一种花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法及其应用。本发明专利技术以黄曲酶菌株接种花生种子后进行暗培养，然后采用计量仪器分析天平，将暗培养后的种子称重，最后计算黄曲霉感染指数并进行抗性评价。本发明专利技术可以在较为简单的实验条件下有效的鉴定花生品种对黄曲霉侵染的抗性，尤其适合对花生育种材料作批量筛选，操作简单，抗性鉴定成本低，实验结果准确，精确度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业
，特别涉及一种花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法及其应用。
技术介绍
花生对黄曲霉侵染的抗性是指花生种仁在受到具有产生黄曲霉毒素能力的黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A. parasiticus)侵染后,能够抑制上述真菌产生黄曲霉的特性。具有对黄曲霉侵染抗性的花生品种能够显著降低花生产品中的黄曲霉污染水平。目前鉴定花生对黄曲霉侵染的抗性的方法主要是通过人工接种后检测黄曲霉的含量，其检测方法为薄层色谱法和高效液相色谱法，其操作复杂、样品检测费用高、对设备要求高，不能有效应用于花生育种研究中的抗性鉴定。也有通过人工接种后用肉眼观察估计黄曲霉侵染种仁的数量和程度，虽然操作简单，但是由于视觉观察差异较大，其结果误差大， 不能有效的评价花生对黄曲霉侵染的抗性。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法。本专利技术的另一目的在于提供所述的花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法，包括以下步骤(I)选择侵染能力强的黄曲霉菌株；(2)花生种子的选择、消毒和复水；(3)以黄曲酶菌株接种花生种子；(4)暗培养；(5)将暗培养后的种子称重；(6)计算黄曲霉感染指数；(7)抗性评价；优选的，一种花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法，包括以下步骤(I)选择侵染能力强的黄曲霉菌株进行培养，接种时配制成黄曲霉孢子悬浮液备用；(2)选择健康的花生种子，剥去果皮，取种皮完好的种子作为样品，分装于已编号的培养皿中，用克菌丹对花生种子消毒后用蒸馏水冲洗干净，使种子复水后的含水量为15% 25%，分别称重，培养皿中样品种子的重量记为Wi (如WOl、W02、……);选择高感品种的花生种子作为对照，装在已编号的培养皿中，用克菌丹对花生种子消毒后用蒸馏水冲洗干净，使种子复水后的含水量为15% 25%，称重，培养皿中对照种子的重量记为WCK ；(3)将步骤(I)制备的黄曲霉孢子悬浮液加入步骤(2)中装有样品的培养皿里，转动培养皿使孢子均匀附着在种子表面；对照的操作同样品，区别仅在于加入的是无菌水；(4)将培养皿置于培养箱中进行暗培养；(5)将暗培养后的种子称重，样品种子的重量记为Wif (如W01f、W02f、……)，对照种子的重量记为WCKf ；(6)黄曲霉感染指数(F)按如下公式进行计算绝对感染指数Fi= (Wif-Wi)/Wi相对感染指数Fi= /；(7)抗性评价:F在O O. 150的为高抗(HR)，0. 151 O. 300为中抗(MR)，O. 301 O. 500 为中感(MS)，0. 501 I. 000 为高感(HS)；步骤(I)中所述的侵染能力强的黄曲霉菌株优选为黄曲霉菌株As33. 2890 ；步骤(I)中所述的培养优选在察氏培养基中、28°C黑暗培养；步骤(I)中所述的黄曲霉孢子悬浮液的配制优选采用以下方法进行配制接种时，用无菌水收集培养7 8天的孢子，无菌水重悬，并调整孢子浓度使每毫升水中含有IXlO8个孢子，即得；步骤(2)中所述的分装的量优选为每个培养皿30 50粒；·步骤(2)中所述的高感品种优选为汕油523 ；步骤(3)中所述的黄曲霉孢子悬浮液的加入量优选为每个培养皿加Iml ；步骤(4)中所述的暗培养的温度优选为25 32°C，时间优选为8天。所述的花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法可应用于花生育种研究中的抗性鉴定，尤其适合应用于对花生育种材料作批量筛选。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果本专利技术采用计量仪器分析天平，通过称重的方法检测黄曲霉侵染的程度，可以在较为简单的实验条件下有效的鉴定花生品种对黄曲霉侵染的抗性，尤其适合对花生育种材料作批量筛选，操作简单，抗性鉴定成本低，实验结果精确度高。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例I(I)以侵染力强的黄曲霉菌株As33. 