果，且其最终溶解于无抗生素液态奶，适宜于β-内酰胺类抗生素的微生物试剂盒检测，避免了假阳性结果。并且有效降低了用微生物试剂盒检测奶粉中β-内酰胺类抗生素的检出限。本专利技术的奶粉中内酰胺类抗生素的检测方法通过对奶粉样本进行特定的前处理，降低使用微生物试剂盒检测奶粉中β_内酰胺类抗生素的检出限，使其达到更高的灵敏度，适应快速并且灵敏度较高的奶粉工业化检测。具体实施例方式为了对专利技术的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现结合各实施例具体说明本专利技术。实施例I :一种检测奶粉中β -内酰胺类抗生素的前处理方法。I.仪器设备。离心机，漩涡混合仪，旋转蒸发仪，氮吹仪。2.试剂。乙腈-水溶液取300mL乙腈(液相色谱纯)与IOOmL纯水充分混合。磷酸盐缓冲液准确称量6g磷酸二氢钠，溶解于450mL纯水中，用质量分数为5mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液的pH值为8，加纯水定容至500mL，此溶液需使用前配置。无抗生素复原乳称取12. 5g无抗生素奶粉,用纯水溶解后定容至100mL。活化的HLB固相萃取柱向HLB固相萃取柱中加入3mL甲醇，待液体流干后加入3mL纯水,待液体流干后加入3mL磷酸盐缓冲溶液,待用。3.操作步骤。I)取待测奶粉I. Og于50mL离心管中，加入4mL纯水，于漩涡混合仪上漩涡混匀，再加入20mL乙腈-水溶液混合，高速震荡提取2min后，得到含有沉淀的混合溶液A ;将混合溶液A用离心机5000r/min离心8min，取上清液得到上清液B，将上清液B转移至旋转蒸发瓶中，用旋转蒸发仪45°C下旋转蒸发至约7mL，得到无乙腈上清液C。2)在无乙腈上清液C中加入2mL磷酸盐缓冲液混匀得到溶液D，将溶液D转移至活化的HLB固相萃取柱上，控制溶液D流速小于2mL/min ;再用2mL磷酸盐缓冲液洗涤旋转蒸发瓶得到洗涤液E，将洗涤液E转移到HLB固相萃取柱上，控制洗涤液E的流速小于2mL/min ;用3mL纯水淋洗并抽干HLB固相萃取柱，用4mL乙腈洗脱HLB固相萃取柱得到洗脱液F并收集于15mL离心管中，控制乙腈流速小于2mL/min。3)将洗脱液F用氮吹仪45°C下氮气吹干，得到沉淀物G。4)向沉淀物G中加入O. 5mL无抗生素复原乳，高速震荡溶解2min后，得到待检测液H。实施例2 :另一种检测奶粉中β -内酰胺类抗生素的前处理方法。本实施例参照实施例I执行，其中，步骤4)中无抗生素复原乳的用量为lmL，其余部分与实施例I中所述一致。实施例3 :—种奶粉中β -内酰胺类抗生素的检测方法。 I.试剂。待测奶粉向无抗生素奶粉中添加如表I所示不同比例的青霉素或氨苄西林。微生物试剂盒利普斯50试剂盒。无抗生素复原乳称取12. 5g无抗生素奶粉,用纯水溶解后定容至100mL。待测奶粉的复原乳(复原乳R):称取12. 5g待测奶粉，用纯水溶解后定容至100mL。2.操作步骤。I)根据实施例I所述的前处理方法对待测奶粉进行前处理得到待检测液H。同时，为证明本专利技术的技术效果，将待测奶粉用水稀释成复原乳(复原乳R)作为对照实验。2)在利普斯50试剂盒的微孔板的微孔中分别加入100μ L待检测液H或复原乳R，同时用无抗生素复原乳作为阴性对照，用胶粘纸密封微孔板，将微孔板放入到预热到65°C的培养器中。3)在阴性对照样变黄时，从微孔侧面观察结果，蓝色为抗生素本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测奶粉中β？内酰胺类抗生素的前处理方法，包括如下步骤： 向待测奶粉中加水并混匀，用乙腈？水溶液提取后，旋转蒸发去除乙腈，得到无乙腈上清液； 在所述无乙腈上清液中加入磷酸盐缓冲液，混匀后过HLB固相萃取柱净化，得到洗脱液； 用氮气吹干所述洗脱液，得到沉淀物； 其特征在于还包括， 将处理每克所述待测奶粉产生的所述沉淀物溶解在0.5或1mL无抗生素液态奶中，制得所述待测奶粉的待检测液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘志楠，李梅，喻东威，赵源，刘晓川，薛志清，杜丽，刘卫星，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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