2890 (中国科学院微生物研究所)为接种用菌株；将黄曲霉菌株As33. 2890置于察氏培养基中、28°C黑暗培养，接种时用无菌水收集培养7天的孢子，无菌水重悬，调整孢子浓度使每毫升水中含有I X IO8个孢子，作为黄曲霉孢子悬浮液备用；(2)选择花生品种台山三粒肉(广东省农科院作物研究所)种子，选择健康的花生种子，剥去果皮，选取种皮完好的种子作为样品，分装3个已编号的培养皿中，每个培养皿40粒种子，用克菌丹对花生种子消毒后用蒸馏水冲洗干净，使种子含水量为20%，分别称重，培养皿中样品种子的重量记为W01=22. 1203g、W02=22. 2315g、W03=22. 2543g ;选择高感品种汕油523 (广东省汕头市农业科学研究所)40粒种子作为对照，装在已编号的一个培养皿中，称重,培养皿中对照种子的重量记为WCK=28. 6400g (见表I);将花生种子排列于的无菌培养皿中；(3)往步骤(2)中装有样品的每个培养皿加入Iml步骤(I)制备的黄曲霉孢子悬浮液，转动培养皿使孢子均匀附着在种子表面；对照的操作同样品，区别仅在于加入的是无菌水；(4)将培养皿置于培养箱中，25°C暗培养8天；(5)将暗培养后的种子称重，样品种子的重量分别记为WOlf = 25. 8807g、W02f =28. 4786g、W03f = 25. 7259g (见表 I )，将对照种子的重量记为 WCKf，WCKf = 58. 2824g，相应的 WCK=28. 6400g ；(6)黄曲霉感染指数(F)的计算如样本01，Wi=W01=22. 1203g,W01f = 25. 8807g,WCK=28. 6400g,WCKf = 58. 2824g,代入公式分别计算绝对感染指数和相对感染指数则绝对感染指数RU= (WOlf-WOl)/WOl=O. 1700， 相对感染指数RU= / = 0.1643，依此类推，计算样本02、03的感染指数(见表I)；抗性评价台山三粒肉品种的绝对感染指数和相对感染指数都在O. 151 O. 300之间，属于中抗(HR)。表I台山三粒肉品种的抗性鉴定结果—样本编号种子重接种8天后重量绝对感染指数相对感染指数 0122.120325.88070.17000.16430222.2315 28.4786 0.2810 0.2715 0322.2543 25.72 0.1560 0.1507 CK28.6400_58.2824_1.0350_1.0000实施例2(I)以侵染力强的黄曲霉菌株As33. 2890 (中国科学院微生物研究所)为接种用菌株；将黄曲霉菌株As33. 2890置于察氏培养基中、28°C黑暗培养，接种时用无菌水收集培养7天的孢子，无菌水重悬，调整孢子浓度使每毫升水中含有I X IO8个孢子，作为黄曲霉孢子悬浮液备用；(2)选择花生品种湛秋48 (广东省农科院作物研究所)种子，选择健康的花生种子，剥去果皮，选取种皮完好的种子作为样品，分装3个已编号的培养皿中，每个培养皿30粒种子，用克菌丹对花生种子消毒后用蒸馏水冲洗干净，使种子含水量为20%，分别称重，培养皿中样品种子的重量记本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种花生对黄曲霉侵染的抗性的鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：（1）选择侵染能力强的黄曲霉菌株进行培养，接种时配制成黄曲霉孢子悬浮液备用；（2）选择健康的花生种子，剥去果皮，取种皮完好的种子作为样品，分装于已编号的培养皿中，用克菌丹对花生种子消毒后用蒸馏水冲洗干净，使种子复水后的含水量为15%～25%，分别称重，培养皿中样品种子的重量记为Wi；选择高感品种的花生种子作为对照，装在已编号的培养皿中，用克菌丹对花生种子消毒后用蒸馏水冲洗干净，使种子复水后的含水量为15%～25%，称重，培养皿中对照种子的重量记为WCK；（3）将步骤（1）制备的黄曲霉孢子悬浮液加入步骤（2）中装有样品的培养皿里，转动培养皿使孢子均匀附着在种子表面；对照的操作同样品，区别仅在于加入的是无菌水；（4）将培养皿置于培养箱中进行暗培养；（5）将暗培养后的种子称重，样品种子的重量记为Wif，对照种子的重量记为WCKf；（6）黄曲霉感染指数F按如下公式进行计算：绝对感染指数Fi=(Wif？Wi)/Wi，相对感染指数Fi=[(Wif？Wi)/Wi]/[(WCKf？WCK)/WCK]；（7）抗性评价：F在0～0.150的为高抗，0.151～0.300为中抗，0.301～0.500为中感，0.501～1.000为高感。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周桂元，梁炫强，
申请(专利权)人：广东省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：